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耐药基因blaNDM、mcr-1和cfr三重TaqMan qPCR检测方法的建立及应用 被引量：1
1
作者 杨威 于海航 +7 位作者 王芸萌 王珏 韩昱 胡晓悦 谌志伟 卢军霞 高英 张宁 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期243-248,273,共7页
为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因... 为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因均不能检出;3个耐药基因标准曲线的相关系数(R2)均大于0.999,变异系数(Cv)均低于1%;质粒标准品最低检出限值均为10^(2) copies/μL。使用建立的方法对800份细菌样本进行检测,结果显示,含耐药基因mcr-1样本32份、只含耐药基因blaNDM样本40份、只含耐药基因cfr样本2份;同时含有耐药基因mcr-1和blaNDM的样本8份,未检出同时携带3种耐药基因的细菌样本。以上结果证实,本研究建立的三重荧光定量PCR方法具有灵敏性高、特异性强及稳定性好的优点,适用于临床上快速检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因,为细菌多重耐药基因的检测和控制提供技术支持。 展开更多
关键词 blandm mcr-1 CFR 耐药基因 多重荧光定量PCR
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多光谱法与计算机模拟探究美罗培南与NDM-1之间的相互作用
2
作者 李嘉晨 李娜 +3 位作者 刘地 张嘉昕 程建伟 张椰莉 《光谱学与光谱分析》 北大核心 2025年第8期2386-2392,共7页
产金属β-内酰胺酶细菌的出现和在世界范围内的传播,对治疗耐药细菌感染提出了巨大挑战,特别是新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)。其可使几乎所有的β-内酰胺类抗菌剂失活,且至今临床上没有抑菌剂可用。为了解NDM-1与β-内酰胺类抗菌剂之... 产金属β-内酰胺酶细菌的出现和在世界范围内的传播,对治疗耐药细菌感染提出了巨大挑战,特别是新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)。其可使几乎所有的β-内酰胺类抗菌剂失活,且至今临床上没有抑菌剂可用。为了解NDM-1与β-内酰胺类抗菌剂之间的分子识别和相互作用,利用猝灭光谱、同步荧光、圆二色光谱及分子动力学模拟方法对NDM-1与美罗培南(MER)之间的互作展开探讨。猝灭光谱结果揭示MER可使NDM-1发生由静态猝灭引起的内源性荧光猝灭,且仅影响和改变约一个Trp残基的微环境;同步荧光光谱显示最大发射波长均发生蓝移4.0和2.0 nm,表明Tyr和Trp残基均参与结合过程;圆二色光谱表明NDM-1与MER作用之后,β-片层含量减少,无规则卷曲含量增加,两者之间发生柔性结合;分子动力学结果揭示NDM-1在与MER结合过程中活性口袋附近的β4(40-47)部分变成无规则卷曲,loop2发生明显波动,使得两者发生诱导契合效应,与同步荧光和圆二色光谱结果一致;Trp93和His250氨基酸残基与MER分别于侧链氨基和β-内酰胺环上的甲基形成疏水相互作用,且Ile35、Val73、Ala74、Gly36、Met67等疏水氨基酸残基均与MER形成范德华力,进一步促进结合。本研究对NDM-1与MER的分子识别过程提供了见解,可能为未来设计和研发新的抗生素和抑制剂在分子层面提供新启示和理论依据。 展开更多
关键词 ndm-1 美罗培南 荧光光谱 分子动力学 分子识别
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产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床及分子流行病学特征比较
3
作者 殷丽军 卢露 +2 位作者 何磊燕 武娜娜 王传清 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期556-562,共7页
目的比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。方法回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP,查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试... 目的比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。方法回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP,查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试验及多位点序列分型(MLST)分析,比较产NDM-1和产KPC-2的CRKP临床及分子流行病学特征。结果2017—2020年共收集164株CRKP菌株,其中96株携带bla NDM-1,68株携带bla KPC-2,产NDM-1的CRKP主要分布在新生儿科室,产KPC-2的CRKP以非新生儿科室居多,两组在标本来源、患者年龄、科室分布和预后情况方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);产NDM-1的CRKP菌株以ST 17型和ST 278型为主,分别为40.63%、18.75%;而产KPC-2的CRKP菌株以ST 11为主,达73.53%。产KPC-2的CRKP分离株对头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、呋喃妥因和磷霉素的耐药率均高于产NDM-1的CRKP分离株,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论产NDM-1和产KPC-2的CRKP菌株在临床及分子流行病学方面均存在差异,产KPC-2的CRKP菌株表现出更严重的耐药性,感染KPC-2 CRKP的患者预后较差,应引起临床和感控的重视。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 KPC-2 ndm-1 ST 11 ST 17 CRKP 流行病学特征
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NDM-5-C208A突变大肠埃希菌的构建及大蒜辣素与NDM-5相互作用位点分析 被引量：1
4
作者 叶志滨 王晓明 +5 位作者 吕茜 刘雨桐 金季赜晓 朱馨艺 黄金虎 王丽平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期61-68,共8页
[目的]产新德里金属β-内酰胺酶5(NDM-5)的革兰阴性耐药菌对人畜健康产生巨大威胁。本文旨在初步探究大蒜辣素对NDM-5的抑制作用及其相关作用位点,为临床开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供理论支持。[方法]通过AutoDock模拟分子对接,预测... [目的]产新德里金属β-内酰胺酶5(NDM-5)的革兰阴性耐药菌对人畜健康产生巨大威胁。本文旨在初步探究大蒜辣素对NDM-5的抑制作用及其相关作用位点,为临床开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供理论支持。[方法]通过AutoDock模拟分子对接,预测大蒜辣素与NDM-5的结合位点;构建突变型载体pET21a-NDM-5-C208A,测序验证无误后转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3),通过药敏试验进行突变表型确认;采用微量肉汤棋盘法和时间杀菌曲线测定大蒜辣素与美罗培南对NDM-5突变型细菌的联合抑菌效果。通过体外表达突变蛋白NDM-5-C208A,建立酶活性测定体系,比较大蒜辣素对C208突变型NDM-5和野生型NDM-5酶活性的抑制效果。[结果]经测序证实NDM-5的C208A突变株BL21(DE3)pET21a-NDM-5-C208A构建成功,C208A突变株恢复了对头孢类和碳青霉烯类抗生素的敏感性,且大蒜辣素与美罗培南联用的联合抑菌指数由0.375增加至2,联用表现为独立作用而非协同作用;体外酶活测定结果显示NDM-5-C208A突变不仅使酶活性下降约85%,而且该位点突变导致大蒜辣素对NDM-5失去抑制作用。[结论]Cys208位点是维持NDM-5水解酶活性的关键位点,且大蒜辣素可通过与该位点结合发挥抑制酶活性的作用。该结果为大蒜辣素作为新型β-内酰胺酶抑制剂的开发和应用提供试验依据。 展开更多
关键词 大蒜辣素 ndm-5 美罗培南 酶抑制剂
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ST11肺炎克雷伯菌QL5株携带的质粒pQL5-NDM-KPC的研究 被引量：1
5
作者 马超越 王笑 +2 位作者 刘真真 贾楠 朱元祺 《中国实验诊断学》 2024年第4期401-404,共4页
目的探讨肺炎克雷伯菌QL5株携带编码碳青霉烯酶基因的质粒及其特性。方法基于二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用一系列软件分析菌株的生物学信息。S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳、质粒液相接合试验... 目的探讨肺炎克雷伯菌QL5株携带编码碳青霉烯酶基因的质粒及其特性。方法基于二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用一系列软件分析菌株的生物学信息。S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳、质粒液相接合试验和稳定性试验检测菌株携带的质粒特性。结果生信分析显示:肺炎克雷伯菌QL5株携带的bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)基因位于同一个IncC/IncFII(PHN7A8)/IncR杂合质粒上(命名为pQL5-NDM-KPC);QL5株携带的pQL5-NDM-KPC可发生bla_(NDM-1)基因所在区域的片段丢失。结论经检索,携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)基因位于同一个IncC/IncFII(PHN7A8)/IncR杂合质粒pQL5-NDM-KPC(GenBank序列号:OR253888)上,为国内外首次报道。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 blaKPC-2 blandm-1 质粒
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两株携带bla_(NDM)基因肠杆菌目细菌的分子流行病学特征研究
6
作者 王健 李轶 +1 位作者 白振宇 崔世平 《中国合理用药探索》 CAS 2024年第6期33-39,共7页
目的:了解平顶山某医院两株携带bla_(NDM)基因肠杆菌目细菌临床分离株的分子流行病学特征,为该类病原菌的院内感染预防与控制提供理论依据。方法:收集2022年1~12月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)。先通过聚合酶链反应(PCR)筛... 目的:了解平顶山某医院两株携带bla_(NDM)基因肠杆菌目细菌临床分离株的分子流行病学特征,为该类病原菌的院内感染预防与控制提供理论依据。方法:收集2022年1~12月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)。先通过聚合酶链反应(PCR)筛选携带bla_(NDM)基因的CRE菌株,再对菌株携带的其他耐药基因[包括碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和喹诺酮类耐药相关基因]进行扩增,并测序确认,通过多位点序列分型(MLST)的方法分析相同种属菌株间的亲缘关系。结果:收集的CRE中有2株检测到携带bla_(NDM)基因,其中1株为携带bla_(NDM)-1的弗氏柠檬酸杆菌,另1株为携带bla_(NDM)-5的大肠埃希菌。这两株菌同时携带多个耐药基因,表现为多重耐药。MLST结果显示,产NDM-1型金属酶的弗氏柠檬酸杆菌为ST85型,产NDM-5型金属酶的大肠埃希菌为ST736型,均不是常见流行克隆类型。采用bla_(NDM)探针进行Southern杂交的结果显示,bla_(NDM)-1基因定位于一个~54kb的质粒上,bla_(NDM)-5基因定位于一个~104kb的质粒上,两个携带bla_(NDM)基因的质粒均不能发生接合。结论:首次在平顶山地区报道携带bla_(NDM)基因的CRE菌株;两株菌均同时携带多个耐药基因;bla_(NDM)基因均位于质粒且都与插入序列(IS)移动元件相关,建议进一步加强院感监测及防控,防止耐药菌株的传播和流行。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌 新德里金属β-内酰胺酶(ndm) 感染 流行病学 耐药基因
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广东省某生猪屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌的流行特征
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作者 林宛楠 蔡钟鹏 +8 位作者 卢丽桃 吴敏怡 焦彦翔 岳超 陈家明 冯汇华 韩腾定 高延玲 吕鲁超 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期21-29,共9页
为了探究广东省某生猪屠宰场中替加环素耐药基因tet(X4)和碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)阳性菌的流行特征,本试验从广东省某生猪屠宰场采集94份不同来源样品(55份猪粪便、20份屠宰场环境和19份猪胴体),使用含替加环素和美罗培南的麦康凯琼... 为了探究广东省某生猪屠宰场中替加环素耐药基因tet(X4)和碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)阳性菌的流行特征,本试验从广东省某生猪屠宰场采集94份不同来源样品(55份猪粪便、20份屠宰场环境和19份猪胴体),使用含替加环素和美罗培南的麦康凯琼脂培养基筛选替加环素和美罗培南不敏感菌株;采用PCR方法检测tet(X4)和bla_(NDM)基因阳性菌,并对阳性菌进行菌种鉴定;采用微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定阳性菌的药物敏感性。结果显示,所有样品的tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌检出率分别为93.62%(88/94)和51.06%(48/94),其中tet(X4)基因阳性菌的检出率在猪粪便样品中最高(98.18%,54/55),其次是胴体样品(89.47%,17/19)和环境样品(85.00%,17/20);bla_(NDM)因阳性菌的检出率在环境样品中最高(80.00%,16/20),其次是猪粪便样品(47.27%,26/55)和胴体样品(31.58%,6/19)。2种耐药基因的主要携带菌种均为大肠杆菌,分别占比95.65%(88/92)和74.07%(40/54),另外也检测到tet(X4)阳性的弗格森埃希菌、阴沟肠杆菌和摩氏摩根菌,bla_(NDM)阳性的肺炎克雷伯菌、雷氏普罗威登斯菌和瓜里科州假单胞菌等。药敏试验结果显示,tet(X4)和bla_(NDM)阳性大肠杆菌均为多重耐药菌,其中tet(X4)阳性菌对四环素和氟苯尼考的耐药率为100%;bla_(NDM)阳性菌对头孢噻肟和头孢他啶的耐药率为100%;2种基因阳性菌均对黏菌素较为敏感。结果表明,该屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌污染严重,主要菌种为大肠杆菌。屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌的污染对食品安全和公共卫生构成威胁,提示应加强对生猪屠宰场中耐药菌污染情况调查和长期监测。 展开更多
关键词 tet(X4) bla_(ndm) 屠宰场 细菌耐药性
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去甲泽拉木醛与美罗培南对NDM-1阳性大肠杆菌的协同抗菌作用
8
作者 刘智营 郭岩 +3 位作者 徐蕾 刘洪涛 邓旭明 邱家章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1765-1772,共8页
旨在探究去甲泽拉木醛与美罗培南对New Delhi Metallo-β-lactamase-1(NDM-1)阳性大肠杆菌的协同抗菌作用。首先通过酶活性抑制试验、分子对接试验确定去甲泽拉木醛对NDM-1蛋白水解活性的抑制作用及机制,其次通过棋盘法-最小抑菌浓度试... 旨在探究去甲泽拉木醛与美罗培南对New Delhi Metallo-β-lactamase-1(NDM-1)阳性大肠杆菌的协同抗菌作用。首先通过酶活性抑制试验、分子对接试验确定去甲泽拉木醛对NDM-1蛋白水解活性的抑制作用及机制,其次通过棋盘法-最小抑菌浓度试验、生长曲线试验、药敏试验验证去甲泽拉木醛与碳青霉烯类抗生素美罗培南的协同抑菌作用,进一步通过杀菌曲线试验、活死细菌染色试验、膜完整性试验确定两者的协同杀菌作用,最后通过大蜡螟感染模型验证去甲泽拉木醛与美罗培南的体内治疗效果。结果显示,去甲泽拉木醛能够显著抑制NDM-1的水解活性(IC_(50)=0.32 mg/L),并对美罗培南与NDM-1蛋白的结合产生竞争作用。体外试验表明去甲泽拉木醛与美罗培南有良好的协同抗菌作用,并可通过增加美罗培南对细菌的膜损伤作用发挥协同杀菌作用;体内试验表明去甲泽拉木醛可将美罗培南的保护效果从67%提高至80%。本研究为治疗NDM-1阳性大肠杆菌感染提供了一种治疗策略和抗菌增效剂。 展开更多
关键词 去甲泽拉木醛 ndm-1 美罗培南 协同抗菌
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原薯蓣皂苷体外抗产NDM-1耐碳青霉烯Raoultella ornithinolytica B1645-1B的机制研究
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作者 余春芳 严廷苇 +6 位作者 妥娟 彭紫晶 张思涵 胡景秀 何浩 张涵肃 孟丽雪 《湖北医药学院学报》 CAS 2024年第5期463-469,共7页
目的:研究原薯蓣皂苷(protodioscin,PD)对产碳青霉烯酶NDM-1解鸟氨酸乌拉尔菌(carbapenem-re⁃sistant Raoultella ornithinolytica)B1645-1B的体外抑菌作用及逆转耐药性机制研究。方法:采用微量肉汤稀释法测定PD对B1645-1B的最低抑菌浓... 目的:研究原薯蓣皂苷(protodioscin,PD)对产碳青霉烯酶NDM-1解鸟氨酸乌拉尔菌(carbapenem-re⁃sistant Raoultella ornithinolytica)B1645-1B的体外抑菌作用及逆转耐药性机制研究。方法:采用微量肉汤稀释法测定PD对B1645-1B的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。应用棋盘法测定中药单体PD联合亚胺培南(Imipenem,IMP)对B1645-1B的MIC,计算抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration,FIC)。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测PD作用菌株B1645-1B后NDM-1 mRNA合成。利用MOE(Molecular Operating Environment)软件预测PD与NDM-1蛋白分子对接。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测PD作用纯化后菌株B1645-1B的NDM-1蛋白表达。结果:PD对B1645-1B的MIC为10000μg/mL。PD联合IMP对B1645-1B的FIC为0.75,出现协同作用。PD作用后菌株B1645-1B的NDM-1 mRNA合成抑制和酶活性降低。结论:PD可能是一种很有前途的新型有效的协同抗菌剂及NDM-1酶抑制剂。 展开更多
关键词 原薯蓣皂苷 耐碳青霉烯解鸟氨酸乌拉尔菌 ndm-1 亚胺培南 体外抑菌实验
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鲍曼不动杆菌bla_(NDM-1)基因序列分析及表达 被引量：11
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作者 陈硕 邱少富 +7 位作者 夏力亮 王中强 刘军 柳楠 祝令伟 孙洋 宋宏彬 冯书章 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期471-473,482,共4页
目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至... 目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至大肠杆菌E.coli DH5α,序列测定并进行BLAST分析比对。测定始发菌株与重组菌株对美洛培南的最小抑菌浓度。结果药敏试验结果显示,该菌株对碳青霉烯类及β-内酰胺类抗生素耐药。NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株blaNDM-1基因与HK-01同源性为100%;与KP-05-506相比,在blaNDM-1和trpF之间有24bp的插入。美洛培南最小抑菌浓度测定结果表明,重组菌株E.coli DH5α(pMD18-T::blaNDM-1)MIC值比始发菌株E.coli DH5α升高256倍。结论获得blaNDM-1基因的大肠杆菌能够表达碳青霉烯酶,该基因是碳青霉烯类抗生素耐药性产生的分子基础,该基因具有跨种水平传播的可能。 展开更多
关键词 ndm-1 鲍曼不动杆菌 blandm_-1基因 序列分析
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pH响应型Thanatin纳米抗菌药物的构建及其抑制产NDM-1酶耐药菌活性的研究
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作者 卢泽星 储著飞 +1 位作者 王海波 邓晓军 《中国医药科学》 2024年第20期161-164,共4页
目的 设计一种纳米药物递送系统,以解决抗菌肽Thanatin因静脉注射生物利用度差而不能应用于治疗全身性感染疾病的限制。方法 以葡聚糖为基本骨架制备一种苯硼酸和原酸酯功能化的葡聚糖嵌段聚合物用于包载亲水性的Thanatin。结果 通过氮... 目的 设计一种纳米药物递送系统,以解决抗菌肽Thanatin因静脉注射生物利用度差而不能应用于治疗全身性感染疾病的限制。方法 以葡聚糖为基本骨架制备一种苯硼酸和原酸酯功能化的葡聚糖嵌段聚合物用于包载亲水性的Thanatin。结果 通过氮-硼配位作用实现Thanatin的有效封装,得到了一种粒径为190.8 nm、包封率和载药量分别为73.2%和11.6%的纳米药物;该纳米药物细胞毒性低,在pH为5.5、6.5的PBS中的半数释放时间分别为10 min和25 min,累积释放率超过90%。相对于游离的Thanatin,Thanatin纳米药物对产新德里金属-β-内酰胺酶-1(NDM-1)大肠杆菌感染所致败血症小鼠的治疗效果得到显著增强。结论对Thanatin进行纳米封装可增强循环稳定性,从而提高对败血症小鼠的治疗效果。 展开更多
关键词 ndm-1酶 THANATIN 纳米药物 酸性pH响应 抗菌活性
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同时产碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的猪源大肠埃希氏菌的鉴定及耐药性研究 被引量：4
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作者 李海利 郎利敏 +5 位作者 张青娴 游一 朱文豪 王治方 张立宪 王克领 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期106-115,共10页
为了解携带碳青霉烯酶NDM-1及其亚型在猪场的流行情况,对来自猪场产房仔猪腹泻病例分离鉴定的87株大肠杆菌进行了碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的耐药基因扩增及测序。从87株大肠杆菌中分离鉴定出一株同时携带碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的大肠埃... 为了解携带碳青霉烯酶NDM-1及其亚型在猪场的流行情况,对来自猪场产房仔猪腹泻病例分离鉴定的87株大肠杆菌进行了碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的耐药基因扩增及测序。从87株大肠杆菌中分离鉴定出一株同时携带碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的大肠埃希菌(Escherichia coli),并命名为HN2106。为深入了解HN2106全基因组及其携带的质粒和耐药基因情况,对NH2106进行了16S rRNA菌种鉴定,bla耐药基因确认,全基因组测序,应用BLAST和MEGA软件对序列进行生物信息学分析、系统进化树分析。结果显示,该菌株含有7个质粒(plasmid A、plasmid B、plasmid C、plasmid D、plasmid E、plasmid F 和plasmid G),3种类型,分别为Col、IncFII、IncQ1。同时携带NDM-1和NDM-5基因,属B族β-内酰胺酶,其中bla位于质粒pNDM-HN2106(plasmid C)上,bla位于质粒pNDM5-HN2106(plasmid B)上,分别介导bla和bla耐药基因,是耐药菌传播的重要载体。全基因组耐药基因预测HN2106同时还携带21种类型的抗生素耐药基因。对HN2106菌株进行了85种抗菌药物敏感性测试,结果显示,HN2106菌株对亚胺培南、青霉素G等均耐药,对磺胺甲恶唑、头孢美唑等敏感。研究结果表明,养殖场NDM-1耐药质粒是NDM-1及其亚型耐药基因的重要载体,对养殖产业健康养殖和公共卫生安全带来较大隐患和威胁,应加强抗菌药物的合理应用和感染的防控措施,重视细菌耐药性的监测工作,以期为临床耐药菌株感染的防治提供理论参考。 展开更多
关键词 碳青霉烯酶 ndm-1 ndm-5 大肠埃希氏菌 细菌耐药
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人类与病原菌的军备竞赛:NDM-1耐药基因与超级细菌 被引量：17
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作者 孙明伟 郑焙文 +1 位作者 高福 朱宝利 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1461-1472,共12页
在人类历史上,每一次诸如鼠疫和肺结核病等瘟疫的大流行,都曾给人类的生存带来巨大的威胁。抗生素的应用使人类掌握了抵抗细菌感染的锐利"武器",但同时病原菌也通过突变和水平基因转移等方式产生了诸多耐药基因,从而获得了应... 在人类历史上,每一次诸如鼠疫和肺结核病等瘟疫的大流行,都曾给人类的生存带来巨大的威胁。抗生素的应用使人类掌握了抵抗细菌感染的锐利"武器",但同时病原菌也通过突变和水平基因转移等方式产生了诸多耐药基因,从而获得了应对抗生素杀伤的坚固"盾牌";于是人类又不断地开发新式抗生素"武器"来破解病原菌的耐药"盾牌"——一场"军备竞赛"愈演愈烈。近来研究发现,携带编码NDM-1基因的耐药质粒不仅可以在细菌间转移,而且能使所在宿主菌成为可以耐受几乎全部抗生素的超级细菌。但是,凭借着日益进步的科技和医学,以及科学的用药策略,我们一定可以再次战胜超级细菌。 展开更多
关键词 ndm-1 超级细菌 军备竞赛 耐药基因
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NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其对小鼠菌血症的治疗研究 被引量：9
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作者 路荣 顾敬敏 +5 位作者 刘晓贺 李跃 韩东 宋军 冯新 韩文瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1747-1751,共5页
噬菌体疗法在对抗多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。本研究从污水中分离到一株新的噬菌体，命名为NKP-1，并对噬菌体NKP-1的主要生物学特性进行研究。通过电镜观察确定NKP-1为短尾噬菌体，裂解试验表明该噬菌体为烈性... 噬菌体疗法在对抗多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。本研究从污水中分离到一株新的噬菌体，命名为NKP-1，并对噬菌体NKP-1的主要生物学特性进行研究。通过电镜观察确定NKP-1为短尾噬菌体，裂解试验表明该噬菌体为烈性噬菌体，具有很高的增值效率。体外试验表明它能够快速感染超强耐药的肺炎克雷伯菌株BAA-2146（NDM-1）并将其裂解。通过腹腔注射单一剂量的NKP-1（2×10^7pfu／mL）就可以有效地保护BAA-2146（4×10^9cfu／mL）感染引起的小鼠菌血症模型。在肺炎克雷伯菌BAA-2146与噬菌体NKP-1体外共同培养的过程中，我们分离到对该噬菌体具有抗性的突变菌株，通过动物试验确定该突变株表现为极低的毒力，且不影响NKP-1的治疗效果。本研究为利用噬菌体治疗多重耐药菌感染提供了理论基础与试验依据。 展开更多
关键词 ndm-1 多重耐药性 肺炎克雷伯菌 噬菌体
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产NDM-1金属β-内酰胺酶阴沟肠杆菌耐药传递机制及药物敏感性分析 被引量：7
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作者 林琳 王晓楠 +1 位作者 肖晓光 刘爽 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第22期3361-3365,3372,共6页
目的研究碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌的耐药机制和耐药传递,分析其药物敏感性。方法收集大连医科大学附属第一医院2015年8月-2016年8月碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌9株,利用改良Hodge试验对碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌进行表型确证,EDTA纸片增效试验... 目的研究碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌的耐药机制和耐药传递,分析其药物敏感性。方法收集大连医科大学附属第一医院2015年8月-2016年8月碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌9株,利用改良Hodge试验对碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌进行表型确证,EDTA纸片增效试验检测金属酶。PCR方法检测碳青霉烯酶基因,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因,AmpC beta-内酰胺酶(AmpC酶)基因,质粒介导的喹诺酮类耐药基因以及氨基糖苷类耐药基因。通过质粒接合实验分析碳青霉烯耐药性在种属间的传递。结果改良Hodge试验阳性2株,EDTA纸片增效试验阳性9株,均携带NDM-1基因,ESBLs基因TEM、CTX-M、SHV阳性菌株数分别为8株、3株、4株。喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib-cr阳性菌株数分别为5株、2株、1株、7株。质粒接合实验表明NDM-1基因可通过质粒在不同种属间传递。对左氧氟沙星、环丙沙星、妥布霉素、四环素的敏感率较低,均为11.1%。对阿米卡星、庆大霉素、多黏菌素B、替加环素及磷霉素的敏感率较高,分别为88.9%、66.7%、88.9%、100%、100%。结论碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌为NDM-1型,耐药性可通过质粒进行传递,需引起重视,应根据药敏结果合理应用抗菌药物,同时加强院感的防控。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 碳青霉烯耐药 ndm-1 耐药传播机制 药物敏感性
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“超级细菌”NDM-1的发现及研究进展 被引量：10
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作者 房咪 郑珩 顾觉奋 《国外医药（抗生素分册）》 CAS 2011年第6期253-258,共6页
近日,"超级细菌"掀起了即甲型H1N1流感后全球的又一新"浪潮",引起人们的一阵恐慌。"超级细菌"是具有多重耐药性细菌的总称,NDM-1是细菌携带的一种抗性基因,具有极强的耐药性,能水解几乎所有的β-内酰胺... 近日,"超级细菌"掀起了即甲型H1N1流感后全球的又一新"浪潮",引起人们的一阵恐慌。"超级细菌"是具有多重耐药性细菌的总称,NDM-1是细菌携带的一种抗性基因,具有极强的耐药性,能水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,该细菌属一种新型的"超级细菌"。目前临床治疗受到极大的威胁,新型抗生素的研发迫在眉睫。本文就其发现、特点、目前临床用药、序列分析、结构预测及新药物设计方面做一概述。 展开更多
关键词 “超级细菌” ndm—1 序列分析
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快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价 被引量：11
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作者 张苑怡 武娜 +2 位作者 朱宝利 陈蕾 朱玉琢 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1232-1238,共7页
基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设... 基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6拷贝/反应。在特异性实验中,以4株病原菌(肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应。文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 ndm-1基因 环介导恒温扩增技术 快速检测 Β-内酰胺酶 聚合酶链式反应
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泛耐药细菌NDM-1基因Taqman PCR快速检测方法的建立 被引量：4
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作者 杜昕颖 汪舟佳 +6 位作者 王玉飞 邱少富 袁静 宋宏彬 孙岩松 陈泽良 黄留玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期81-85,共5页
产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量... 产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量PCR法。方法：根据NDM．1基因序列，设计引物和Taqman探针，建立Taqman探针实时定量PCR检测方法，对方法的敏感性、重复性和特异性进行了评价，并对临床模拟标本中的产NDM-1细菌进行了检测。结果：该方法在9个浓度（5×10^0～5X10^8拷贝）梯度范围内呈现很好的线性关系，检测灵敏度可达5个质粒拷贝，与不含NDM-1基因的肠杆菌无交叉反应，对尿液模拟标本的检出限为10CFU，可快速准确地检出临床样本中分离的NDM-1阳性菌株。结论：建立的Taqman探针实时荧光定量PCR法具有快速、简单、灵敏度高和特异性强等优点，可应用于临床上泛耐药细菌NDM．1基因的核酸检测。 展开更多
关键词 ndm-1 荧光定量PCR 检测
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河北省发现携带NDM-1型金属β-内酰胺酶基因的阴沟肠杆菌临床分离株 被引量：4
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作者 时东彦 曹丽君 +3 位作者 杨靖 李志荣 强翠新 赵建宏 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第3期32-34,共3页
目的 对河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌进行筛查与鉴定,以了解其耐药机制.方法 选择2011年10月～2012年10月河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌临床菌株,采用纸片扩散法和E-test法检测耐药性,... 目的 对河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌进行筛查与鉴定,以了解其耐药机制.方法 选择2011年10月～2012年10月河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌临床菌株,采用纸片扩散法和E-test法检测耐药性,改良Hodge试验和金属酶试验检测产酶类型,聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因并进行测序.结果 50株耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌中检测到一株对亚胺培南和美洛培南高度耐药的阴沟肠杆菌,亚胺培南和美洛培南对阴沟肠杆菌的抑菌环直径均为6 mm.E-test法测得亚胺培南和美洛培南的MIC均＞32 μg/ml,改良Hodge试验结果阳性,金属酶表型初筛试验阳性.经上海生物工程公司ABI测序仪测序后,并与GeneBank比对,表明与NDM-1基因有99%的相似性.结论 河北省发现1株对碳青霉烯类抗生素高度耐药的阴沟肠杆菌,经进一步试验证实为产NDM-1金属酶. 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 碳青霉烯类抗生素 ndm-1
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