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耐药基因blaNDM、mcr-1和cfr三重TaqMan qPCR检测方法的建立及应用 被引量：1
1
作者 杨威 于海航 +7 位作者 王芸萌 王珏 韩昱 胡晓悦 谌志伟 卢军霞 高英 张宁 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期243-248,273,共7页
为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因... 为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因均不能检出;3个耐药基因标准曲线的相关系数(R2)均大于0.999,变异系数(Cv)均低于1%;质粒标准品最低检出限值均为10^(2) copies/μL。使用建立的方法对800份细菌样本进行检测,结果显示,含耐药基因mcr-1样本32份、只含耐药基因blaNDM样本40份、只含耐药基因cfr样本2份;同时含有耐药基因mcr-1和blaNDM的样本8份,未检出同时携带3种耐药基因的细菌样本。以上结果证实,本研究建立的三重荧光定量PCR方法具有灵敏性高、特异性强及稳定性好的优点,适用于临床上快速检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因,为细菌多重耐药基因的检测和控制提供技术支持。 展开更多
关键词 blandm mcr-1 CFR 耐药基因 多重荧光定量PCR
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碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA筛选方法的建立
2
作者 蔡鑫 姚晓慧 +10 位作者 聂万森 杜汉宇 周黎笋 李宗杰 魏建超 刘珂 邵东华 邱亚峰 马志永 李蓓蓓 夏利宁 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期94-100,共7页
基于细菌青霉素结合蛋白(PBP)与碳青霉烯药物完整结构和水解产物的亲和力差异极大的原理,建立一种新型的筛选碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA方法。BSA与美罗培南的偶联物(BSA-MEM)包被于ELISA板封闭后,将待筛化合物与NDM-1蛋白同时加入反... 基于细菌青霉素结合蛋白(PBP)与碳青霉烯药物完整结构和水解产物的亲和力差异极大的原理,建立一种新型的筛选碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA方法。BSA与美罗培南的偶联物(BSA-MEM)包被于ELISA板封闭后,将待筛化合物与NDM-1蛋白同时加入反应,随后加入生物素标记的PBP蛋白(PBP-BIO),PBP-BIO可与未被水解的BSA-MEM进行结合,通过生物素-链霉亲和素系统产生的信号来表征结合的PBP蛋白以及未被水解的BSA-MEM的量,从而间接指征待筛化合物对NDM-1是否有抑制活性。通过原核表达系统,表达纯化碳青霉烯酶NDM-1,利用EDC偶联法和生物素标记法,制备BSA-MEM和PBP-BIO的偶联物,采用棋盘滴定法确定BSA-MEM量、NDM-1、待筛化合物和PBP-BIO的最佳工作浓度和反应时间等参数,并利用该方法对FDA批准药物库中的300余种化合物进行初步筛选。结果显示,最佳ELISA方案为:BSA-MEM偶联物包被量为1μg、100μL/孔;封闭液为1%的牛血清白蛋白,作用时间为2 h;NDM-1使用量为4μg;待筛化合物的使用浓度为30μmol/L,反应时间为15 min;PBP-BIO稀释度为1:1000,反应时间为15 min;SA-HRP作用时间为30 min,稀释度为1:3000;TMB显色时间为15 min。利用上述建立的ELISA方法,成功从FDA批准药物库中筛选到两个潜在的NDM-1抑制剂。本研究成功建立了一种新型的NDM-1抑制剂的ELISA筛选方法,具有快速和高通量的优点,为NDM-1抑制剂的筛选提供了新方法和新思路。 展开更多
关键词 碳青霉烯酶 ndm-1 ELISA 抑制剂 高通量筛选
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多光谱法与计算机模拟探究美罗培南与NDM-1之间的相互作用
3
作者 李嘉晨 李娜 +3 位作者 刘地 张嘉昕 程建伟 张椰莉 《光谱学与光谱分析》 北大核心 2025年第8期2386-2392,共7页
产金属β-内酰胺酶细菌的出现和在世界范围内的传播,对治疗耐药细菌感染提出了巨大挑战,特别是新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)。其可使几乎所有的β-内酰胺类抗菌剂失活,且至今临床上没有抑菌剂可用。为了解NDM-1与β-内酰胺类抗菌剂之... 产金属β-内酰胺酶细菌的出现和在世界范围内的传播,对治疗耐药细菌感染提出了巨大挑战,特别是新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)。其可使几乎所有的β-内酰胺类抗菌剂失活,且至今临床上没有抑菌剂可用。为了解NDM-1与β-内酰胺类抗菌剂之间的分子识别和相互作用,利用猝灭光谱、同步荧光、圆二色光谱及分子动力学模拟方法对NDM-1与美罗培南(MER)之间的互作展开探讨。猝灭光谱结果揭示MER可使NDM-1发生由静态猝灭引起的内源性荧光猝灭,且仅影响和改变约一个Trp残基的微环境;同步荧光光谱显示最大发射波长均发生蓝移4.0和2.0 nm,表明Tyr和Trp残基均参与结合过程;圆二色光谱表明NDM-1与MER作用之后,β-片层含量减少,无规则卷曲含量增加,两者之间发生柔性结合;分子动力学结果揭示NDM-1在与MER结合过程中活性口袋附近的β4(40-47)部分变成无规则卷曲,loop2发生明显波动,使得两者发生诱导契合效应,与同步荧光和圆二色光谱结果一致;Trp93和His250氨基酸残基与MER分别于侧链氨基和β-内酰胺环上的甲基形成疏水相互作用,且Ile35、Val73、Ala74、Gly36、Met67等疏水氨基酸残基均与MER形成范德华力,进一步促进结合。本研究对NDM-1与MER的分子识别过程提供了见解,可能为未来设计和研发新的抗生素和抑制剂在分子层面提供新启示和理论依据。 展开更多
关键词 ndm-1 美罗培南 荧光光谱 分子动力学 分子识别
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鲍曼不动杆菌bla_(NDM-1)基因序列分析及表达 被引量：11
4
作者 陈硕 邱少富 +7 位作者 夏力亮 王中强 刘军 柳楠 祝令伟 孙洋 宋宏彬 冯书章 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期471-473,482,共4页
目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至... 目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至大肠杆菌E.coli DH5α,序列测定并进行BLAST分析比对。测定始发菌株与重组菌株对美洛培南的最小抑菌浓度。结果药敏试验结果显示,该菌株对碳青霉烯类及β-内酰胺类抗生素耐药。NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株blaNDM-1基因与HK-01同源性为100%;与KP-05-506相比,在blaNDM-1和trpF之间有24bp的插入。美洛培南最小抑菌浓度测定结果表明,重组菌株E.coli DH5α(pMD18-T::blaNDM-1)MIC值比始发菌株E.coli DH5α升高256倍。结论获得blaNDM-1基因的大肠杆菌能够表达碳青霉烯酶,该基因是碳青霉烯类抗生素耐药性产生的分子基础,该基因具有跨种水平传播的可能。 展开更多
关键词 ndm-1 鲍曼不动杆菌 blandm_-1基因 序列分析
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同时产碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的猪源大肠埃希氏菌的鉴定及耐药性研究 被引量：4
5
作者 李海利 郎利敏 +5 位作者 张青娴 游一 朱文豪 王治方 张立宪 王克领 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期106-115,共10页
为了解携带碳青霉烯酶NDM-1及其亚型在猪场的流行情况,对来自猪场产房仔猪腹泻病例分离鉴定的87株大肠杆菌进行了碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的耐药基因扩增及测序。从87株大肠杆菌中分离鉴定出一株同时携带碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的大肠埃... 为了解携带碳青霉烯酶NDM-1及其亚型在猪场的流行情况,对来自猪场产房仔猪腹泻病例分离鉴定的87株大肠杆菌进行了碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的耐药基因扩增及测序。从87株大肠杆菌中分离鉴定出一株同时携带碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的大肠埃希菌(Escherichia coli),并命名为HN2106。为深入了解HN2106全基因组及其携带的质粒和耐药基因情况,对NH2106进行了16S rRNA菌种鉴定,bla耐药基因确认,全基因组测序,应用BLAST和MEGA软件对序列进行生物信息学分析、系统进化树分析。结果显示,该菌株含有7个质粒(plasmid A、plasmid B、plasmid C、plasmid D、plasmid E、plasmid F 和plasmid G),3种类型,分别为Col、IncFII、IncQ1。同时携带NDM-1和NDM-5基因,属B族β-内酰胺酶,其中bla位于质粒pNDM-HN2106(plasmid C)上,bla位于质粒pNDM5-HN2106(plasmid B)上,分别介导bla和bla耐药基因,是耐药菌传播的重要载体。全基因组耐药基因预测HN2106同时还携带21种类型的抗生素耐药基因。对HN2106菌株进行了85种抗菌药物敏感性测试,结果显示,HN2106菌株对亚胺培南、青霉素G等均耐药,对磺胺甲恶唑、头孢美唑等敏感。研究结果表明,养殖场NDM-1耐药质粒是NDM-1及其亚型耐药基因的重要载体,对养殖产业健康养殖和公共卫生安全带来较大隐患和威胁,应加强抗菌药物的合理应用和感染的防控措施,重视细菌耐药性的监测工作,以期为临床耐药菌株感染的防治提供理论参考。 展开更多
关键词 碳青霉烯酶 ndm-1 ndm-5 大肠埃希氏菌 细菌耐药
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人类与病原菌的军备竞赛:NDM-1耐药基因与超级细菌 被引量：17
6
作者 孙明伟 郑焙文 +1 位作者 高福 朱宝利 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1461-1472,共12页
在人类历史上,每一次诸如鼠疫和肺结核病等瘟疫的大流行,都曾给人类的生存带来巨大的威胁。抗生素的应用使人类掌握了抵抗细菌感染的锐利"武器",但同时病原菌也通过突变和水平基因转移等方式产生了诸多耐药基因,从而获得了应... 在人类历史上,每一次诸如鼠疫和肺结核病等瘟疫的大流行,都曾给人类的生存带来巨大的威胁。抗生素的应用使人类掌握了抵抗细菌感染的锐利"武器",但同时病原菌也通过突变和水平基因转移等方式产生了诸多耐药基因,从而获得了应对抗生素杀伤的坚固"盾牌";于是人类又不断地开发新式抗生素"武器"来破解病原菌的耐药"盾牌"——一场"军备竞赛"愈演愈烈。近来研究发现,携带编码NDM-1基因的耐药质粒不仅可以在细菌间转移,而且能使所在宿主菌成为可以耐受几乎全部抗生素的超级细菌。但是,凭借着日益进步的科技和医学,以及科学的用药策略,我们一定可以再次战胜超级细菌。 展开更多
关键词 ndm-1 超级细菌 军备竞赛 耐药基因
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NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其对小鼠菌血症的治疗研究 被引量：9
7
作者 路荣 顾敬敏 +5 位作者 刘晓贺 李跃 韩东 宋军 冯新 韩文瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1747-1751,共5页
噬菌体疗法在对抗多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。本研究从污水中分离到一株新的噬菌体，命名为NKP-1，并对噬菌体NKP-1的主要生物学特性进行研究。通过电镜观察确定NKP-1为短尾噬菌体，裂解试验表明该噬菌体为烈性... 噬菌体疗法在对抗多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。本研究从污水中分离到一株新的噬菌体，命名为NKP-1，并对噬菌体NKP-1的主要生物学特性进行研究。通过电镜观察确定NKP-1为短尾噬菌体，裂解试验表明该噬菌体为烈性噬菌体，具有很高的增值效率。体外试验表明它能够快速感染超强耐药的肺炎克雷伯菌株BAA-2146（NDM-1）并将其裂解。通过腹腔注射单一剂量的NKP-1（2×10^7pfu／mL）就可以有效地保护BAA-2146（4×10^9cfu／mL）感染引起的小鼠菌血症模型。在肺炎克雷伯菌BAA-2146与噬菌体NKP-1体外共同培养的过程中，我们分离到对该噬菌体具有抗性的突变菌株，通过动物试验确定该突变株表现为极低的毒力，且不影响NKP-1的治疗效果。本研究为利用噬菌体治疗多重耐药菌感染提供了理论基础与试验依据。 展开更多
关键词 ndm-1 多重耐药性 肺炎克雷伯菌 噬菌体
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产NDM-1金属β-内酰胺酶阴沟肠杆菌耐药传递机制及药物敏感性分析 被引量：7
8
作者 林琳 王晓楠 +1 位作者 肖晓光 刘爽 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第22期3361-3365,3372,共6页
目的研究碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌的耐药机制和耐药传递,分析其药物敏感性。方法收集大连医科大学附属第一医院2015年8月-2016年8月碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌9株,利用改良Hodge试验对碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌进行表型确证,EDTA纸片增效试验... 目的研究碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌的耐药机制和耐药传递,分析其药物敏感性。方法收集大连医科大学附属第一医院2015年8月-2016年8月碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌9株,利用改良Hodge试验对碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌进行表型确证,EDTA纸片增效试验检测金属酶。PCR方法检测碳青霉烯酶基因,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因,AmpC beta-内酰胺酶(AmpC酶)基因,质粒介导的喹诺酮类耐药基因以及氨基糖苷类耐药基因。通过质粒接合实验分析碳青霉烯耐药性在种属间的传递。结果改良Hodge试验阳性2株,EDTA纸片增效试验阳性9株,均携带NDM-1基因,ESBLs基因TEM、CTX-M、SHV阳性菌株数分别为8株、3株、4株。喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib-cr阳性菌株数分别为5株、2株、1株、7株。质粒接合实验表明NDM-1基因可通过质粒在不同种属间传递。对左氧氟沙星、环丙沙星、妥布霉素、四环素的敏感率较低,均为11.1%。对阿米卡星、庆大霉素、多黏菌素B、替加环素及磷霉素的敏感率较高,分别为88.9%、66.7%、88.9%、100%、100%。结论碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌为NDM-1型,耐药性可通过质粒进行传递,需引起重视,应根据药敏结果合理应用抗菌药物,同时加强院感的防控。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 碳青霉烯耐药 ndm-1 耐药传播机制 药物敏感性
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浙江省首次检出1株携带NDM-1基因的肺炎克雷伯菌 被引量：4
9
作者 朱水荣 商小春 +3 位作者 帅慧群 潘军航 梅玲玲 张政 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期30-34,共5页
目的对浙江省不同地区上送的临床分离株进行NDM-1基因筛检,初探浙江省NDM-1基因携带菌阳性菌存在现状。方法应用TaqMan-MGB荧光定量PCR方法对2013年度收集的所有临床株进行NDM-1基因筛检;利用普通PCR方法对阳性株进行NDM-1基因测序、MLS... 目的对浙江省不同地区上送的临床分离株进行NDM-1基因筛检,初探浙江省NDM-1基因携带菌阳性菌存在现状。方法应用TaqMan-MGB荧光定量PCR方法对2013年度收集的所有临床株进行NDM-1基因筛检;利用普通PCR方法对阳性株进行NDM-1基因测序、MLST分型及其它30种耐药基因检测;使用VITEK 2Compact高级专家系统对阳性株进行微生物鉴定与耐药表型MIC测试;采用改良Hodge实验及亚胺培南-EDTA双纸片法协同试验,分别对阳性株进行碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶检测。结果经对1 450株菌株进行筛检,仅从1株来自疑似病毒腹泻11月大幼儿患者粪便中分离的肺炎克雷伯菌中检出该基因,基因序列同源性为100%,该菌MLST序列型为ST1416,产碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶,对Levofloxacin、Trimethoprim/Sulfa敏感,对Ciprofloxacin中敏,但对其他18种所检药物均显示耐药,另携带SHV、CTX、DHA、TEM、CMY2、IMP、GES、GIM、OXA-48、SPM、AmpC、aadA1、aacA4、aphA1共14种耐药基因,结果表明该菌株的耐药表型与基因型较为符合。结论本次从肠杆菌科肺炎克雷伯菌中检出NDM-1基因,应为浙江省首次报道,鉴于肠杆菌科细菌耐药速率传播更快,警示相关部门应重视并加强对NDM-1基因携带菌的监测与筛查。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 肠杆菌科 ndm-1基因 耐药基因
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“超级细菌”NDM-1的发现及研究进展 被引量：10
10
作者 房咪 郑珩 顾觉奋 《国外医药（抗生素分册）》 CAS 2011年第6期253-258,共6页
近日,"超级细菌"掀起了即甲型H1N1流感后全球的又一新"浪潮",引起人们的一阵恐慌。"超级细菌"是具有多重耐药性细菌的总称,NDM-1是细菌携带的一种抗性基因,具有极强的耐药性,能水解几乎所有的β-内酰胺... 近日,"超级细菌"掀起了即甲型H1N1流感后全球的又一新"浪潮",引起人们的一阵恐慌。"超级细菌"是具有多重耐药性细菌的总称,NDM-1是细菌携带的一种抗性基因,具有极强的耐药性,能水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,该细菌属一种新型的"超级细菌"。目前临床治疗受到极大的威胁,新型抗生素的研发迫在眉睫。本文就其发现、特点、目前临床用药、序列分析、结构预测及新药物设计方面做一概述。 展开更多
关键词 “超级细菌” ndm—1 序列分析
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快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价 被引量：11
11
作者 张苑怡 武娜 +2 位作者 朱宝利 陈蕾 朱玉琢 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1232-1238,共7页
基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设... 基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6拷贝/反应。在特异性实验中,以4株病原菌(肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应。文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 ndm-1基因 环介导恒温扩增技术 快速检测 Β-内酰胺酶 聚合酶链式反应
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泛耐药细菌NDM-1基因Taqman PCR快速检测方法的建立 被引量：4
12
作者 杜昕颖 汪舟佳 +6 位作者 王玉飞 邱少富 袁静 宋宏彬 孙岩松 陈泽良 黄留玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期81-85,共5页
产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量... 产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量PCR法。方法：根据NDM．1基因序列，设计引物和Taqman探针，建立Taqman探针实时定量PCR检测方法，对方法的敏感性、重复性和特异性进行了评价，并对临床模拟标本中的产NDM-1细菌进行了检测。结果：该方法在9个浓度（5×10^0～5X10^8拷贝）梯度范围内呈现很好的线性关系，检测灵敏度可达5个质粒拷贝，与不含NDM-1基因的肠杆菌无交叉反应，对尿液模拟标本的检出限为10CFU，可快速准确地检出临床样本中分离的NDM-1阳性菌株。结论：建立的Taqman探针实时荧光定量PCR法具有快速、简单、灵敏度高和特异性强等优点，可应用于临床上泛耐药细菌NDM．1基因的核酸检测。 展开更多
关键词 ndm-1 荧光定量PCR 检测
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河北省发现携带NDM-1型金属β-内酰胺酶基因的阴沟肠杆菌临床分离株 被引量：4
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作者 时东彦 曹丽君 +3 位作者 杨靖 李志荣 强翠新 赵建宏 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第3期32-34,共3页
目的 对河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌进行筛查与鉴定,以了解其耐药机制.方法 选择2011年10月～2012年10月河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌临床菌株,采用纸片扩散法和E-test法检测耐药性,... 目的 对河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌进行筛查与鉴定,以了解其耐药机制.方法 选择2011年10月～2012年10月河北省细菌耐药监测网收集的耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌临床菌株,采用纸片扩散法和E-test法检测耐药性,改良Hodge试验和金属酶试验检测产酶类型,聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因并进行测序.结果 50株耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌中检测到一株对亚胺培南和美洛培南高度耐药的阴沟肠杆菌,亚胺培南和美洛培南对阴沟肠杆菌的抑菌环直径均为6 mm.E-test法测得亚胺培南和美洛培南的MIC均＞32 μg/ml,改良Hodge试验结果阳性,金属酶表型初筛试验阳性.经上海生物工程公司ABI测序仪测序后,并与GeneBank比对,表明与NDM-1基因有99%的相似性.结论 河北省发现1株对碳青霉烯类抗生素高度耐药的阴沟肠杆菌,经进一步试验证实为产NDM-1金属酶. 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 碳青霉烯类抗生素 ndm-1
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NDM-1基因的克隆表达及生物信息学分析 被引量：3
14
作者 夏力亮 孙洋 +9 位作者 张瑞 陈硕 邱少富 王中强 柳楠 刘军 祝令伟 纪雪 宋宏斌 冯书章 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期816-820,共5页
目的克隆鲍曼不动杆菌blaNDM-1基因,对NDM-1进行生物信息学分析,表达并纯化重组NDM-1蛋白。方法 PCR扩增鲍曼不动杆菌NDM-1的blaNDM-1基因,克隆至pMAL-p2X质粒,构建重组原核表达质粒pMAL-p2X∶∶NDM-1,对NDM-1进行生物信息学分析。将重... 目的克隆鲍曼不动杆菌blaNDM-1基因,对NDM-1进行生物信息学分析,表达并纯化重组NDM-1蛋白。方法 PCR扩增鲍曼不动杆菌NDM-1的blaNDM-1基因,克隆至pMAL-p2X质粒,构建重组原核表达质粒pMAL-p2X∶∶NDM-1,对NDM-1进行生物信息学分析。将重组表达质粒转化大肠杆菌Tb1,IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白MBP-NDM-1。结果重组表达质粒pMAL-p2X∶∶NDM-1经双酶切和测序证实构建正确;生物信息学分析表明,NDM-1的相对分子质量为28 487.86,等电点为5.89,1～28氨基酸为NDM-1的信号肽序列,与其他亚型金属β-内酰胺酶同源性很低;表达的重组蛋白相对分子质量约73 000,主要以可溶形式表达;纯化后的重组蛋白浓度为1.72 mg/ml。结论表达并纯化了可溶性重组蛋白MBP-NDM-1,为后续NDM-1活性功能及其抑制剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 ndm-1 克隆 分子 基因表达 生物信息学
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细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究 被引量：3
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作者 冯伟 欧阳净 +3 位作者 程林 袁慊 王瑜 孙凤军 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第5期477-481,共5页
目的探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibit... 目的探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功,电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性,TaqMan RT-PCR检测可快速准确地为临床治疗提供依据。 展开更多
关键词 ndm-1 质粒 碳青霉烯酶 TaqMan RT-PCR 耐药
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弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析 被引量：5
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作者 林迪 方颍 +1 位作者 张嵘 陈功祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第6期423-427,共5页
目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性... 目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。 展开更多
关键词 弗劳地枸橼酸杆菌 碳青霉烯酶 ndm-1 KPC-2
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浙江省首次发现ST20型NDM-1鲍曼不动杆菌 被引量：3
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作者 朱水荣 潘军航 +3 位作者 魏兰芬 梅玲玲 张云怡 张政 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第13期1879-1883,共5页
目的对浙江省不同地区上送的分离株进行NDM-1基因筛检,以了解NDM-1基因携带菌存在现状。方法应用定量PCR及PCR分别对菌株进行NDM-1基因筛检、MLST分型及其他耐药基因检测;使用VITEK 2仪器测试MIC耐药表型;运用改良Hodge实验及EDTA-增强... 目的对浙江省不同地区上送的分离株进行NDM-1基因筛检,以了解NDM-1基因携带菌存在现状。方法应用定量PCR及PCR分别对菌株进行NDM-1基因筛检、MLST分型及其他耐药基因检测;使用VITEK 2仪器测试MIC耐药表型;运用改良Hodge实验及EDTA-增强协同确认试验检测碳青霉烯酶表型。结果经对1 617株菌筛检,仅从1株ST20型鲍曼不动杆菌中检出NDM-1基因。该菌对Amikaci、Gentamicin、Tobramycin、Trimethoprim/Sulfa敏感,而对其他15种药物均显示耐药,另携带OXA-23、SPM,CARB,TEM,aadA1,AmpC,aphA1,OXA-51耐药基因。结论浙江省首次检出NDM-1鲍曼不动杆菌,提示应加强该类菌株的监测检测力度。 展开更多
关键词 ndm-1基因 鲍曼不动杆菌 ST20型 耐药 筛检
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携带NDM-1阴沟肠杆菌尿路感染株临床特点回顾性报告 被引量：4
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作者 曹丽军 杨靖 +3 位作者 耿凤珍 李慧卿 史峥 时东彦 《医学研究与教育》 CAS 2014年第1期33-36,共4页
目的对2012年7月分离自住院患者尿液标本携带NDM-1阴沟肠杆菌的临床特点、检测过程进行回顾性分析,探讨其耐药特征及产生机制,对控制"超级细菌"的流行提出意见。方法依照CLSI标准,采用K-B法和MIC法检测耐药性,改良Hodge试验... 目的对2012年7月分离自住院患者尿液标本携带NDM-1阴沟肠杆菌的临床特点、检测过程进行回顾性分析,探讨其耐药特征及产生机制,对控制"超级细菌"的流行提出意见。方法依照CLSI标准,采用K-B法和MIC法检测耐药性,改良Hodge试验和金属酶试验检测产酶类型,聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因并进行测序。结果此株阴沟肠杆菌对亚胺培南和美罗培南等15种7个类别抗生素均显示耐药,改良Hodge试验阳性,金属酶表型初筛试验阳性,经基因扩增并测序后,与Genebank比对,表明与NDM-1基因有99%的相似性,并经河北省CDC确证报告该菌株为携带NDM-1阴沟肠杆菌。结论该尿路感染携带NDM-1基因金属酶的阴沟肠杆菌株,其产生可能与患者年老体差、恶性肿瘤伴长时滞留尿管并长时多次应用过多种抗生素有关,因此特别强调严格侵入性导尿及滞留时限指征、规范抗生素使用,做好重点消毒、隔离,控制多重耐药株发生。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 碳青霉烯类抗生素 ndm-1基因检测 回顾性报告
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NDM-1基因PCR检测技术的研究 被引量：1
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作者 吴兴海 张云霞 +4 位作者 封立平 邓明俊 张治宇 祝素贞 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期130-135,共6页
NDM-1基因是一种"超级细菌"特有的耐药基因,对于菌体的广谱抗药性起着决定性的作用。本研究以实现该基因的快速检测为目的,初步建立了NDM-1基因的PCR快速检测鉴定法。选取肺炎克雷伯氏菌ADB65的NDM-1基因为目的基因,设计并合... NDM-1基因是一种"超级细菌"特有的耐药基因,对于菌体的广谱抗药性起着决定性的作用。本研究以实现该基因的快速检测为目的,初步建立了NDM-1基因的PCR快速检测鉴定法。选取肺炎克雷伯氏菌ADB65的NDM-1基因为目的基因,设计并合成了PCR检测引物(ND-319-F和ND-319-R),并以另外11种标准菌株为对照,分别进行了PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA经过PCR反应都扩增出长为319bp的特异性片段,而其他对照病菌均未出现相应片段,证明这对引物具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出100fg/μL质粒DNA模板。研究表明,PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。 展开更多
关键词 ndm-1 PCR 检测
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