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油菜种子特异表达napin基因启动子的克隆及序列分析 被引量:13
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作者 熊兴华 官春云 +2 位作者 李恂 谭小力 李家洋 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期4-5,共2页
通过PCR扩增 ,从油菜 (Brassicanapuscv XY15 )中克隆了种子特异表达napin基因启动子 ,序列分析表明 ,该启动子有 114 7个核苷酸 ,与已报道的序列比较 ,其核苷酸的同源性为 99 9%和 99 4 %。这是一个新的napin基因启动子 ,已将其登录到G... 通过PCR扩增 ,从油菜 (Brassicanapuscv XY15 )中克隆了种子特异表达napin基因启动子 ,序列分析表明 ,该启动子有 114 7个核苷酸 ,与已报道的序列比较 ,其核苷酸的同源性为 99 9%和 99 4 %。这是一个新的napin基因启动子 ,已将其登录到GenBank ,登录号为AF4 2 0 5 98。 展开更多
关键词 油菜 种子 表达 napin基因 启动子 克隆 序列分析
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napin基因启动子克隆及进化分析 被引量:3
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作者 刘建民 李运涛 +2 位作者 甘露 李红 栗茂腾 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期188-191,196,共5页
napin是一个重要的种子贮藏蛋白,它以组织特异性方式表达形成。以甘蓝型油菜为材料,克隆了napin基因启动子,测序结果表明,该启动子全长1 135bp,含有启动子特有的TATA-box等调控元件。系统进化分析显示,拟南芥、萝卜、白菜型油菜和甘蓝... napin是一个重要的种子贮藏蛋白,它以组织特异性方式表达形成。以甘蓝型油菜为材料,克隆了napin基因启动子,测序结果表明,该启动子全长1 135bp,含有启动子特有的TATA-box等调控元件。系统进化分析显示,拟南芥、萝卜、白菜型油菜和甘蓝型油菜napin基因启动子之间既具有较高的同源性,又存在一定的差别。通过进化分析,指导我们在油菜脂肪酸改良过程中,采用不同的启动子在脂肪酸改良方面可能起到不同的效果。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 napin基因启动子 基因克隆 进化分析
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油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达 被引量:3
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作者 邹敏 唐佳佳 宋洪元 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第07X期18-22,共5页
为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明:随着转基因植株的种子逐... 为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明:随着转基因植株的种子逐渐发育成熟,EGFP基因在种皮、子叶、胚根中的表达强度逐渐增强;在转基因种子发芽过程中,幼苗根、子叶、下胚轴中EGFP的表达逐渐降低,直至不能检出绿色荧光。结果表明Napin启动子驱动的外源基因表达在芥菜中表现出较为严格的种子表达特异性。 展开更多
关键词 油菜种子特异启动子napin 绿色荧光蛋白基因 转基因芥菜
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Napin启动子特异性表达油菜BnGPAT9基因 被引量:5
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作者 邢蔓 洪波 +7 位作者 张泽荣 张曦予 陈拓 吴宁柔 官梅 邬贤梦 官春云 熊兴华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期1-7,共7页
甘油三磷酸酰基转移酶(GPAT)基因编码参与植物油脂生物合成的酶。为了提高油菜籽含油量,促进油菜增产增油,改善菜籽油脂肪酸组分,克隆甘蓝型油菜Napin启动子与三酰甘油合成相关基因BnGPAT9,构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物过表达载体,利... 甘油三磷酸酰基转移酶(GPAT)基因编码参与植物油脂生物合成的酶。为了提高油菜籽含油量,促进油菜增产增油,改善菜籽油脂肪酸组分,克隆甘蓝型油菜Napin启动子与三酰甘油合成相关基因BnGPAT9,构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物过表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,采用气相色谱法分析种子中脂肪酸组分,通过索式抽提法测定种子中油脂含量,研究在种子中过表达BnGPAT9基因对种子油脂合成的影响。Napin启动子在线分析表明,克隆到的启动子具有大量TATA-box、CAAT-box以及ABRE、GCN4等特征元件,完全具备种子特异性表达功能;种子中脂肪酸组分分析显示,拟南芥种子中油酸(C18∶1)含量提高0.70~1.01百分点,亚油酸(C18∶2)和芥酸(C22∶1)含量降低;拟南芥种子含油量测定结果显示,种子中含油量显著增加1.91~2.56百分点。综上,甘蓝型油菜BnGPAT9基因对植物油脂合成具有重要作用,利用Napin启动子在拟南芥种子中过表达BnGPAT9基因可提高种子含油量并改善脂肪酸组成成分,为BnGPAT9基因应用于油菜油脂改良方面打下一定基础。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 napin启动子 BnGPAT9基因 植物表达载体 含油量
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甘蓝型油菜三种种子储藏蛋白和丙酮酸羧化酶基因片段的克隆及hpRNA表达载体的构建 被引量:9
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作者 汪承刚 谢妤 +2 位作者 李长春 刘幼琪 黄邦全 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期245-250,共6页
利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napusL.)华双4号基因组DNA中扩增出种子储藏蛋白cruc iferin、nap-in、oleosin和丙酮酸羧化酶(PEPC)基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出4个相应的小片段,然后将同一基因的大小两个片段... 利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napusL.)华双4号基因组DNA中扩增出种子储藏蛋白cruc iferin、nap-in、oleosin和丙酮酸羧化酶(PEPC)基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出4个相应的小片段,然后将同一基因的大小两个片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的nap in启动子和nos终止子之间,构建成可以在油菜种子中转录表达发夹RNA(Hairp in RNA,hpRNA)结构的植物表达载体。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 Crucfferin OLEOSIN napin 丙酮酸羧化酶(PEPC) 发夹RNA(hpRNA) 载体构建
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种子特异启动子的GPD1基因植物表达载体构建 被引量:2
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作者 李群 王学英 +1 位作者 刘野 阮成江 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期31-34,共4页
利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和酵母INVSc1(Saccharomyces cerevisiae)的基因组DNA中分别扩增获得种子特异启动子napin和3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)基因片段,并将它们分别克隆到pMD18-T载体中。利用中间载体pBluescriptKS... 利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和酵母INVSc1(Saccharomyces cerevisiae)的基因组DNA中分别扩增获得种子特异启动子napin和3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)基因片段,并将它们分别克隆到pMD18-T载体中。利用中间载体pBluescriptKS将两目的片段插入到植物表达载体pCAMBIA1390的多克隆位点处,构建了种子特异启动子napin驱动的GPD1基因植物表达载体p1390NG,并用冻融法将其导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404、EHA105和AGL1中,可应用于油料能源植物种子含油量的遗传改良。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 酵母INVSc1 napin 3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1) 基因表达载体
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种子特异启动子的DGAT基因植物表达载体构建
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作者 李群 王学英 +2 位作者 李贺 刘野 阮成江 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期558-561,共4页
利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)的基因组DNA和拟南芥(Arabidopsis thaliana)cDNA中分别扩增种子特异启动子napin和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因片段,并将它们依次插入到植物表达载体pCAMBIA1390的多克隆位点处,构建了... 利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)的基因组DNA和拟南芥(Arabidopsis thaliana)cDNA中分别扩增种子特异启动子napin和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因片段,并将它们依次插入到植物表达载体pCAMBIA1390的多克隆位点处,构建了种子特异启动子napin驱动的DGAT基因植物表达载体p1390ND,冻融法将其导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404、EHA105和AGL1中,PCR检测结果证明,重组质粒p1390ND已成功导入农杆菌细胞。该载体可应用于油料能源植物种子含油量的遗传改良。 展开更多
关键词 napin 二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT) 载体构建 种子含油量
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甘蓝型油菜PEPC基因保守序列的克隆和种子特异性ihpRNA表达载体的构建 被引量:4
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作者 张勇 付绍红 +1 位作者 张汝全 牛应泽 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第4期775-780,共6页
为了通过转基因途径获得油菜种子中PEPC基因发生转录后基因沉默,通过PCR扩增分别分离得到了甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1138bp)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因保守序列(181bp),将它们分别克隆到pMD18-T载体中,利... 为了通过转基因途径获得油菜种子中PEPC基因发生转录后基因沉默,通过PCR扩增分别分离得到了甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1138bp)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因保守序列(181bp),将它们分别克隆到pMD18-T载体中,利用中间载体pBS-NEI构建了PEPC基因的反向重复框。再将PEPC基因片段以正向的方式连接到一个可剪切的内含子5'末端,以反向的方式连接到该内含子的3'末端;然后将Napin启动子序列克隆到植物表达载体pCAMBIA1391的pUC18多克隆位点上,获得了种子特异表达的载体pCAMNapin;再将PEPase基因的反向重复序列克隆到pCAMNapin载体Napin启动子的3'末端,构建了具有种子特异性表达的PEPC基因的ihpRNA表达载体pCAMNapin-B2-NEI-B1。通过限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 PEPC基因 ihpRNA载体 napin启动子
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EMS诱变亚麻荠获得2S贮藏蛋白缺失突变体 被引量:4
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作者 苑丽霞 郝敬云 +2 位作者 赵奎 薛金爱 李润植 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期11-17,共7页
亚麻荠种子富含大量不饱和脂肪酸和贮藏蛋白。为了获得广泛的育种材料,创建优异的新种质,采用EMS(甲基磺酸乙酯)对亚麻荠种子进行诱变处理。通过EMS不同处理时间(0,8,12,16 h)和不同处理浓度(0,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1.0%,1.2%)条件下诱... 亚麻荠种子富含大量不饱和脂肪酸和贮藏蛋白。为了获得广泛的育种材料,创建优异的新种质,采用EMS(甲基磺酸乙酯)对亚麻荠种子进行诱变处理。通过EMS不同处理时间(0,8,12,16 h)和不同处理浓度(0,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1.0%,1.2%)条件下诱变亚麻荠种子,建立了EMS诱变亚麻荠种子的优化体系,以0.8%(V/V)EMS处理成熟种子12 h效果最佳,筛选获得一个亚麻荠2SP1突变体。与野生型相比,该突变体种子贮藏蛋白成分中缺失了2S清蛋白,但是亚麻荠种子含油量和蛋白含量、株型和种子萌发等农艺性状未发生显著变化。这种特殊的亚麻荠2SP1突变体可作为研究种子贮藏蛋白合成机理及培育高营养品质亚麻荠新品种的优异种质资源,也可用于进行相关功能基因组学等的研究。 展开更多
关键词 亚麻荠 2S清蛋白 EMS 突变体(2SP1)
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菜籽粕中清蛋白的超声辅助提取及氨基酸组成研究 被引量:9
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作者 赵蓓 王承明 张沙沙 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期32-36,共5页
以脱脂菜籽粕为原料,在单因素试验基础上采用响应面分析方法优化菜籽清蛋白的超声辅助提取工艺,研究液料比、提取时间、超声温度、超声功率对菜籽清蛋白提取率的影响;并对得到的产品进行氨基酸组成分析。结果表明,最佳的工艺条件为液料... 以脱脂菜籽粕为原料,在单因素试验基础上采用响应面分析方法优化菜籽清蛋白的超声辅助提取工艺,研究液料比、提取时间、超声温度、超声功率对菜籽清蛋白提取率的影响;并对得到的产品进行氨基酸组成分析。结果表明,最佳的工艺条件为液料比18 m L/g,提取时间62 min,超声温度42℃,超声功率80 W,且最优条件下实际提取率为8.53%;氨基酸分析结果显示,菜籽清蛋白中氨基酸种类齐全,必需氨基酸组成均衡,符合FAO/WHO推荐模式,是一类优质的植物蛋白资源。 展开更多
关键词 菜籽清蛋白 超声辅助 优化 氨基酸组成
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油菜籽蛋白质的结构、生物活性和理化特性 被引量:9
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作者 成兰英 王梅 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期972-976,共5页
本文主要介绍了油菜籽蛋白质的组成、已经分离所得的2 S清蛋白和1 2 S球蛋白的结构、油菜籽蛋白质和水解产物的生物活性,以及油菜籽蛋白质的理化特性。
关键词 油菜籽蛋白 2S清蛋白 12S球蛋白 生物活性
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