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荣昌猪Nanog基因克隆与多能性鉴定
1
作者 陈鱼 周尹航 +2 位作者 袁子坤 刘安芳 伏彭辉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2130-2136,共7页
【目的】Nanog基因是一种参与调控与维持干细胞多能性的转录因子,Nanog异位表达可以使体细胞重编程并获得一定的多能性。克隆荣昌猪Nanog基因,构建pMX逆转录病毒载体并鉴定表达载体的转染效率,为荣昌猪进一步的遗传改良与干细胞研究奠... 【目的】Nanog基因是一种参与调控与维持干细胞多能性的转录因子,Nanog异位表达可以使体细胞重编程并获得一定的多能性。克隆荣昌猪Nanog基因,构建pMX逆转录病毒载体并鉴定表达载体的转染效率,为荣昌猪进一步的遗传改良与干细胞研究奠定基础。【方法】以荣昌猪生殖嵴为材料,提取总RNA并反转录为cDNA,经PCR扩增克隆得到荣昌猪Nanog基因。采集荣昌猪耳部组织用组织块法培养荣昌猪成纤维细胞,选择第3~5代的猪成纤维细胞作为转染细胞,通过T-A克隆构建pMD18T-Nanog载体;采用T4连接法将Nanog基因连接到pMX逆转录病毒载体上,酶切鉴定后构建pMX-Nanog-neo表达载体,然后将报告基因EGFP连接到pMX-Nanog-neo构建pMX-Nanog-EGFP表达载体。采用脂质体LTX法进行转染,将pMX-Nanog与pCMV-VSVG按照2∶1的比例混合后,将pMX-Nanog-EGFP表达载体转染293GP包装细胞并收集病毒上清液备用,利用Hoechst染核与Nanog抗体免疫组化鉴定其转染表达效果,随后采用相同方法将pMX-Nanog-neo表达载体转染荣昌猪成纤维细胞并扩大培养,同时通过G418筛选阳性细胞株。【结果】成功克隆出荣昌猪Nanog基因,并成功构建pMX-Nanog-neo与pMX-Nanog-EGFP逆转录表达载体。pMX-Nanog-EGFP表达载体转染293GP细胞,48 h后可见稳定表达的EGFP荧光,细胞扩大培养后通过Hoechst染核与Nanog抗体免疫组化鉴定确认了Nanog基因为稳定核表达蛋白,从而确定所构建的逆转录表达载体可以高效转染细胞并稳定表达目的基因。pMX-Nanog-neo载体转染猪成纤维细胞,通过G418(600 ng/mL)筛选获得稳定表达Nanog基因的阳性细胞株。【结论】构建的pMX逆转录病毒表达载体可以将目的基因Nanog稳定转染猪成纤维细胞并高效表达,为今后进一步研究荣昌猪干细胞多能性维持机制、自我更新机制、分化机制及重编程机制提供可靠的技术方法。 展开更多
关键词 荣昌猪 nanog基因 干细胞多能性 克隆
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上皮性卵巢癌中ERCC1及转录因子Nanog蛋白的表达水平及意义 被引量：1
2
作者 刘慧玲 陈迎秀 +1 位作者 李靖 李大众 《中国妇幼健康研究》 2024年第8期32-37,共6页
目的探讨上皮性卵巢癌中核昔酸切除修复交叉互补组1(ERCC1)及转录因子Nanog蛋白的表达水平及意义。方法收集2019年1月至2022年12月在连云港市肿瘤医院妇科行卵巢手术切除的组织标本,其中上皮性卵巢癌组织标本101例(上皮性卵巢癌组),良... 目的探讨上皮性卵巢癌中核昔酸切除修复交叉互补组1(ERCC1)及转录因子Nanog蛋白的表达水平及意义。方法收集2019年1月至2022年12月在连云港市肿瘤医院妇科行卵巢手术切除的组织标本,其中上皮性卵巢癌组织标本101例(上皮性卵巢癌组),良性卵巢肿瘤组织标本80例(对照组),采用免疫组化检测ERCC1及Nanog蛋白表达水平,并分析与临床病理指标的关系。分别用0mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L不同浓度的顺铂处理人卵巢癌OVCAR-3细胞24h,以Western blot检测细胞中ERCC1、Nanog蛋白的相对表达量,比较两组间ERCC1及Nanog蛋白的表达水平。结果上皮性卵巢癌组ERCC1、Nanog蛋白的阳性率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为49.960、39.941,P<0.05)。Spearman相关性分析显示,上皮性卵巢癌组中ERCC1与Nanog蛋白表达水平呈正相关(r=0.463,P<0.01);对照组中ERCC1与Nanog蛋白表达水平无相关性(r=0.125,P>0.05)。在上皮性卵巢癌临床病理指标中,FIGO分期为Ⅲ+Ⅳ期的ERCC1、Nanog蛋白的阳性率均明显高于Ⅰ+Ⅱ期(χ^(2)值分别为9.578、9.756),淋巴结转移阳性的ERCC1、Nanog蛋白阳性率均明显高于淋巴结转移阴性(χ^(2)值分别为3.018、2.389),经比较差异均有统计学意义(P<0.05)。1mg/L、2mg/L、4mg/L浓度顺铂处理的ERCC1和Nanog蛋白相对表达量均明显高于0mg/L浓度顺铂处理的相对表达量,经比较差异均有统计学意义(F值分别为8.564、6.571,P<0.05);在ERCC1、Nanog蛋白相对表达量中,顺铂处理浓度1mg/L与0mg/L相比(t值分别为17.236、5.381)、顺铂处理浓度2mg/L与0mg/L相比(t值分别为5.621、6.380)、顺铂处理浓度4mg/L与0mg/L相比(t值分别为12.813、6.810),差异均有统计学意义(P<0.05);且随顺铂浓度的增加,ERCC1、Nanog蛋白相对表达量逐渐升高。结论ERCC1及Nanog蛋白在上皮性卵巢癌中呈现出高表达,可能与该病的发病机理和病情发展具有相关性。顺铂可诱导卵巢癌细胞ERCC1及Nanog蛋白高表达,可能为化疗耐药的潜在机制。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 核昔酸切除修复交叉互补组1 nanog蛋白 耐药性
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黄河鲤nanog基因克隆及其表达特征研究
3
作者 于淼 刚会会 +6 位作者 王方圆 李木子 王园 江红霞 王磊 张猛 乔志刚 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第4期63-70,I0009-I0011,共11页
转录因子Nanog在干细胞多能性维持、胚胎早期发育等方面具有重要作用.利用PCR技术克隆黄河鲤nanog基因(Ccnanog),通过实时荧光定量PCR或半定量PCR分别对其在黄河鲤不同胚胎发育时期以及雌、雄成体不同组织中的表达特征进行了分析,并利... 转录因子Nanog在干细胞多能性维持、胚胎早期发育等方面具有重要作用.利用PCR技术克隆黄河鲤nanog基因(Ccnanog),通过实时荧光定量PCR或半定量PCR分别对其在黄河鲤不同胚胎发育时期以及雌、雄成体不同组织中的表达特征进行了分析,并利用荧光原位杂交和免疫组织化学方法进一步检测了该基因在黄河鲤卵巢和精巢中的亚细胞定位.结果显示,黄河鲤nanog基因ORF为1158 bp,编码385个氨基酸残基;Nanog蛋白包含保守的HOX结构域,与斑马鱼的序列相似性最高.在胚胎中,Ccnanog在未受精卵、早期胚胎的Ⅰ细胞期至原肠胚期高表达,在神经胚期表达量显著降低,之后在眼囊期至出膜期基本检测不出;在组织中,Ccnanog短片段在以性腺为首的多个组织中均有不同程度的表达,Ccnanog长片段仅在雌鱼卵巢和皮肤中表达,其中在雌鱼卵巢中的表达量最高,其组织表达具有一定的性别二态性;在性腺中进一步检测到,Ccnanog主要分布在卵巢的卵原细胞、Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期初级卵母细胞的细胞质中,以及精巢的精原细胞、精母细胞和精子细胞中,且随着生殖细胞的发育其表达量逐渐下降.以上结果表明Ccnanog可能参与了黄河鲤早期胚胎发育过程与生殖细胞的发育,为后续功能研究提供了参考. 展开更多
关键词 黄河鲤 nanog 基因表达 性腺
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基于Nanog信号通路探究miR-328对乳腺癌干细胞分化及间质转化的作用机制
4
作者 马英桥 李建梅 孙静宜 《中国老年学杂志》 北大核心 2024年第3期657-661,共5页
目的 基于Nanog信号通路探究miR-328对乳腺癌干细胞分化及间质转化的作用机制。方法 选取秦皇岛市第四医院10例乳腺癌患者癌组织标本与10例癌旁组织标本进行研究。人乳腺癌干细胞分为乳腺癌组(乳腺癌干细胞)、NC组(乳腺癌转染miR-328-NC... 目的 基于Nanog信号通路探究miR-328对乳腺癌干细胞分化及间质转化的作用机制。方法 选取秦皇岛市第四医院10例乳腺癌患者癌组织标本与10例癌旁组织标本进行研究。人乳腺癌干细胞分为乳腺癌组(乳腺癌干细胞)、NC组(乳腺癌转染miR-328-NC)、模拟物组(转染miR-328 mimics)、抑制物组(转染miR-328 siRNA)。运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-328、E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin),检测细胞克隆形成情况,噻唑蓝(MTT)检测增殖,Transwell检测侵袭及迁移能力,Western印迹检测信号转导与转录活化因子(STAT)3、p-STAT3、肿瘤干性相关蛋白(Nanog)蛋白表达。结果 miR-328在乳腺癌组织中表达水平显著低于在癌旁组织(P<0.05)。乳腺癌组与NC组各指标间差异无统计学意义(P<0.05);与乳腺癌组相比,miR-328模拟物组miR-328表达、E-cadherin mRNA表达明显升高,N-cadherin及Vimentin mRNA表达、细胞增殖率、克隆形成率、STAT3、p-STAT3、Nanog、MUC-1蛋白表达、侵袭及迁移数量明显降低(P<0.05),miR-328抑制物组miR-328、E-cadherin表达明显降低,N-cadherin及Vimentin表达、细胞增殖率、克隆形成率、STAT3、p-STAT3、Nanog、MUC-1蛋白表达、侵袭及迁移数量明显升高(P<0.05),STAT3/Nanog抑制剂组与模拟物组以上指标水平差异无统计学意义(P>0.05),STAT3/Nanog激活剂组与抑制物组以上指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 上调miR-328通过可以抑制Nanog通路,诱导乳腺癌干细胞分化并抑制其上皮间质转化。 展开更多
关键词 nanog信号通路 miR-328 乳腺癌干细胞分化 间质转化
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干性相关分子Nanog在食管鳞状细胞癌组织中高表达并促进食管鳞癌细胞的侵袭转移:基于激活TGF-β信号通路 被引量：1
5
作者 孙畅 郑士耀 +9 位作者 李梅 杨铭 秦梦园 徐媛 梁伟华 胡建明 王良海 李锋 周虹 杨兰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1209-1216,共8页
目的 探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法 运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例... 目的 探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法 运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达情况,分析Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达水平、相关性及与食管鳞癌患者的临床病理参数和预后之间的关系;采用GEO数据库分析Nanog等干性相关分子主要富集通路;应用TIMER在线网站分析食管癌中TβR1和MMP-2及MMP-9的相关性。在体外运用siRNA转染的方式将食管鳞癌细胞株分为正常对照组、Nanog低表达组,采用划痕实验分析其对食管鳞癌细胞迁移的影响,qRT-PCR及Western blotting检测两组之间TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达情况。结果 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌组织中表达均上调(χ^(2)=70.475,P<0.01;χ^(2)=34.415,P<0.01;χ^(2)=46.605,P<0.01),且呈正相关(r=0.205,P=0.045;r=0.307,P<0.001)。Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度相关(χ^(2)=23.9,P<0.01;χ^(2)=6.029,P<0.05;χ^(2)=11.89,P<0.05),有淋巴结转移的样本中,MMP-2/MMP-9蛋白表达水平高于无淋巴结转移的样本(χ^(2)=10.08,P<0.01;χ^(2)=5.731,P<0.05)。MMP-2/MMP-9蛋白表达与食管鳞癌患者的年龄、性别和肿瘤分化程度无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白高表达组的食管鳞癌患者生存时间短于低表达组(P<0.001;P=0.004;P=0.017);生物信息学分析显示,Nanog等干性相关分子主要富集在转化生长因子-β(TGF-β)信号通路,MMP-2/MMP-9与TβR1表达在食管癌中呈正相关关系。体外划痕实验结果显示,Nanog促进食管鳞癌细胞系的迁移;qRT-PCR及Western blotting结果显示,敲低Nanog后,TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达水平明显降低。结论 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌患者组织中高表达且呈正相关,其与食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关,且Nanog通过TGF-β信号通路影响MMP-2/MMP-9蛋白的表达。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 胚胎干细胞关键因子 基质金属蛋白酶-2/基质金属蛋白酶-9 浸润转移 生存分析
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人NANOGP8蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：4
6
作者 张经余 王爱娥 +1 位作者 李美香 戴建武 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期30-35,共6页
为获得抗人NANOGP8基因的多克隆抗体,采用PCR法扩增了NANOGP8基因,经序列测定正确后,连接到pET-28a质粒上,将获得的重组质粒pET-28a-NANOGP8转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在16℃和37℃下分别进行诱导表达,经SDS-PAGE检测发现融合蛋白以包... 为获得抗人NANOGP8基因的多克隆抗体,采用PCR法扩增了NANOGP8基因,经序列测定正确后,连接到pET-28a质粒上,将获得的重组质粒pET-28a-NANOGP8转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在16℃和37℃下分别进行诱导表达,经SDS-PAGE检测发现融合蛋白以包涵体形式存在于37℃诱导表达的沉淀中,大小约为45kDa。对包涵体进行洗涤、溶解处理,经ChelatingSepharoseFastFlow亲和层析柱进行纯化。对纯化得到的蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot免疫印记杂交检测,得到了单一条带。用获得的高纯度融合蛋白免疫新西兰兔,得到兔来源的抗人NANOGP8血清。对抗血清进行蛋白免疫印记杂交反应和酶联免疫吸附反应检测,结果显示成功制备了高滴度和特异性的兔抗人NANOGP8多克隆抗体,与市售抗人Nanog多克隆抗体相比,杂交更迅速,效果更明显。为进一步研究NANOGP8基因在肿瘤发生、发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 nanogP8 nanog表达 多克隆抗体 效价鉴定
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干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义 被引量：29
7
作者 陈忠 许文荣 +6 位作者 钱晖 朱伟 王胜 步雪峰 毛飞 曹慧玲 徐学静 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期6-9,共4页
目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达... 目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。 展开更多
关键词 胃癌 nanog RT—PCR Real—time PCR 肿瘤干细胞
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慢病毒载体介导Nanog小分子干扰核糖核酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长 被引量：2
8
作者 李科伟 姜政 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页
目的构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃... 目的构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型。以lentivirus-shRNA-Nanog感染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒感染的裸鼠(空载体组)及未感染的裸鼠(未感染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化;活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot法检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况;TUNEL法观察其对皮下移植瘤细胞凋亡的影响。结果经基因测序鉴定,Nanog基因shRNA重组慢病毒表达载体构建成功。活体荧光成像显示感染27 d后,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未感染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤质量小于未感染组及空载体组;Western blot法显示目的组Nanog蛋白表达较对照组明显降低;TUNEL结果显示目的组凋亡指数较对照组明显增大,而空载体组与未感染组比较,差异无统计学意义。结论成功构建了Nanog基因shRNA表达载体并包装成慢病毒颗粒,在体内感染能明显抑制肿瘤生长。 展开更多
关键词 nanog SGC-7901 Lentivirus-shRNA-nanog 小动物活体成像技术 裸鼠
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小鼠Nanog基因原核表达载体的构建及表达 被引量：11
9
作者 李军 吕长荣 +1 位作者 窦琳 窦忠英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期373-378,共6页
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得... 【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为63 kD;以IPTG终浓度为0.8 mmol.L-1,诱导5 h后融合蛋白产量最高。【结论】小鼠Nanog基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后Nanog蛋白的多克隆抗体制备奠定基础。 展开更多
关键词 nanog基因 原核表达 GST融合蛋白 小鼠
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沼泽型水牛NANOG基因5′调控序列克隆与功能分析 被引量：6
10
作者 崔奎青 张会娜 +4 位作者 刘帅 刘晓华 杨素芳 刘庆友 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期387-394,共8页
为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,... 为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,并转染水牛胎儿成纤维细胞。结果发现,EGFP的表达仅限于水牛囊胚内细胞团。各缺失体在猪4.5d胚胎中均能启动下游EGFP的表达,转录活性两两之间差异均极显著,按活性从大到小依次为-745、-425、-1 213和-312bp。各缺失体报告载体转染水牛成纤维细胞48h后均可见少数细胞发光,其中-425bp活性极显著高于其他缺失体,-1 213与-745bp之间无显著差异,二者均极显著高于-312bp。以上结果说明,水牛NANOG基因翻译起始位点上游-1 213bp在水牛囊胚中可以调控NANOG在内细胞团中的特异性表达;-1 213～-745bp含有多能细胞特异性的抑制子元件;-745～-425bp含有多能性细胞特异性的增强子元件;-425～-312bp含有非多能细胞特异性的增强子元件。 展开更多
关键词 沼泽型水牛 nanog 调控序列 克隆
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人Nanog基因的克隆及其在COS-7L细胞中的表达 被引量：5
11
作者 柳霞 龙梅 +3 位作者 蒋晖 金卫林 焦西英 鞠躬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期495-498,共4页
目的 :克隆人Nanog基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在哺乳动物细胞COS 7L中的表达。方法 :利用HE2 93细胞的人基因组DNA为模板 ,以LA PCR技术 ,扩增Nango的基因 ,定向克隆到带Flag标签的pCMV载体中 ,测序后 ,挑选序列正确的真核表... 目的 :克隆人Nanog基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在哺乳动物细胞COS 7L中的表达。方法 :利用HE2 93细胞的人基因组DNA为模板 ,以LA PCR技术 ,扩增Nango的基因 ,定向克隆到带Flag标签的pCMV载体中 ,测序后 ,挑选序列正确的真核表达质粒pFlag Nanog转染COS 7L细胞。用抗Flag标签的抗体 ,进行Westernblot和间接免疫荧光染色法检测Nango蛋白的表达。结果 :从人基因组DNA中克隆到序列正确的Nanog全长编码序列。所构建的Nanog质粒在COS 7L细胞中获得高效表达。结论 :人Nanog基因的克隆、真核表达载体的构建及在COS 7L中的表达均获得成功 ,为进一步研究其功能 ,尤其是探讨其在神经干细胞中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 人 nanog 克隆 分子 真核表达
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宫颈癌组织Nanog和Oct4的表达及临床意义 被引量：8
12
作者 赵燕 孙志华 +2 位作者 吴强 徐飞 沈婕红 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2011年第16期1243-1246,共4页
目的:探讨宫颈癌组织胚胎特异性基因Nanog和Oct4的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学检测30例宫颈鳞状细胞癌、20例CINⅢ和10例正常宫颈组织中Nanog和Oct4的表达,并结合患者的临床病理资料进行统计学分析评估两者的相关性。结果:... 目的:探讨宫颈癌组织胚胎特异性基因Nanog和Oct4的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学检测30例宫颈鳞状细胞癌、20例CINⅢ和10例正常宫颈组织中Nanog和Oct4的表达,并结合患者的临床病理资料进行统计学分析评估两者的相关性。结果:宫颈癌组织Nanog和Oct4的阳性表达率均为93.3%(28/30),CINⅢ和正常宫颈组织相比,差异均有统计学意义,P<0.001。宫颈癌组织Nanog和Oct4的高表达与肿瘤的分化程度密切相关,P<0.05。宫颈癌组Nanog和Oct4表达呈正相关,rs=0.531 7,P=0.002 5。结论:宫颈癌组织中Nanog和Oct4均有高表达,Nanog和Oct4的联合检测可作为肿瘤的一个敏感性、特异性的标志和治疗靶点。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 nanog OCT4 肿瘤干细胞
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Nanog基因在卵巢癌和卵巢肿瘤干细胞中的表达及意义 被引量：8
13
作者 赵乐 纪新强 +2 位作者 刘静 武加利 张文卿 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第14期2642-2646,共5页
目的:探讨胚胎干细胞关键因子Nanog基因mRNA及其蛋白在卵巢癌和卵巢癌肿瘤干细胞中的表达及意义。方法:选取10例正常卵巢上皮组织、10例卵巢良性肿瘤及60例卵巢癌组织,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学PV-6000两步... 目的:探讨胚胎干细胞关键因子Nanog基因mRNA及其蛋白在卵巢癌和卵巢癌肿瘤干细胞中的表达及意义。方法:选取10例正常卵巢上皮组织、10例卵巢良性肿瘤及60例卵巢癌组织,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学PV-6000两步法检测Nanog mRNA和蛋白表达水平;采用无血清悬浮培养法从SKOV-3卵巢癌细胞株中分离培养肿瘤干细胞,流式细胞术鉴定肿瘤干细胞CD117表达,采用RT-PCR和Western Blot方法检测SKOV-3卵巢癌细胞及肿瘤干细胞中NanogmRNA及其蛋白的表达水平。结果:Nanog mRNA在卵巢癌组织中的表达水平均高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);Nanog mRNA在不同分化程度及临床分期的卵巢癌组织中表达水平不同,低分化组高于高分化组(P<0.05);III-IV期高于I-II期(P<0.05);免疫组化结果同RT-PCR。从SKOV-3卵巢癌细胞株中成功分离出肿瘤干细胞,SKOV-3卵巢癌细胞和肿瘤干细胞Nanog mRNA相对含量分别为0.6044±0.0368,0.8736±0.0537,差异具有统计学意义(P<0.05),两种细胞Nanog蛋白相对含量分别为0.6364±0.0169 1.2788±0.0314,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:Nanog基因在卵巢癌组织和SKOV-3细胞系中均高表达,其在组织中的表达强度与临床分期及病理分级关系密切,且在肿瘤干细胞中表达高于一般卵巢癌细胞,其与卵巢癌的发生发展关系密切,可能是卵巢癌干细胞的表面标志物,有望成为新的标志物。 展开更多
关键词 卵巢癌 nanog 肿瘤干细胞 基因表达 悬浮培养
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Nanog与CD44在胃癌细胞株MKN45球体细胞中的表达及其意义 被引量：5
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作者 刘建明 周友浪 +2 位作者 马利林 徐骏飞 章建国 《天津医药》 CAS 2015年第1期30-33,I0001,共5页
目的检测与干细胞相关的2种因子胚胎干细胞相关转录因子4(Nanog)和分化抗原簇44(CD44)在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子(EGF)及成纤维生长因子(b FGF)无血清培养液中培养,观察球... 目的检测与干细胞相关的2种因子胚胎干细胞相关转录因子4(Nanog)和分化抗原簇44(CD44)在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子(EGF)及成纤维生长因子(b FGF)无血清培养液中培养,观察球体形成情况;采用免疫印迹(Western blot)、免疫荧光与实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测干细胞相关基因Nanog和CD44在球体细胞及原代贴壁细胞中的表达差异。结果胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量分别为2.34±0.22和1.18±0.04,明显高于贴壁细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量1.00±0.00和1.00±0.05;球体细胞中的Nanog和CD44的蛋白质相对表达量分别为0.18±0.02和0.24±0.04,明显高于贴壁细胞中的相对表达量0.07±0.02和0.18±0.01(P<0.05)。球体细胞中Nanog主要分布在细胞核周围及细胞质中,而CD44主要在细胞膜上表达,且同一个球体细胞中的Nanog与CD44大多同时表达。结论胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下形成的球体细胞具有肿瘤干细胞的特性。Nanog/CD44共表达细胞可能是胃癌干细胞的一种表型。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤干细胞 抗原 CD44 悬浮培养法 nanog
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Nanog通过升高PKCε的表达促进乳腺癌细胞的侵袭 被引量：6
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作者 邵文凤 李福喜 +4 位作者 唐芮 于晓然 温桥生 余焱林 熊静波 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期639-644,共6页
目的研究Nanog促进乳腺癌细胞侵袭与ezrinT567磷酸化的关系及Nanog调节ezrinT567磷酸化的可能机制。方法转染靶向Nanog的si RNA敲低乳腺癌细胞Nanog;用transwell法检测乳腺癌细胞侵袭;用免疫印迹检测乳腺癌细胞Nanog、PKCε表达水平和ez... 目的研究Nanog促进乳腺癌细胞侵袭与ezrinT567磷酸化的关系及Nanog调节ezrinT567磷酸化的可能机制。方法转染靶向Nanog的si RNA敲低乳腺癌细胞Nanog;用transwell法检测乳腺癌细胞侵袭;用免疫印迹检测乳腺癌细胞Nanog、PKCε表达水平和ezrinT567磷酸化水平;用免疫共沉淀和免疫印迹检测PKCε和ezrin蛋白的相互作用。结果敲低乳腺癌细胞的Nanog,PKCε蛋白表达下降、ezrinT567磷酸化水平下降、乳腺癌细胞的侵袭能力下降;敲低PKCε降低ezrinT567磷酸化水平;PKCε与ezrin可免疫共沉淀。结论 Nanog可上调PKCε的表达,后者可使ezrinT567磷酸化,这可能是Nanog促进肿瘤转移的一个新机制。 展开更多
关键词 nanog 埃兹蛋白 蛋白激酶C 乳腺癌 侵袭
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食管鳞癌组织Nanog表达临床意义分析 被引量：5
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作者 李秀娟 赵轶峰 +4 位作者 李明霞 金春亭 范婕 李海军 李玉珍 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2014年第24期1962-1965,共4页
目的研究食管鳞癌组织中Nanog蛋白表达情况及其与食管癌患者预后的相关性。方法收集河北北方学院附属第一医院2000-01-01-2005-12-31手术切除的食管癌存档标本蜡块69例及正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5cm)24例,应用免疫组化SP法检测... 目的研究食管鳞癌组织中Nanog蛋白表达情况及其与食管癌患者预后的相关性。方法收集河北北方学院附属第一医院2000-01-01-2005-12-31手术切除的食管癌存档标本蜡块69例及正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5cm)24例,应用免疫组化SP法检测食管鳞癌及癌旁正常黏膜组织中Nanog的表达,分析其与各临床病理因素的相关性;结合Nanog的表达情况及随访资料,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析Nanog与食管癌患者生存的相关性;并建立Cox回归模型评估Nanog及各临床病理因素与患者预后的相关性。结果食管鳞癌组织中Nanog表达阳性率为40.6%(28/69),显著高于正常组织的8.3%(2/24),χ2=8.473,P=0.004。Nanog的表达与组织分化程度(χ2=7.137,P=0.008)、淋巴结转移(χ2=4.947,P=0.026)、外膜浸润(χ2=11.110,P=0.001)和UICC分期(χ2=5.301,P=0.021)明显相关,而与患者年龄(χ2=0.238,P=0.626)和性别(χ2=1.229,P=0.268)无相关性;死亡患者Nanog的表达程度为49.0%(25/51),明显高于生存患者的16.7%(3/18),χ2=5.775,P=0.016;Nanog表达水平与食管癌患者预后明显相关,RR=1.913,P=0.002。结论 Nanog在食管鳞癌组织中呈高表达,与患者生存期相关,Nanog是影响食管癌患者预后的独立因素。 展开更多
关键词 癌 鳞状细胞 食管肿瘤 nanog蛋白 预后 生存期
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MicroRNA-134靶向下调Nanog影响胶质瘤细胞增殖和凋亡研究 被引量：13
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作者 杨洋 牛朝诗 +3 位作者 程传东 李仲颖 汪炎 李冬雪 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2013年第4期300-304,共5页
目的探讨微小RNA-134(microRNA-134,miR-134)靶向下调Nanog基因对胶质瘤细胞增殖和凋亡水平的影响。方法建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株,通过逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法分别检测细胞中Nanog的m... 目的探讨微小RNA-134(microRNA-134,miR-134)靶向下调Nanog基因对胶质瘤细胞增殖和凋亡水平的影响。方法建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株,通过逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法分别检测细胞中Nanog的mRNA和蛋白水平改变;四唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖水平改变;流式细胞术和透射电镜检测细胞凋亡变化。结果建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株;miR-134高表达的胶质瘤细胞中Nanog的mRNA和蛋白表达水平显著下调;miR-134高表达的胶质瘤细胞增殖水平下降、细胞凋亡增加。结论胶质瘤细胞中miR-134高表达可下调靶基因Nanog的mRNA和蛋白水平,从而抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡增加。 展开更多
关键词 微小RNA-134 nanog基因 胶质瘤 增殖 凋亡
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Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义 被引量：6
18
作者 莫碧文 李劳冬 +6 位作者 王昌明 曾锦荣 王绩英 韦江红 陈峰 黄剑伟 于会娜 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第4期560-562,共3页
目的:探讨Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织中Nanog和CD44蛋白的表达,并分析二者与肺癌临床病理因素的关系。结果:Nanog在肺癌中的表达显著高... 目的:探讨Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织中Nanog和CD44蛋白的表达,并分析二者与肺癌临床病理因素的关系。结果:Nanog在肺癌中的表达显著高于良性病变肺组织和正常肺组织(P<0.05);CD44在肺癌、良性病变肺组织和正常肺组织中的表达无统计学差异(P>0.05);Nanog和CD44在肺鳞癌中的表达显著高于肺腺癌和小细胞肺癌(P<0.05);Nanog和CD44在肺癌中的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期和肿瘤分化无关(P>0.05)。Nanog和CD44在肺癌中的表达呈正相关(r=0.564,P<0.05)。结论:Nanog和CD44蛋白可能共同参与了肺癌的发生发展,Nanog蛋白是一潜在的肺癌诊断标志物及治疗靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 nanog CD44 诊断标志物 治疗靶点
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小鼠Nanog基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：5
19
作者 林艳丽 曹立雪 +2 位作者 吴晓洁 阎新龙 邓继先 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B04期257-259,共3页
按照nanog基因编码序列设计合成引物,利用RT-PCB从小鼠的囊胚期胚胎中扩增得到该 基因,并将该基因克隆到pET-28b(+)载体上,获得pET-28b(+)-nanog原核表达重组质粒,限制 性酶分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为nanog基因编码序列... 按照nanog基因编码序列设计合成引物,利用RT-PCB从小鼠的囊胚期胚胎中扩增得到该 基因,并将该基因克隆到pET-28b(+)载体上,获得pET-28b(+)-nanog原核表达重组质粒,限制 性酶分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为nanog基因编码序列。重组质粒转化大肠杆 菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达,western杂交证实该 蛋白具有6-His抗原活性,从而证实目的蛋白为Nanog蛋白。 展开更多
关键词 nanog 克隆 大肠杆菌
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牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达 被引量：4
20
作者 郑喜邦 云彦 +3 位作者 胡勇策 李勇 王华岩 窦忠英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期547-554,共8页
本研究克隆了牛Nanog基因,构建其真核表达载体,并转染皮肤成纤维细胞,获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株。从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Nanog基因,将其克隆到pMD-18T载体,再从酶切鉴定和测序正确的质... 本研究克隆了牛Nanog基因,构建其真核表达载体,并转染皮肤成纤维细胞,获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株。从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Nanog基因,将其克隆到pMD-18T载体,再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段,定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上,挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞,获得了稳定转染的细胞株。用RT-PCR和Western Blotting分别检测NanogmRNA和FLAG-Nanog融合蛋白的表达,用免疫染色法验证该细胞株是否具有干细胞特征。结果表明:(1)从胎牛原始生殖嵴中克隆了序列正确的Nanog全长编码序列;(2)所构建的pFLAG-Nanog重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中高效表达;(3)所获稳定转染的细胞株能表达ES细胞表面抗原SSEA-4和多能性维持因子Nanog、Oct-4,表明其具有一定的多能性。为进一步研究Nanog基因功能,尤其是探讨它在家畜早期胚胎发育、生产转基因动物,以及胚胎干细胞建系中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛 nanog 分子克隆 真核表达
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