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福建NADC30-like PRRSV FJLY01株的全基因组分子特征分析 被引量:10
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作者 魏春华 刘建奎 +4 位作者 戴爱玲 龚丽贞 李晓华 黄思琼 杨小燕 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第3期51-60,67,共11页
【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离... 【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离株序列进行分段PCR扩增,经克隆测序后进行序列拼接,采用MEGA 6.0软件进行核苷酸及氨基酸同源性比对,并绘制其与其他35株毒株的系统遗传进化树。【结果】FJLY01株基因组全长为15 016bp(不包含polyA),包含10个开放阅读框,5′-UTR长190bp,3′-UTR长148bp,Nsp2基因缺失393bp。Nsp2蛋白存在类似PRRSV MN184和NADC30株的131个氨基酸的缺失。核苷酸比对结果表明,FJLY01株与VR-2332、MLV RespPRRS/Repro、CH-1a和BJ-4株核苷酸的同源性为85.2%~86.3%,与JXA1、HuN4等HP-PRRSV株核苷酸的同源性为83.7%~84.1%,与MN184A、MN184B株核苷酸的同源性为87.9%~88.2%,与NADC30株核苷酸的同源性最高,为97.1%。系统进化树分析表明,该毒株属于NADC30-like毒株,与JXA1、VR2332和CH-1a的亲缘关系较远。【结论】福建省存在NADC30-like毒株,应该加强PRRSV的监测。 展开更多
关键词 PRRSV 全基因组 nadc30-like 福建省
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甘肃NADC30-like PRRSV的分离及其基因组特性分析 被引量:6
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作者 张婧 孙普 +4 位作者 韩镇 张海霞 田启会 刘在新 卢曾军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1096-1105,共10页
为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病... 为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病料组织为PRRSV阳性,IFA实验显示接种分离病毒株的Marc-145细胞可以与PRRSV N蛋白抗体反应,出现特异性荧光,将其命名为GSWW2018。设计引物对该毒株全基因组进行分段扩增,克隆测序后拼接得到全长序列。采用DNAstar软件分析其与48个参考毒株核苷酸及氨基酸的同源性,使用MEGA7.0软件绘制系统遗传进化树,并利用Simplot软件分析其重组事件。结果显示GSWW2018全长14 997 bp,其Nsp2蛋白存在与NADC30相似的"111+1+19"的131个氨基酸的不连续的缺失。Nsp2基因和ORF5基因系统进化树分析结果表明其属于类NADC30亚群。重组结果表明GSWW2018可能由HP-PRRSV与NADC30重组而来。本研究表明甘肃省已出现类NADC30毒株,需要进一步加强监测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 基因组特性
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我国NADC30-like毒株流行现状及猪繁殖与呼吸综合征防控策略再思考 被引量:4
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作者 郭振华 《中国猪业》 2017年第11期26-28,共3页
猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来,NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围的流行。需要特别注意的是,本次PRRS疫情的大范围流行是在高强度... 猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来,NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围的流行。需要特别注意的是,本次PRRS疫情的大范围流行是在高强度免疫弱毒疫苗的基础上发生的,这提醒有必要对PRRS的现行防控措施进行重新的梳理和反思。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 防控措施
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like分离株致病力分析
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作者 李秀丽 王利丽 +3 位作者 江珊 池晶晶 李程 张莉 《天津农业科学》 CAS 2022年第S01期28-32,共5页
为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力... 为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力和对猪的致病力进行了研究。结果显示:该毒株能够在Marc145细胞上稳定增殖,引起明显的细胞病变,最佳收获时间为72 h(0.1MOI接种),TCID50为106.445·mL^(-1);用2×10^(5) TCID50·头-1的剂量经肌肉注射结合鼻腔喷雾方式接种45 d杜长大三元猪,猪只感染后24 h体温升高至40℃以上,血液中病毒载量达107.3copies·mL^(-1);感染后7 d PRRSV抗体阳转率100%;感染后15 d猪只消瘦、咳喘,剖检可见间质性肺炎,显微病理观察提示弥漫性肺泡萎缩、炎性浸润;PRRSV荧光定量PCR检测发现病猪的扁桃体、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结中均含有较高的病毒。研究结果有助于进一步认识天津地区PRRSV流行毒株的体外增殖规律和临床致病特点,为PRRS的深入研究和防控提供依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like毒株 致病力
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PRRSV NADC30-like SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法的建立与应用 被引量:4
5
作者 项明源 廖倡宇 +5 位作者 江地科 张鹏飞 王印 罗燕 杨泽晓 姚学萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期80-85,共6页
为建立高效快速的PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR(SYBR Green real-time PCR)检测方法,根据NADC30毒株Nsp2基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行灵敏度、特异性、重复性实验以及临床样品的检测。结果显示,标... 为建立高效快速的PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR(SYBR Green real-time PCR)检测方法,根据NADC30毒株Nsp2基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行灵敏度、特异性、重复性实验以及临床样品的检测。结果显示,标准品在10~7 copies/μL到10~2 copies/μL浓度范围内具有良好的线性关系,最低检测浓度为2.25×10~1 copies/μL;该方法与HP-PRRSV、PCV、PEDV、TGEV、PRV、CSFV、PoRV无交叉反应,批内和批间的变异系数(CV)小于1.9%,在临床样品的检测中较普通PCR有更高的检出率。建立了PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR检测方法,具有敏感性高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速等优点,可用于PRRSV NADC30-Like感染的早期诊断、样品的快速检测与定量分析。 展开更多
关键词 PRRSV nadc30-like 荧光定量PCR NSP2 定量分析
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Genomic similarity and antibody-dependent enhancement of immune serum potentially affect the protective efficacy of commercial MLV vaccines against NADC30-like PRRSV 被引量:7
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作者 Yang Li Lele Xu +11 位作者 Dian Jiao Zifang Zheng Zhihao Chen Yang Jing Zhiwei Li Zhiqian Maa Yingtong Feng Xuyang Guo Yumiao Wang Yuan He Haixue Zheng Shuqi Xiao 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期813-826,共14页
Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV an... Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV and highly pathogenic PRRSV(HP-PRRSV)are the dominant epidemic strains in China;however,commercial vaccines do not always provide sufficient cross-protection,and the reasons for insufficient protection are unclear.This study isolated a wild-type NADC30-like PRRSV,SX-YL1806,from Shaanxi Province.Vaccination challenge experiments in piglets showed that commercial modified live virus(MLV)vaccines provided good protection against HP-PRRSV.However,it could not provide sufficient protection against the novel strain SXYL1806.To explore the reasons for this phenomenon,we compared the genomic homology between the MLV strain and HP-PRRSV or NADC30-like PRRSV and found that the MLV strain had a lower genome similarity with NADC30-like PRRSV.Serum neutralization assay showed that MLV-immune serum slightly promoted the homologous HP-PRRSV replication and significantly promoted the heterologous NADC30-like PRRSV strain replication in vitro,suggesting that antibody-dependent enhancement(ADE)might also play a role in decreasing MLV protective efficacy.These findings expand our understanding of the potential factors affecting the protective effect of PRRSV MLV vaccines against the NADC30-like strains. 展开更多
关键词 nadc30-like PRRSV Modified live virus(MLV)vaccines Genomic similarity Antibody dependent enhancement(ADE) Cross protection
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NADC30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量:2
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作者 陶一墨 解长占 +2 位作者 王鹏 金宁一 鲁会军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5287-5297,共11页
【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like... 【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。【方法】将PRRSV NADC30-like毒株编码GP5蛋白开放阅读框5(open reading frame 5,ORF5)、ORF6(编码M蛋白)分别连接至pFastBacTMDual载体P10和PH启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFB-30-ORF5及pFB-30-ORF6,酶切鉴定后,将ORF6基因插入到穿梭质粒pFB-30-ORF5 PH启动子下游,构建穿梭质粒pFB-30-ORF5-OPF6。将上述3种穿梭质粒分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选及PCR鉴定重组杆粒。再将获得的重组杆粒转染至SF9昆虫细胞,发现细胞病变后收获病毒液,继续盲传3代,在透射电镜下观察是否有病毒样颗粒。用第3代病毒液感染SF9细胞后,分别用GP5蛋白、His-tag、Flag-tag单克隆抗体作为一抗,通过免疫电镜、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting鉴定重组蛋白。【结果】成功构建了3种穿梭质粒pFB-30-ORF5、pFB-30-ORF6和pFB-30-ORF5-OPF6,酶切鉴定正确。通过蓝白斑筛选及PCR验证后获得重组杆粒,分别命名为Bacmind-30-ORF5、Bacmind-30-ORF6和Bacmind-30-ORF5-ORF6。重组杆粒感染SF9细胞120 h时出现明显的细胞病变,收获病毒液后,在透射电子显微镜可观察到大小为50 nm左右呈现球形结构的VLPs。免疫电镜可以观察到胶体金颗粒结合在VLPs周围;IFA结果显示实验组均出现了明显绿色的特异性荧光灶;Western blotting结果表明,3种VLPs均出现特异性条带,并与预期大小一致。【结论】制备了3种NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒,为针对PRRSV新谱系流行株疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 nadc30-like猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV) 病毒样颗粒 重组杆状病毒
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An Attenuated Highly Pathogenic Chinese PRRS Viral Vaccine Confers Cross Protection to Pigs against Challenge with the Emerging PRRSV NADC30-Like Strain 被引量:1
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作者 Hewei Zhang Mingqi Xia +10 位作者 Wei Wang Decai Ju Long Cao Bai Wu Xin Wang Ying Wu Ni Song Jiaxin Hu Changxiao Tian Shucheng Zhang Hua Wu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期153-161,共9页
A novel PRRSV strain was isolated in China that was genetically similar to the NADC30 strain which is reported to have spread throughout China. The objective of the present study was to evaluate the cross-protective e... A novel PRRSV strain was isolated in China that was genetically similar to the NADC30 strain which is reported to have spread throughout China. The objective of the present study was to evaluate the cross-protective efficacy of the live vaccine TJM-F92 in young pigs against challenge with a NADC30-like strain, HN201605. Twenty-five PRRSV-and antibody-free pigs were randomly divided into the following five groups: Vac/ChA, Unvac/ChA, Vac/ChB, Unvac/ChB and the mock.The pigs in groups Vac/ChA and Vac/ChB were inoculated intramuscularly with 1 mL TJM-F92(10^(5.0) TCID_(50)/mL). At28 days post vaccination(0 days post challenge), groups Vac/ChA and Unvac/ChA were inoculated intranasally with 10^(4.5) TCID_(50)/mL PRRSV strain TJ F3(2 mL/pig), while groups Vac/ChB and Unvac/Ch B were inoculated, using the same route, with the same dose of the NADC30-like strain HN201605 F3. Protective effects of the PRRSV strain were observed in all pigs in the Vac/ChA and Vac/ChB groups. Neither high fever nor signs of clinical disease were observed through the experiment in these groups, whereas pigs in Unvac/ChA group exhibited serious clinical symptoms, pathological lesions,and weight loss. In Unvac/ChB group, pigs developed milder clinical symptoms, which demonstrated that the NADC30-like strain HN201605 had moderate pathogenicity. The results suggest that the MLV vaccine strain TJM-F92 is an effective and safe vaccine candidate for use in China. 展开更多
关键词 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) nadc30-like VACCINE Cross protection
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株的毒力评价 被引量:1
9
作者 李俊辉 张伟 +8 位作者 程兰玲 潘晓梅 唐慧芬 周涛 秦义杰 胡耀凯 刘强德 肖艳 贺笋 《中国动物保健》 2023年第6期113-115,共3页
为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株的毒力,试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6~7周龄健康易感猪,以进行毒力评价(A-E组),并设立未攻毒阴性对照组(F组)。所有组攻毒后进行临床症... 为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株的毒力,试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6~7周龄健康易感猪,以进行毒力评价(A-E组),并设立未攻毒阴性对照组(F组)。所有组攻毒后进行临床症状观察,并在第0、3、5、7、10、14和21天采集全血、咽拭子和肛拭子进行病毒载量检测。结果显示,除D组外其他攻毒组表现一过性体温升高,偶有到41℃,而D组在攻毒后第4~15天,该组试验猪平均体温均不低于40.5℃,体温显著高于其他攻毒组。病毒血症检测发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5、7和10天均为核酸阳性,在第14天部分转为核酸阴性,但到第21天又转为阳性,而D组从攻毒到结束病毒血症始终为阳性。肛拭子和咽拭子病毒载量测定发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5和7天均为核酸阳性,在第10、14和21天部分猪有时转为阴性,后又转为阳性;D组攻毒到结束肛拭子始终为阳性。从上述数据统计综合分析,结果表明D组所攻击的毒株毒力高于其他毒株,可引起3/5猪发病,且死亡一头,该毒株感染能产生PRRSV的典型临床症状,可初步用于NADC30-like疫苗的效力评价。 展开更多
关键词 nadc30-like 毒力评价 病毒血症 排毒
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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株NADC30-like流行情况及防控措施
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作者 贺仪 王瑜 +4 位作者 陈小洪 吴秀平 李容 邬旭龙 鲁志平 《兽医导刊》 2020年第11期8-9,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)引起妊娠母猪、仔猪的一种繁殖障碍与呼吸系统疾病,是一种高度接触性的病毒性传染病,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大的经济损失。临床上主要引起感染猪高热、厌食、呼吸困难,妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)引起妊娠母猪、仔猪的一种繁殖障碍与呼吸系统疾病,是一种高度接触性的病毒性传染病,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大的经济损失。临床上主要引起感染猪高热、厌食、呼吸困难,妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎等。2013年以来NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行,近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其防控措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖,具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 变异毒株 nadc30-like 防治措施
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我国猪繁殖与呼吸综合征NADC30-like毒株的流行情况及防控对策
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作者 丁尊俄 《兽医导刊》 2020年第14期116-117,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前严重威胁养猪业发展的重要疫病之一,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病。1987年美国首次报道该病以来,其毒株不断发生演变。2012年我国出现新的类NAD... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前严重威胁养猪业发展的重要疫病之一,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病。1987年美国首次报道该病以来,其毒株不断发生演变。2012年我国出现新的类NADC30毒株(NADC30-like毒株),该毒株可导致母猪流产及仔猪死淘率升高,给养猪业带来新的威胁,因此了解NADC30-like毒株在我国的流行情况及防控措施,对保障我国生猪健康养殖具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 nadc30-like毒株 防控措施
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一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体制备及鉴定
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作者 秦义娴 刘丹 +4 位作者 邓永 高金源 苏佳 朱真 吴华伟 《中国兽药杂志》 2021年第10期1-6,共6页
为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞(命名为3E10),经3次亚克隆后制备腹水并... 为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞(命名为3E10),经3次亚克隆后制备腹水并进行纯化鉴定。结果显示:该杂交瘤细胞连续传代20代后细胞上清液的IFA效价仍不低于1∶40。纯化后的单克隆抗体腹水浓度为0.204 mg/mL,亚类鉴定为IgM。特异性检测显示3E10单克隆抗体能与2株PRRSV NADC30-like毒株发生荧光反应,而与4株高致病性PRRSV疫苗毒株、2株经典株PRRSV疫苗毒株以及CSFV、PCV2、BVDV及Marc-145细胞均无荧光反应,显示出较好的应用前景。针对PRRSV NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体的成功制备,为PRRSV NADC30-like诊断试剂的研制提供了坚实基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-lke毒株 GP5蛋白 单克隆抗体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析 被引量:1
13
作者 毛丽萍 潘晓梅 +5 位作者 曹剑 李俊辉 周涛 侯红娟 郑学功 贺笋 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期11-17,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30 猪骨髓源巨噬细胞 NSP2 重组分析
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NADC30-like PRRSV流行特点 被引量:6
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作者 刘建奎 戴爱玲 杨小燕 《中国猪业》 2017年第12期30-32,37,共4页
2013年左右我国出现了引起妊娠母猪严重流产和仔猪呼吸系统疾病的新流行毒株,由于该类毒株与美国毒株NADC30高度同源,称之为NADC30-like PRRSV。本文在调查国内规模化猪场PRRSV流行病学的基础上,结合国内学者的研究成果对NADC30-like PR... 2013年左右我国出现了引起妊娠母猪严重流产和仔猪呼吸系统疾病的新流行毒株,由于该类毒株与美国毒株NADC30高度同源,称之为NADC30-like PRRSV。本文在调查国内规模化猪场PRRSV流行病学的基础上,结合国内学者的研究成果对NADC30-like PRRSV在我国的流行特点、重组特征以及致病性进行了总结,以期为该类毒株的防控提供参考。 展开更多
关键词 nadc30-li'ke PRRSV 基因重组 致病性 防控
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外来与新发动物疫病猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like变异流行情况及综合防控措施 被引量:1
15
作者 王瑜 贺仪 +3 位作者 陈小洪 吴秀平 李容 邬旭龙 《猪业科学》 2020年第7期107-108,共2页
猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防... 猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防护措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc 30-like 防控措施 流行特征
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一例HP-PRRSV与NADC30-like毒株混合感染的实验室诊断 被引量:2
16
作者 王祝荣 熊连 文敏华 《湖南畜牧兽医》 2023年第3期35-37,共3页
2022年10月中旬,湖南长沙某规模化猪场发生疑似猪繁殖障碍综合征疫情。为探究发病原因,采集病料样品进行细菌分离鉴定和常见病原荧光定量PCR(qPCR)鉴定。结果发现,病料样品中未分离得到细菌,qPCR检测结果显示组织病料为HP-PRRSV和NADC30... 2022年10月中旬,湖南长沙某规模化猪场发生疑似猪繁殖障碍综合征疫情。为探究发病原因,采集病料样品进行细菌分离鉴定和常见病原荧光定量PCR(qPCR)鉴定。结果发现,病料样品中未分离得到细菌,qPCR检测结果显示组织病料为HP-PRRSV和NADC30-like毒株核酸阳性,其他病原核酸均为阴性。为进一步分析该猪场PRRSV流行株遗传变异情况,对PRRSVNsp2基因序列进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增、测序及分析。结果显示,HP-PRRSV株Nsp2基因序列与HuN4-F112株(PRRSV弱毒疫苗株)同源性最高,类NADC30株Nsp2基因序列与已知NADC30株同源性最高。以上研究结果表明,该场疫情是HP-PRRSV和类NADC30株混合感染引起,其中HP-PRRSV可能为弱毒疫苗株。 展开更多
关键词 HP-PRRSV株 nadc30 混合感染 诊断
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1株类NADC30 PRRSV三谱系重组株的分离鉴定及遗传分析
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作者 蔡丙严 乔洋洋 +5 位作者 刘天昕 左伟勇 王永娟 张凯 陆辉 王海明 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期420-426,共7页
2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份... 2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份样品呈现猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗原阳性。随后将PRRSV抗原阳性病料接种于非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145),盲传3代后,进行IFA(indirect immunofluorescence assay),结果显示,成功分离获得1株PRRSV,命名为HLJ38株。随后对HLJ38株进行了全基因组测序,并利用生物信息学软件对其基因组进行了详细分析,结果显示HLJ38株Nsp2基因的推导氨基酸序列中存在3处、共计131(323~433 aa、483 aa和504~522 aa)个氨基酸的缺失,符合类NADC30 PRRSV的分子遗传标志;进化树分析结果显示,HLJ38与GenBank中的类NADC30 PRRSV同属于谱系1亚群,与国内代表毒株CH-1a、HuN4亲缘关系较远,其核苷酸同源性仅为85.2%和84.6%;重组分析结果显示,HLJ38是1株重组的类NADC30 PRRSV,且重组的基因片段来源于多个毒株,其中1~201 nt片段由VR2332毒株提供,而6641~8061 nt来源于HP-PRRSV毒株。结果表明,该猪场此次疫情的原因可能是由不同谱系间PRRSV毒株发生重组所致,重组后的流行毒株不仅具有一定的致病性,而且现有的商品化疫苗对其交叉保护性较弱;不同谱系间的重组增加了PRRSV的基因多样性,也加剧了猪场PRRS防控的难度。因此,有必要持续监控猪场中PRRSV的流行动态,及时采取有效措施,遏制PRRS疫情的扩散。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30 PRRSV HLJ38 重组分析
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一株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及致病力分析
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作者 李明桃 刘云涛 +4 位作者 邹立宏 柳珊 刘茜 焦玉兰 郁宏伟 《中国畜禽种业》 2025年第2期104-111,共8页
该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,... 该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,感染后每日观察临床症状,测量直肠温度,并采集血液、口腔拭子、肛拭子以检测病毒血症与排毒情况,试验结束后进行病理剖检,观察大体病理变化。结果显示,感染组在感染后体温升高,第7天1头猪出现发热,第9天1头猪直肠温度达到峰值41.16℃;感染后第2天出现病毒血症及排毒,持续至感染后第21天;病理剖检发现肺部呈暗红色,局部发生实质性病变,未感染对照组未出现上述情况。可见,RP-1株可引起易感染猪只发病,并表现出明显的临床症状,但未致死,是一株中等毒力毒株,可为疫苗效力的评价提供毒株来源。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30毒株 病毒分离 致病力
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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30和类NADC34毒株鉴别诊断方法的建立与应用
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作者 马晶晶 孔维苏 +4 位作者 韩相敏 贾济宇 张江 蒋洁 赖志 《中国兽医卫生》 2025年第2期51-59,共9页
为快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)类NADC30(NADC30-like)毒株和类NADC34(NADC34-like)毒株,基于两者在PRRSV Nsp2基因序列上的差异,设计特异性引物和探针,建立针对NADC30... 为快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)类NADC30(NADC30-like)毒株和类NADC34(NADC34-like)毒株,基于两者在PRRSV Nsp2基因序列上的差异,设计特异性引物和探针,建立针对NADC30-like和NADC34-like毒株的双重TaqMan qRT-PCR检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性和重复性等性能进行评估。结果显示,该方法的性能良好,适用于PRRSV的临床鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30毒株 nadc34毒株 TaqMan qRT-PCR
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表达高致病性和NADC30样PRRSV毒株GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建 被引量:2
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作者 王林青 侯承尧 +4 位作者 马晓 刘颖 刘芳 金钺 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1587-1593,共7页
参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表... 参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表达质粒pBApo-EF1α_Pur_DNA的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含GP5/NA的表达盒,将其导入含高致病性PRRSV(HP-PRRSV)GP5基因的伪狂犬病病毒(PRV)转移质粒pG-GP5/HP-EGFP中,构建重组质粒pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。用脂质体转染法将PRV变异株3基因缺失株rPRV-gE-/gI-/TK-基因组与pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP质粒共转染ST细胞,得到携带有HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV的GP5基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组PRV株rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经4轮病毒空斑纯化得到了无绿色荧光标签的重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30株。经PCR和RT-PCR证实成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30。 展开更多
关键词 nadc30-like PRRSV HP-PRRSV GP5基因 重组PRV
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