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2例人感染H9N2亚型禽流感病毒的分子溯源及进化特征
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作者 肖姗 李灵之 +3 位作者 黄政 欧新华 姚栋 裴瑞青 《中国热带医学》 北大核心 2025年第8期1004-1010,1015,共8页
目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒... 目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒进行基因测序,重点分析血凝素(hemagglutinin,HA)基因和神经氨酸酶(neur‑aminidase,NA)基因的遗传进化关系、同源性、受体结合、蛋白活性、耐药位点及N-糖基化特征。结果共获得10组H9N2亚型禽流感病毒基因序列,其中1组为全基因组序列。经同源性分析,HA基因与福建省分离株相似性最高,NA基因与福建省和重庆市分离株相似性最高。HA基因属于Y280-like h9.4.2.5分支,裂解位点为PSRSSR↓GLF,受体结合位点发生Q226L、Q227M等突变,与Y280-like疫苗株相比抗原位点发生多处突变,潜在N-糖基化位点预测分析显示所有毒株均含有7个潜在N-糖基化位点。NA基因均发生茎部氨基酸序列55~57位缺失,蛋白活性中心发现K135E、I145T突变,其他头部位点发生1个或多个氨基酸突变,未发现耐药位点突变;潜在N-糖基化位点预测分析显示9株含有4个潜在N-糖基化位点,1株含有3个潜在N-糖基化位点,经氨基酸序列比对发现或与其发生N78D突变有关。结论2025年4月长沙的10株H9N2亚型禽流感病毒关键位点及功能结构域呈现多样性变异特征,在本地已形成多条传播链流行,应多维度加强疫情防控工作。 展开更多
关键词 禽流感 H9n2 人感染病例 分子特征 溯源调查
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2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行及HA、NA基因变异特征分析
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作者 吴巨龙 何玉洁 +6 位作者 孙林 张淑 宋绍霞 刘倜 李忠 王显军 寇增强 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第8期873-878,共6页
目的 了解2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行状况以及分离的H3N2亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因的变异特征,以了解其与疫苗株的匹配性及其耐药情况。方法 从流感监测网络实验室分离的... 目的 了解2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行状况以及分离的H3N2亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因的变异特征,以了解其与疫苗株的匹配性及其耐药情况。方法 从流感监测网络实验室分离的毒株中随机选取25株H3N2亚型流感毒株,以WHO推荐的疫苗株为参考进行HA、NA基因序列测定分析,并采用神经氨酸酶抑制实验开展奥司他韦和扎那米韦敏感性监测。结果 2023—2024年山东省H3N2流感病毒属于3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支;核苷酸序列分析显示,HA和NA基因与WHO推荐的当季疫苗株A/Darwin/9/2021的亲缘关系较为接近,核苷酸同源性分别为97.8%~98.2%和98.9%~99.3%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白头部(HA1)共有22个位点发生氨基酸序列变异,8株病毒可能发生抗原漂移,25株毒株均在HA蛋白94位增加了糖基化位点。部分毒株NA抗原决定簇发生变异,NA抑制实验显示所测毒株对奥司他韦和扎那米韦均敏感。结论 本研究纳入的25株毒株与疫苗株HA、NA蛋白之间存在一定程度差异,今后要继续开展流感病毒基因变异监测,深入研究病毒变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。 展开更多
关键词 H3n2 血凝素 神经氨酸酶 基因变异
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2020—2024年广西H3N2亚型禽流感病毒HA和NA基因分子特征分析
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作者 尹彦文 熊陈勇 +14 位作者 韦伟 施开创 郑敏 崔鹏飞 韦显凯 李致远 刘惠心 冯淑萍 卢春花 屈素洁 陆文俊 李雪珍 王睿敏 邓国华 欧长波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4358-4367,共10页
【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,... 【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,提取核酸后通过PCR扩增血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序,进行序列相似性、系统发育、氨基酸变异位点及遗传进化速率分析。【结果】共获得43株HA和NA基因序列,编码区大小为1 701和1 410 bp。相似性比对分析显示,本研究获得的HA和NA基因之间核苷酸序列相似性分别为86.0%~99.9%和89.7%~99.9%,与GenBank中禽源、人源、猪源和犬源核苷酸序列相似性分别为78.4%~99.7%和78.1%~99.1%。广西H3N2亚型AIV毒株HA和NA基因属于欧亚谱系,与禽源亲缘关系最近,与人源/猪源最远。HA蛋白在第18—20、22—24、38—40、54—56、61—63、181—183、301—303和499—501位氨基酸处出现糖基化,NA蛋白在第61—63、69—71、86—88、143—145、146—148、200—202、234—236、313—315和402—404位氨基酸处出现糖基化,部分氨基酸位点发生变异;HA蛋白裂解位点为340PEKQTR↓GLF348和340PERQTR↓GLF348。遗传进化速率估算结果显示,HA和NA基因遗传进化速率分别为3.26×10^(-3)和3.67×10^(-3)替换/(位点·年),HA基因种群规模在不同时间段表现出不同的动态进化特征。【结论】H3N2亚型AIV广西流行毒株与同种流行毒株亲缘性较近,部分HA和NA蛋白发生特有氨基酸突变,不同种属毒株进化趋势不一致,具有遗传多样性特征。试验结果为防控H3N2亚型AIV提供基础数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3n2亚型 遗传进化 相似性
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福建湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒HA的分子特征
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作者 陈珍 朱春华 +5 位作者 陈翠腾 刘斌琼 蔡国漳 万春和 黄瑜 施少华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期227-234,共8页
目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因... 目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因核苷酸同源率为89.8%~99.4%,均属于h9.4.2.5c进化分支;HA蛋白裂解位点基序均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白存在8个相同的潜在糖基化位点,其中第313位的糖基化位点位于HA蛋白裂解位点附近;位于HA受体结合位点第226位氨基酸均为亮氨酸,具有结合哺乳动物唾液酸α-2,6受体的特征。结论5株野鸟源H9N2亚型AIV均为低致病性AIV,具有感染人的特征。 展开更多
关键词 福建湿地 野鸟源 H9n2亚型 禽流感病毒 HA基因
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湖北省鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因生物学特征分析
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作者 付小强 孙强 +3 位作者 徐惠 董江峰 秦艺 方斌 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1183-1189,共7页
为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因... 为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因特征。系统进化树和核苷酸相似性分析表明,2株分离株的HA和NA基因分别归属于h9.4.2.5c分支和1.2分支,与早期毒株的核苷酸相似性分别为85.57%~91.83%和85.51%~89.29%。氨基酸序列关键位点分析发现,HA蛋白裂解位点为PSRSSR↓GLF,表明其属于低致病性禽流感病毒,且受体结合位点出现T155N、S158N、F/A160N等突变;NA蛋白茎部缺失63~65位的3个氨基酸(TEI),红细胞366-373结合位点发生K/E/S368N、D369N突变,而与NA蛋白耐药性相关的位点未发生突变。进化速率估算结果显示,HA基因平均进化速率为2.479×10^(-3)替代/位点/年,NA基因平均进化速率为1.573×10^(-3)替代/位点/年,其最近共同祖先估算时间分别在2003年和2009年,说明HA基因比NA基因进化更为活跃。研究结果提示,2024年从鄂州市城乡活禽市场外环境分离的H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因检测到部分关键位点突变,这些突变可能增强了病毒对哺乳动物的适应性,在进化过程中存在潜在的跨宿主传播风险,需持续加强对该病毒分子进化的监测,以便评估其公共卫生威胁,为防控策略的制定提供科学依据。 展开更多
关键词 城乡活禽市场 H9n2 禽流感病毒 HA基因 NA基因 生物学特征
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2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及分子特征分析
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作者 李灵之 黄政 +3 位作者 裴瑞青 欧新华 姚栋 肖姗 《疾病监测》 北大核心 2025年第9期1160-1167,共8页
目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通... 目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通过鸡胚分离培养获得H9N2亚型阳性毒株。利用二代测序平台对分离株进行全基因组测序,测序结果通过MEGA 7软件进行序列比对和遗传进化分析。结果 2021-2024年,采集长沙市活禽市场外环境标本441份,其中373份(84.58%)甲型流感病毒阳性,356份(80.73%)H9亚型阳性。阳性标本经鸡胚接种后,成功分离出17株H9N2毒株。遗传进化分析显示,17株分离株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因均属于H9N2亚型禽流感欧亚类Y280-like谱系,且均属于G57基因型。氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点无连续碱性氨基酸插入,符合低致病性禽流感病毒的典型特征。在多个关键氨基酸位点发现与病毒跨种感染能力增强及哺乳动物致病力相关的突变,包括HA蛋白的H183N、A190T/V和Q226L,NA蛋白茎部63~65位氨基酸缺失,碱性聚合酶蛋白2的A588V、E627V,碱性聚合酶蛋白1的I368V、D622G,酸性聚合酶蛋白的K356R、S409N,核蛋白的I353V,基质蛋白1的N30D,非结构蛋白1的P42S。此外,16株分离株的基质蛋白2中检测到S31N突变,提示这些毒株对金刚烷胺具有耐药性。结论 长沙市活禽市场外环境禽流感病毒阳性率高,分离毒株具有较高的跨种传播风险,相关部门应加强活禽市场监测并密切关注病毒分子进化特征。 展开更多
关键词 H9n2亚型禽流感病毒 活禽市场 分子特征 遗传进化
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实时荧光定量PCR与酶法预处理联合应用对H9N2禽流感病毒灭活效果评价的初步研究
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作者 王慧 王明明 +6 位作者 张杰琼 王娇 李颖 王大燕 王世文 卢学新 董婕 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期676-682,共7页
本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定... 本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定量消毒剂作用后的残余病毒量的一种方法,但无法评估病毒的感染性。本研究将RT-qPCR技术与酶法预处理相结合,对中低效消毒剂新洁尔灭和75%乙醇灭活H9N2病毒的效果进行评估。结果显示,333 U/mL的蛋白酶K处理30 min,可有效降解受损的病毒囊膜蛋白;随后使用0.2 mg/mL的RNase A处理30 min,可降解裸露的病毒RNA。1%和0.25%的苯扎溴铵分别作用5 min后,经酶法预处理联合RT-qPCR检测,病毒基因组水平分别降低5.67和5.62 lg拷贝数/μL;75%乙醇作用1 min,病毒基因组水平降低5.65 lg拷贝数/μL;作用时间延长至5 min时,病毒基因组水平降低至检测值以下。本研究通过RT-qPCR联合酶法预处理建立了定量评价苯扎溴铵和75%乙醇有效灭活H9N2禽流感病毒的方法 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9n2亚型 灭活评估 实验室生物安全
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2022-2024年新疆生产建设兵团甲型H3N2流感病毒进化与基因特征分析
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作者 郭景霞 何尧 +3 位作者 郭艳 赵湾文槿 李永鑫 李凡卡 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1175-1182,共8页
分析新疆生产建设兵团(简称新疆兵团)2022-2024年甲型H3N2流感病毒抗原性变异及耐药情况。本文采集哨点医院流感样病例咽拭子标本进行病毒分离,选取病毒血凝效价≥8的毒株,利用二代测序技术对病毒株进行全基因组测序后通过生物信息学软... 分析新疆生产建设兵团(简称新疆兵团)2022-2024年甲型H3N2流感病毒抗原性变异及耐药情况。本文采集哨点医院流感样病例咽拭子标本进行病毒分离,选取病毒血凝效价≥8的毒株,利用二代测序技术对病毒株进行全基因组测序后通过生物信息学软件MEGA分析基因进化特征,同时分析病毒HA抗原决定簇和NA基因氨基酸位点变化情况,对其进行基因进化同源性和三维建模分析。新疆兵团2022-2024年甲型H3N2亚型流感病毒株均位于3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支,与WHO 2022-2023年发布的疫苗株A/Darwin/6/2021亲缘关系较近,HA基因抗原决定簇上存在9处不同的氨基酸突变位点。NA基因共存在27个氨基酸突变位点,但是均不在NA酶活性位点,推测不会产生相关的耐药性。全基因组其余6个片段序列相似性为95.2%~100%,均位于相应分支无重配现象。2022-2024年度新疆兵团H3N2亚型流感病毒与WHO 2022-2023年发布的疫苗株对比发生了部分变异,还需持续做好流感病毒抗原性和耐药监测工作,及时掌握流感病毒基因特性情况,为本地区流感病毒防控提供科学依据。 展开更多
关键词 甲型H3n2亚型流感病毒 全基因组测序 同源性 糖基化 三维建模
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H9N2亚型禽流感病毒双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 刘莉 张贺楠 +4 位作者 莫一群 徐亚亚 金丁丁 齐岩 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期154-160,共7页
为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进... 为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进一步对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并将建立的方法用于临床样品的检测,与H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒进行比较。结果显示:该方法与其他亚型AIV、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒无交叉反应,检测限为0.1 copies/μL,批内和批间变异系数均小于5%,临床样本检测阳性率(24.3%)高于H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒(18.9%)。研究表明,建立的H9N2 AIV双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于H9N2 AIV的快速检测。 展开更多
关键词 H9n2亚型禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR HA基因 NA基因
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2016-2023年湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析
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作者 邓先群 李冰清 +2 位作者 李雯 严小雪 杨芸 《疾病监测》 北大核心 2025年第1期98-105,共8页
目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序,利用MEGA 11、UCSF Chimera1.18等软件对HA... 目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序,利用MEGA 11、UCSF Chimera1.18等软件对HA基因序列进行抗原变异分析和三维建模分析。结果2016—2023监测年度共计5个监测年度有H3N2亚型流感病毒检出,共有3C.2a1、3C.2a2、3C.2a3、3C.2a1b.1b、3C.2a1b.2a.1a、3C.2a1b.2a.2a.3a.1共计6个进化簇流行,优势毒株从2016年的3C.2a2簇逐步变更为2023年的3C.2a1b.2a.2a.3a.1簇,两者在HA蛋白抗原表位上存在差异的氨基酸突变位点达21个,有I140K等13处氨基酸突变位点在表面模式结构图中差异明显。结论2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒不断进化,发生了抗原漂移,应持续加强对H3N2亚型流感病毒的分子变异监测。 展开更多
关键词 H3n2亚型流感病毒 血凝素基因 抗原漂移
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完全性切除ⅢA期(N2)NSCLC综合治疗模式对临床疗效的影响研究
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作者 郝朋朋 王鹏 赵华 《科技与健康》 2025年第3期37-40,共4页
观察分析完全性切除ⅢA期(N2)NSCLC综合治疗模式对临床疗效的影响。选取2014年8月—2018年12月126例完全性切除ⅢA期(N2)NSCLC患者为研究对象,随机将其分为A组(n=56,接受手术及术后化疗)和B组(n=70,接受手术及术后放化疗),对比两组患者... 观察分析完全性切除ⅢA期(N2)NSCLC综合治疗模式对临床疗效的影响。选取2014年8月—2018年12月126例完全性切除ⅢA期(N2)NSCLC患者为研究对象,随机将其分为A组(n=56,接受手术及术后化疗)和B组(n=70,接受手术及术后放化疗),对比两组患者的治疗效果。结果显示,纳入研究的所有患者中位生存期为25个月,1年生存率为84.4%,3年生存率为32.5%,5年生存率为16.4%。A组1年生存率为81.2%,3年生存率为28.5%,5年生存率为13.5%,中位生存期为22.4个月;B组1年、3年、5年生存率分别为88.5%、39.9%、20.0%,中位生存期为32.8个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究期间,局部复发62例,其中A组局部复发中位时间为9.6个月,B组局部复发中位时间为17个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究发现,对ⅢA期(N2)NSCLC患者联合实施手术及术后放化疗,可显著提高患者的生存率,降低局部复发率。 展开更多
关键词 化疗 放疗 完全性切除ⅢA期(n2)NSCLC 手术 生存率
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新型四元氮桥环内酯类活性物质antifungalmycin N2对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用
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作者 姚亮 王丽君 《中国现代药物应用》 2025年第7期171-175,共5页
目的探究链霉菌N2发酵所产新型四元氮桥环内酯类活性物质antifungalmycin N2对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡效果。方法分别利用细胞增殖四唑盐(MTT)检测和流式细胞仪分析,探究antifungalmycin N2对Hela细胞增殖、凋亡和细胞周... 目的探究链霉菌N2发酵所产新型四元氮桥环内酯类活性物质antifungalmycin N2对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡效果。方法分别利用细胞增殖四唑盐(MTT)检测和流式细胞仪分析,探究antifungalmycin N2对Hela细胞增殖、凋亡和细胞周期分步的影响。结果氮桥环内酯类化合物antifungalmycin N2对人宫颈癌Hela细胞具有有效的细胞毒性,其半抑制浓度(IC50)值为15.37μg/ml。人宫颈癌细胞Hela经不同浓度(5、10、20μg/ml)的氮桥环内酯类化合物antifungalmycinN2处理24 h后,空白对照组、(5、10、20μg/ml)处理组、阳性对照组细胞凋亡率分别为(4.84±1.2)%、(11.09±2.1)%、(24.23±3.9)%、(31.46±5.4)%、(54.26±8.0)%。与空白对照组比较,氮桥环内酯类化合物antifungalmycin N2处理后,细胞凋亡明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),且具有浓度依赖性。经antifungalmycin N2对Hela细胞呈现剂量依赖性的诱导凋亡作用,促使其阻滞在G1期,使进入S期的细胞减少。结论新型四元氮桥环内酯类活性物质antifungalmycin N2对人宫颈癌Hela细胞具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用。 展开更多
关键词 Antifungalmycin n2 新型四元氮桥环内酯类活性物质 增殖抑制 细胞周期 细胞凋亡 人宫颈癌HELA细胞
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一起学校聚集性感染甲型H3N2流感病毒基因特征分析
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作者 张涛 邱超 张亮 《标记免疫分析与临床》 2025年第2期290-296,共7页
目的分析2023年12月枣庄市某学校发生的甲型H3N2流感病毒聚集性疫情的流行病学特点和全基因组特征,为流感防控提供参考依据。方法对流感样病例开展流行病学调查,并采集其咽拭子标本进行核酸检测,对阳性标本进行病毒分离。随后对分离得... 目的分析2023年12月枣庄市某学校发生的甲型H3N2流感病毒聚集性疫情的流行病学特点和全基因组特征,为流感防控提供参考依据。方法对流感样病例开展流行病学调查,并采集其咽拭子标本进行核酸检测,对阳性标本进行病毒分离。随后对分离得到的毒株进行全基因组测序,利用生物信息学软件分析基因进化特征。结果此次聚集性疫情共报告19例病例,其中16例(84.21%)核酸检测呈甲型H3N2流感病毒阳性,成功分离7株病毒毒株。7株分离株与疫苗株A/Darwin/6/2021同属3C.2a1b.2a2进化分支。与疫苗株A/Darwin/6/2021相比,7株分离株的8个基因节段核苷酸同源性为97.37%~99.50%,氨基酸同源性为94.90%~100.00%。7株分离株血凝素HA蛋白共发生17个氨基酸位点突变,其中4个突变位点位于抗原决定簇,神经氨酸酶NA蛋白发生3个氨基酸位点突变,但这些突变不涉及NA酶活性及其抑制剂耐药位点。此外,多个蛋白糖基化和磷酸化位点发生改变。结论引起本次学校聚集性疫情的病原体是甲型H3N2流感病毒,应加强学校疫情监测并严格执行防控措施。 展开更多
关键词 甲型H3n2流感病毒 聚集性疫情 全基因组分析
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H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 司维 谭茜宇 +3 位作者 徐玲芸 罗廷荣 李晓宁 顾金燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1739-1749,共11页
【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04... 【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04/2005(H3N2))毒株的HA1片段,采用同源重组方法构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1,经PCR和测序鉴定正确后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。对HA1蛋白表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。将获得的重组蛋白与QuickAntibody-Mouse3W佐剂混合后以肌内注射方式免疫BALB/c小鼠,制备H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,并通过ELISA、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体的效价、反应性及特异性进行鉴定。【结果】本研究成功构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1;H3N2亚型SIV HA1重组蛋白在1 mmol/L IPTG 26℃诱导10 h时表达量最高,且主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为39.5 ku。成功制备5株H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,效价均为1∶1 638 400。Western blotting和IFA鉴定结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别真核表达的H3N2亚型SIV HA1蛋白,与H1N1亚型SIV、H7N9亚型禽流感病毒(AIV)等其他亚型流感病毒的HA1蛋白均不发生反应,具有良好的反应性及特异性。【结论】本研究成功表达并纯化了免疫原性良好的H3N2亚型SIV HA1蛋白,制备了反应性及特异性良好的鼠源多克隆抗体,为深入研究H3N2亚型SIV HA1蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H3n2亚型 HA1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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术前多区域多参数乳腺MRI影像组学对N2-3期腋窝淋巴结的预测价值
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作者 林佳璐 陈佳雪 +3 位作者 娄鉴娟 邹启桂 王思奇 蒋燕妮 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期185-195,共11页
目的:基于瘤内及瘤周多参数磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)影像组学构建术前预测浸润性乳腺癌N2-3期腋窝淋巴结(axillary lymph node,ALN)的列线图并验证模型效能。方法:回顾性分析2018年1月—2019年12月接受规范治疗前乳... 目的:基于瘤内及瘤周多参数磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)影像组学构建术前预测浸润性乳腺癌N2-3期腋窝淋巴结(axillary lymph node,ALN)的列线图并验证模型效能。方法:回顾性分析2018年1月—2019年12月接受规范治疗前乳腺MRI检查的320例(训练集224例,验证集96例)浸润性乳腺癌患者资料。根据病理报告中腋窝转移淋巴结数量将患者分为N0-1期组(转移<4枚)和N2-3期组(转移≥4枚)。从5个MRI序列的瘤内、瘤周及瘤内+瘤周3个感兴趣区(region of interest,ROI)中分别提取并筛选与ALN分期相关的影像组学特征,通过随机森林(random forest,RF)分类器构建3个影像组学模型(瘤内模型、瘤周模型及瘤内+瘤周模型),计算各自的影像组学评分。采用单因素、多因素Logistic回归分析筛选临床独立预测因子,构建临床模型。整合最优影像组学模型和临床模型中的特征构建联合模型,并可视化为列线图。通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线、校准曲线和决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评估并比较各模型的预测效能和临床实用价值。结果:在单纯影像组学模型中瘤内+瘤周模型的表现最优,训练集和验证集中的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.911和0.858。整合了瘤内+瘤周组学特征和临床特征(瘤周水肿和病灶强化形态)的列线图在所有模型中具有最佳的N2-3期ALN预测效能,训练集和验证集的AUC分别为0.923和0.892。校准曲线显示列线图的预测值与实际观测值一致性良好。DCA显示列线图临床效用较高。结论:联合多区域多参数MRI影像组学特征和临床特征构建的列线图对浸润癌乳腺癌N2-3期腋窝淋巴结的个性化预测有较高价值。 展开更多
关键词 乳腺癌 n2-3期 腋窝淋巴结 磁共振成像 影像组学
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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价
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作者 王志悦 李欣蕊 +8 位作者 崔子扬 贺志新 孙嘉咛 王许刚 王瑞 李春红 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期48-54,共7页
本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、W... 本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×10~9 CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平。结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升。本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果。 展开更多
关键词 H9n2禽流感病毒 血凝素 乳酸乳球菌
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深圳市龙岗区2023年甲型H3N2流感病毒遗传进化特征分析
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作者 林泽仁 金玉娟 +6 位作者 陈应坚 李刚 王猛 王琼瑶 李静媚 廖汉青 周健明 《中国热带医学》 北大核心 2025年第6期790-796,共7页
目的了解深圳市龙岗区2023年季节性甲型H3N2流感的遗传多样性和进化动力学,为龙岗区甲型H3N2流感防控提供科学依据。方法对2023年龙岗区5家哨点医院监测和233起学校聚集疫情的流感样病例(influenzalike illness,ILI)咽拭子样本进行核酸... 目的了解深圳市龙岗区2023年季节性甲型H3N2流感的遗传多样性和进化动力学,为龙岗区甲型H3N2流感防控提供科学依据。方法对2023年龙岗区5家哨点医院监测和233起学校聚集疫情的流感样病例(influenzalike illness,ILI)咽拭子样本进行核酸检测和病毒分离,依据2023年H3N2阳性样本流行规律,从全年4个季度中,共选取10株甲型H3N2流感病毒代表株进行全基因组测序和蛋白结构预测,利用生物信息学软件FastTree、AlphaFold2、NetNGlyc分析基因进化特征及评估疫苗效力(vaccine efficacy,VE)。结果2023年,辖区检测ILI样本2841份,甲型H3N2流感阳性率为16%(461/2841),在青中年流感阳性群体(15~<55岁)中占据优势。选取的10株病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白基因属于3C.2a1b.2a.2a.1b和3C.2a1b.2a.2a.3a.1,NA基因属于B.2和B.4.3;其中9株毒株各自的HA进化关系与神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白进化关系存在差异,可能涉及基因重配。HA抗原位点出现A表位N138D、B表位I156K和D表位I208F突变,VE(100%)值范围74%~84%。糖基化位点分析发现HA与NA共有7个具有较强潜力的保守位点,包括NST24-26、NGT38-40、NCT79-81、NVT181-183、NGS301-303、NIT61-63和NGT234-236。NA序列未出现对奥司他韦的耐药变异位点。结论2023年龙岗区甲型H3N2病毒基因组经历1次分支演化,由于抗原漂移,可能导致疫苗效力降低。亟需新型广谱疫苗,并提升对辖区流感传播的防控与宣传力度;同时,有必要启动甲型流感病毒基因组监测网络建设,为重症流感的临床诊治提供具有潜在价值的基础信息。 展开更多
关键词 H3n2流感病毒 全基因组测序 蛋白结构预测 疫苗效力
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2024年安徽省H9N2亚型禽流感病毒遗传进化和抗原性分析
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作者 李玉冬 周迎春 +13 位作者 段倩倩 曹婕 董金泽 陈洪壮 束思成 佟琪 赵传阔 王维 刘畅 王军 陈静 蒲娟 何长生 朱良强 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期1-11,共11页
为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,... 为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,结合安徽省所有H9N2亚型AIV公开序列数据,进行8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)的同源性分析、遗传进化分析、关键氨基酸和糖基化位点分析以及抗原性分析。结果显示,本试验共采集了1033份拭子样本,鉴定出334株H9N2亚型AIV,分离率为32.33%。4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株的PB1、PA、HA基因序列一致度差异较大(88.65%~98.05%),而PB2、NP、NA、M、NS基因序列一致度较为接近(92.19%~99.08%)。HA基因的遗传进化分析显示,2株鸡源和1株鸭源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.2分支,1株鹅源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.3分支;PB2、PB1、PA、NP、NA、M、NS基因遗传进化分析显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株与近年来的人源H9N2亚型AIV分离毒株遗传距离接近,2024年2月鸡源H9N2亚型AIV分离毒株的PA基因与野鸟源H9N2亚型AIV的亲缘关系较近。关键氨基酸分析显示,与参考株序列相比,4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白的130-loop、150-loop和190-helix存在明显氨基酸多态性;鹅源H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白在第289~291位可能出现了N-糖基化修饰的缺失,值得关注。抗原性评估显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株均属于当前优势流行的抗原群,鹅源H9N2亚型AIV分离毒株表现出明显的抗原漂移。结果表明,2024年安徽H9N2亚型AIV在不同宿主中显示出较高的遗传多样性,HA蛋白的受体结构域存在变异和抗原性漂移,有向家禽和人类传播扩散的风险隐患。 展开更多
关键词 H9n2亚型禽流感 遗传进化 抗原性分析
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G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证
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作者 史玉婷 韩心雨 +5 位作者 钟沐卉 林耀忠 柳腾飞 李焰 尹会方 贾伟新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1825-1833,共9页
旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构... 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。 展开更多
关键词 反向遗传 H9n2 禽流感病毒 G57基因型
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2023—2024年山东省H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析和生物学特性研究
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作者 高振涛 高斌 +2 位作者 张瑞华 徐彤 李旭冬 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期23-34,共12页
为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,利用反向遗传操作技术构建亲本毒株(SD11、SD341)和重组毒株(re_SD341),将重组毒株PA基因中携带的宿主适应性位点突变为禽源模式(PA-R356K/N409S),检测3株毒株在不同宿主细胞中的复制能力,并进一步检测SD341和re_SD341毒株对小鼠的致病能力。结果显示,从54份病料中分离获得2株H9N2亚型AIV,2株分离株与2000年之后国内疫苗株同源性较高,核苷酸相似性达90%以上;HA基因遗传进化分析结果显示,2株分离毒株均属于B分支中的B4.7.2分支,且8个基因片段均与一些人源分离毒株亲缘关系较近,其中HA、PB1、PB2和PA基因与一些人源分离毒株的核苷酸相似性超过90%;分子特征分析结果显示,2株分离毒株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GL,符合2020年左右B分支中流行毒株分子特征;与早期代表毒株相比,NA蛋白茎部均有缺失且在第368位均增加1个新的潜在糖基化位点;2株毒株的HA、PB1、PB2和PA蛋白均携带宿主适应性突变位点,其中PA蛋白发生K356R和S409N适应性突变;生物学特性验证结果显示,与re_SD341重组毒株相比,SD341亲本毒株在人非小细胞肺癌细胞系(A549)中的复制能力更强(P<0.0001),并且在一定时间内可导致小鼠的体重明显下降。结果表明,本试验分离的2株H9N2 AIV毒株均为低致病性毒株,病毒发生不同程度的变异进化,其中一些病毒蛋白包含哺乳动物适应性突变,增加了其跨种传播的风险,本试验结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考,为禽流感综合防控和公共卫生安全提供了数据支撑。 展开更多
关键词 H9n2 禽流感病毒 遗传进化 跨种传播
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