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基于结核分枝杆菌Rv2153c的原核表达及其免疫原性评价
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作者 薛满红 王晓春 +3 位作者 孔令雲 张子安 杜建鹏 张延鹏 《中国生物制品学杂志》 2026年第2期137-143,共7页
目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv2153c(MurG)重组质粒并进行原核表达后,免疫C57BL/6小鼠评价其免疫原性。方法构建重组质粒pPro-Rv2153c并进行原核表达及纯化,采用SDS-PAGE和Western blot法对纯化产物进行鉴定... 目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv2153c(MurG)重组质粒并进行原核表达后,免疫C57BL/6小鼠评价其免疫原性。方法构建重组质粒pPro-Rv2153c并进行原核表达及纯化,采用SDS-PAGE和Western blot法对纯化产物进行鉴定,同时采用多重微球流式免疫荧光发光(multiplexed microsphere-based flow cytometric assay,MFCIA)法检测重组Rv2153c蛋白诱导的中国Mtb感染者外周血相关细胞因子水平;将雌性C57BL/6小鼠随机分为PBS、Rv2153c/SAS亚单位疫苗、SAS、BCG组,每组6只,免疫9周后,检测小鼠外周血特异性抗体水平及脾细胞上清分泌的细胞因子水平。结果重组质粒pPro-Rv2153c经双酶切鉴定,证明构建正确。表达的Rv2153c蛋白相对分子质量约43200,可与Monoclonal Mouse Anti-His Tag和MurG Antibody发生特异性反应。重组Rv2153c蛋白刺激后,活动性结核病(active pulmonary tuberculosis,ATB)受试者产生的IFNγ、TNF-α和IL-6水平显著高于Mtb潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)和健康对照(healthy control,HC)者。Rv2153c/SAS亚单位疫苗组小鼠血清特异性抗体滴度显著高于其他各组,且IgG2a/IgG1值大于1;脾细胞上清分泌的IFNγ、TNF-α和IL-2水平也均显著高于其他各组。结论重组Rv2153c蛋白可被中国Mtb感染者外周血T细胞特异性识别,且联合SAS佐剂免疫小鼠,可诱导强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答水平,证实了Rv2153c用作新型TB疫苗候选靶抗原的可能性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv2153c murg 原核表达 多重微球流式免疫荧光发光技术 免疫原性
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