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中华蜜蜂肠粘蛋白AcMucin5AC-1的鉴定和定位分析
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作者 李小青 郭悦 +2 位作者 张洁 周泽扬 党晓群 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1150-1160,共11页
【目的】本研究旨在鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana肠粘蛋白AcMucin5AC-1的结构、分布及对中肠的影响,为解析蜜蜂中肠的生理功能提供理论依据。【方法】利用生物信息学比较分析中华蜜蜂AcMucin5AC蛋白的序列特征;利用RT-qPCR检测AcMuci... 【目的】本研究旨在鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana肠粘蛋白AcMucin5AC-1的结构、分布及对中肠的影响,为解析蜜蜂中肠的生理功能提供理论依据。【方法】利用生物信息学比较分析中华蜜蜂AcMucin5AC蛋白的序列特征;利用RT-qPCR检测AcMucin 5 AC-1在中华蜜蜂4日龄幼虫中肠和表皮以及2日龄幼虫感染中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)后0,12,24,48和72 h时中肠中的表达量。通过原核表达系统对中华蜜蜂AcMucin5AC-1进行表达,亲和层析柱纯化重组蛋白并制备相应多克隆抗体;Western blot检测AcMucin5AC-1在中华蜜蜂健康3-6日龄幼虫中以及4日龄幼虫中肠、表皮和围食膜中的表达,应用间接免疫荧光试验分析AcMucin5AC-1在中华蜜蜂4日龄幼虫中的定位。通过饲喂法利用RNAi沉默中华蜜蜂2日龄幼虫AcMucin 5 AC-1后12,24,48和72 h时分析RNAi干扰效率,利用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法探究RNAi干扰2日幼虫AcMucin 5 AC-1后24,48和72 h时对中华蜜蜂幼虫整体组织形态的影响。【结果】中华蜜蜂基因组中有8个AcMucin5AC基因,其氨基酸序列均含有粘蛋白结构域。RT-qPCR检测结果表明,AcMucin 5 AC-1在中华蜜蜂4日龄幼虫中肠中表达量较表皮中的高,且在感染CSBV病毒的12和72 h时的2日龄幼虫中肠中比对照组显著下调。成功获得约50 kD的重组蛋白AcMucin5AC-1和多克隆抗体,Western blot结果显示在中华蜜蜂3-6日龄幼虫以及4日龄幼虫中肠、表皮和围食膜的总蛋白中均能检测到AcMucin5AC-1。间接免疫荧光试验结果表明AcMucin5AC-1主要定位在4日龄幼虫中肠和围食膜。RNAi效率检测结果表明,2.0μg/头ds AcMucin 5 AC-1干扰24 h时中华蜜蜂AcMucin 5 AC-1较ds EGFP对照组表达量下调92%。HE染色检测结果表明,在AcMucin 5 AC-1的RNAi后72 h时中华蜜蜂幼虫整个肠腔的细胞间的致密程度减弱,形态结构紊乱。【结论】中华蜜蜂AcMucin5AC-1是位于幼虫的中肠和围食膜的粘蛋白,AcMucin 5 AC-1的下调影响中华蜜蜂幼虫中肠的形态,暗示该基因在幼虫中肠发育过程中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 mucin5ac 原核表达 RNAI 组织定位
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肺金合剂对咳嗽变异性哮喘小鼠气道黏液高分泌的干预作用研究
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作者 曹维宏 王绍政 +1 位作者 潘思静 陈雪 《中医药学报》 2026年第2期22-27,共6页
目的:探究肺金合剂对咳嗽变异性哮喘(CVA)小鼠气道黏液高分泌的干预作用。方法:将小鼠分为对照组、模型组、肺金合剂低剂量组、肺金合剂高剂量组、泼尼松组共5组,采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]联合激发致敏建立CVA小鼠模型,对照... 目的:探究肺金合剂对咳嗽变异性哮喘(CVA)小鼠气道黏液高分泌的干预作用。方法:将小鼠分为对照组、模型组、肺金合剂低剂量组、肺金合剂高剂量组、泼尼松组共5组,采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]联合激发致敏建立CVA小鼠模型,对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,给药组小鼠给予相应剂量的药物治疗。采用苏木精-伊红(HE)染色检测肺脏组织病理改变;阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察气管上皮细胞分泌的黏蛋白含量;免疫组化检测肺组织中黏蛋白5AC(Mucin5AC)的含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺脏和肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及血清中白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-8(IL-8)的含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠肺脏组织中表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果:与模型组相比,肺金合剂各剂量组治疗后小鼠支气管上皮杯状细胞增生、呼吸部和支气管及血管周围炎性细胞浸润及呼吸部肺泡壁纤维细胞增生减少,小鼠肺组织中杯状细胞数、Mucin5AC含量、PAS染色阳性表达面积、TNF-α、IL-4、IL-8和p-EGFR/EGFR表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:肺金合剂能够通过TNF-α/EGFR途径,减少气道黏液样蛋白的表达,减轻组织病理改变以及炎症反应,从而对气道黏液高分泌起到较好的干预作用。 展开更多
关键词 肺金合剂 咳嗽变异性哮喘 mucin5ac TNF-α/EGFR途径 气道黏液高分泌
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冷诱导RNA结合蛋白和黏蛋白5AC在间质性肺疾病的表达及临床意义
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作者 黄丽惠 董静 +3 位作者 刘晓菊 陶会会 张艺 包海荣 《中国呼吸与危重监护杂志》 2025年第5期326-335,共10页
目的探究间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)患者血清和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein,CIRBP)、黏蛋白(mucin,MUC)5AC的水平及临床意义。方... 目的探究间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)患者血清和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein,CIRBP)、黏蛋白(mucin,MUC)5AC的水平及临床意义。方法收集2022年1月—2024年2月在兰州大学第一医院呼吸与危重症医学科住院的ILD患者63例,其中特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)患者22例,结缔组织疾病相关间质性肺疾病(connective tissue disease-interstitial lung disease,CTD-ILD)患者20例,其他类型的ILD患者21例。选取同时间段人口学特征匹配的健康人30例作为健康组。采用酶联免疫吸附试验检测健康组血清和ILD患者血清及BLAF中CIRBP、MUC5AC水平,比较健康组和ILD组血清及不同类型的ILD患者血清和BALF中CIRBP、MUC5AC水平及其与患者的肺功能、血气分析及6分钟步行距离(6-minute walk distance,6MWD)之间的相关性。依据血清CIRBP、MUC5AC水平绘制受试者操作特征曲线,确定其诊断ILD的最佳临界值、敏感性和特异性。结果三组ILD患者血清CIRBP水平均高于健康组(P<0.01),但三组ILD患者间血清CIRBP水平差异无统计学意义(P>0.05);三组ILD患者与健康组以及三组ILD患者间血清MUC5AC水平差异均无统计学意义(P>0.05);三组ILD患者BALF中CIRBP、MUC5AC水平差异均无统计学意义(P>0.05)。IPF患者BALF中CIRBP与6MWD呈负相关,CTD-ILD患者血清CIRBP与动脉血氧分压和氧饱和度均呈负相关,其他ILD患者血清CIRBP与肺总量占预计值百分比(total lung capacity as a percentage of predicted value,TLC%pred)、用力肺活量占预计值百分比(forced vital capacity as a percentage of predicted value,FVC%pred)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(diffusion capacity of carbon monoxide of lung as a percentage of predicted value,DLCO%pred)、6MWD均呈负相关,BALF中CIRBP与DLCO%pred呈负相关;IPF患者BALF中MUC5AC与DLCO%pred呈负相关,CTD-ILD患者BALF中MUC5AC与TLC%pred、DLCO%pred及6MWD呈负相关,其他ILD患者血清MUC5AC与FVC%pred、DLCO%pred、6MWD呈负相关。血清CIRBP诊断ILD的敏感性和特异性分别为77.6%、96.7%。血清MUC5AC诊断ILD的敏感性和特异性分别为55.1%、76.7%;将两指标联合诊断ILD的敏感性为87.8%,特异性为86.7%。结论CIRBP和MUC5AC的高水平表达对ILD具有一定的诊断效能和病情评估作用,有可能成为ILD的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 间质性肺疾病 冷诱导RNA结合蛋白 黏蛋白5AC 肺功能 血气分析 6分钟步行距离
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痰热清注射液雾化吸入对慢性支气管炎急性发作大鼠炎症因子及黏蛋白的影响
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作者 徐庆 张明珠 +3 位作者 赵海娟 宋博 苏爽 李海龙 《中国中医药科技》 2025年第6期954-959,共6页
目的:观察痰热清注射液雾化吸入对慢性支气管炎急性发作大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子、黏蛋白及肺组织黏蛋白的影响,探讨其对慢性支气管炎急性发作的作用机制及靶点。方法:SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,沐舒坦组,痰热清低... 目的:观察痰热清注射液雾化吸入对慢性支气管炎急性发作大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子、黏蛋白及肺组织黏蛋白的影响,探讨其对慢性支气管炎急性发作的作用机制及靶点。方法:SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,沐舒坦组,痰热清低、中、高剂量组。采用小剂量脂多糖(LPS)诱导模拟革兰阴性菌感染联合被动吸烟法造模。ELISA法检测血清和BALF中TNF-α、IL-1、lL-6及黏蛋白MUC5AC含量。对肺组织进行HE染色,光镜观察。免疫组化法检测肺组织黏蛋白MUC5AC表达,并进行半定量分析。结果:与模型组比较,痰热清各组与沐舒坦组血清和BALF中TNF-α、IL-1、lL-6及MUC5AC含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,痰热清各组和沐舒坦组肺组织MUC5AC蛋白表达均减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:痰热清雾化吸入可降低血清和BALF中TNF-α、IL-l、IL-6气道炎症因子含量,减少炎症介质释放,降低黏蛋白MUC5AC含量,下调肺组织MUC5AC蛋白表达,改善气道黏液高分泌状态,高剂量雾化吸入的抗炎效果优于沐舒坦。 展开更多
关键词 痰热清注射液 慢性支气管炎急性发作 TNF-Α IL-1 lL-6 黏蛋白MUC5AC 大鼠
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金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC及水通道蛋白5表达的影响 被引量:29
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作者 柏正平 刘雨 +5 位作者 谭小宁 谭电波 邓秀娟 李仲普 刘俊 谭光波 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2019年第8期54-59,共6页
目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨其治疗气道黏液高分泌的可能机制。方法24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、金水六君煎组和阿奇霉素组,每组... 目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨其治疗气道黏液高分泌的可能机制。方法24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、金水六君煎组和阿奇霉素组,每组6只。采用烟熏加气管内脂多糖滴入制作大鼠COPD气道黏液高分泌模型,成模后给予相应药物干预,连续2周。观察大鼠一般情况,小动物肺功能仪检测肺功能,HE染色观察肺组织病理,PAS染色检测气道杯状细胞数及黏液量,RT-PCR和Western blot分别检测肺组织MUC5AC、AQP5基因与蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织HE染色符合COPD病理改变,肺功能及AQP5基因与蛋白表达明显降低(P<0.05),气道杯状细胞数、黏液量增加及MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,金水六君煎组大鼠肺功能明显改善(P<0.05,P<0.01),气道杯状细胞数、黏液量减少及肺组织MUC5AC基因与蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织AQP5基因与蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论金水六君煎可促进肺组织AQP5表达,抑制MUC5AC表达,纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是其治疗COPD气道黏液高分泌的机制之一。 展开更多
关键词 金水六君煎 慢性阻塞性肺疾病 气道黏液高分泌 黏蛋白5AC 水通道蛋白5 大鼠
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红茶提取物在炎性气道黏液高分泌中的作用 被引量:15
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作者 邬海桥 丁阳平 周向东 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-129,144,共5页
目的观察茶黄素(TF)各单体在人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用HNE刺激人肺腺癌细胞A549,导致黏液高分泌,以TF各单体(TF1、TF2、TF3)进行干预。采用MTT法测定各单体对A549细胞的活性影响,确定作用剂量后... 目的观察茶黄素(TF)各单体在人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用HNE刺激人肺腺癌细胞A549,导致黏液高分泌,以TF各单体(TF1、TF2、TF3)进行干预。采用MTT法测定各单体对A549细胞的活性影响,确定作用剂量后将A549细胞分为4组进行实验,分别为①对照组:无血清培养基培养;②HNE刺激组:HNE(50 nmol/L)刺激24 h;③TF单体干预组:分别用TF1、TF2、TF3(浓度分别为50、100、200μg/mL)作用24 h后,再予HNE刺激24 h;④AG1478干预组:先用表皮生长因子受体阻断剂AG1478(5μmol/L)处理30 min后,再予HNE刺激24 h。测定不同剂量TF1、TF2、TF3作用后黏蛋白(MUC)的变化及TF3(200μg/mL)作用时间不同(12、24、36 h)后MUC的变化。RT-PCR检测MUC5AC mRNA的变化;ELISA测定MUC5AC蛋白表达的变化。结果HNE刺激组的MUC5AC mRNA表达和MUC5AC蛋白含量显著高于对照组(P<0.01);而给予TF1、TF2、TF3预处理后,与HNE刺激组相比,两指标均明显下调(均P<0.01),且呈剂量依赖关系,其中以TF3作用最明显。TF3的作用时间也与MUC5AC的下调呈正相关;而AG1478干预组对黏液的下调作用较TF各组更强(P<0.01)。结论TF各单体虽不能完全抑制炎性黏液的分泌,但可明显降低炎性气道的黏液高分泌状态,以TF3作用最强。 展开更多
关键词 茶黄素类 黏蛋白5AC 人中性粒细胞弹性蛋白酶
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黏蛋白(MUC1、MUC2、MUC5AC和MUC6)在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义 被引量:6
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作者 庄婷 薛梅 +5 位作者 房爱菊 管冰心 梁艳 王志蕙 王妍 孟斌 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第5期107-111,共5页
目的检测黏蛋白(MUC1、MUC2、MUC5AC和MUC6)在乳腺浸润性导管癌中的表达,并探讨其临床病理学意义。方法收集207例乳腺浸润性导管癌标本,应用组织芯片以及免疫组化等技术对黏蛋白家族成员M UC1、M UC2、M UC5AC和M UC6进行检测,并对其与... 目的检测黏蛋白(MUC1、MUC2、MUC5AC和MUC6)在乳腺浸润性导管癌中的表达,并探讨其临床病理学意义。方法收集207例乳腺浸润性导管癌标本,应用组织芯片以及免疫组化等技术对黏蛋白家族成员M UC1、M UC2、M UC5AC和M UC6进行检测,并对其与临床病理学特征的关系进行分析。结果 M UC1在89.4%的被检测病例中表达。MUC1高表达的乳腺癌病例更倾向于具有低组织学级别、雌激素受体(ER)阳性、无淋巴结转移等特点。MUC1的亚细胞定位,即胞浆伴胞膜表达与乳腺癌术后复发转移具有相关性。MUC2的阳性率很低,仅为4.3%。MUC5AC与MUC6在患者标本中的表达率分别是42.0%和22.2%。除了MUC5AC与低级别导管癌、ER阳性有关,以及MUC6与HER-2呈正相关外,与乳腺癌其他因素均无明显相关性。结论 MUC1在大多数乳腺浸润性导管癌中都有表达,而MUC2、MUC5AC及MUC6的表达率则相对较低。MUC1的异位表达可能是潜在的预后不良因素。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 MUC1 MUC2 MUC5AC MUC6 组织芯片
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Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC的调节作用 被引量:3
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作者 刘峰 周向东 +2 位作者 余红梅 李琪 钟有清 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期296-300,共5页
目的探讨天然内生多肽Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。方法通过培养气道上皮细胞,选择采用香烟烟雾提取物(CSE)以及脂多糖(LPS)作为刺激因素,使用细胞免疫荧光法以及ELISA法,分别检测各组气道上皮细胞MUC5AC的胞内... 目的探讨天然内生多肽Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。方法通过培养气道上皮细胞,选择采用香烟烟雾提取物(CSE)以及脂多糖(LPS)作为刺激因素,使用细胞免疫荧光法以及ELISA法,分别检测各组气道上皮细胞MUC5AC的胞内蛋白以及胞外蛋白分泌的表达情况。结果单纯LPS刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.785±0.005)μg/ml,单纯CSE刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.803±0.005)μg/ml,均较对照组明显增多(均P<0.01)。在LPS刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.363±0.003)μg/ml,显著低于单纯LPS刺激组(P<0.01)。在CSE刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.406±0.006)μg/ml,显著低于单纯CSE刺激组(P<0.01)。单纯予Elafin处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平先后为(0.176±0.002)μg/ml及(0.193±0.004)μg/ml(P<0.05),均较对照组显著降低。结论 Elafin可以通过阻断气道黏蛋白的生成及分泌,从而达到抑制气道黏液高分泌的目的。 展开更多
关键词 ELAFIN 气道上皮细胞 黏蛋白5AC 气道黏液高分泌
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CCR3在哮喘小鼠气道组织Muc5ac表达中的作用 被引量:3
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作者 王涛 张建勇 +2 位作者 王秀丹 郑飞彦 杨红霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1019-1023,共5页
目的:探讨CCR3在哮喘小鼠气道黏蛋白5ac(Muc5ac)表达中的作用。方法:将50只清洁级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组、SB328437干预组及溶剂对照组二甲基亚砜组,各10只。测定BALF中细胞总数、分类,ELISA检测IL-4、T... 目的:探讨CCR3在哮喘小鼠气道黏蛋白5ac(Muc5ac)表达中的作用。方法:将50只清洁级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组、SB328437干预组及溶剂对照组二甲基亚砜组,各10只。测定BALF中细胞总数、分类,ELISA检测IL-4、TNF-α,肺组织HE染色,免疫组化和RT-PCR检测Muc5ac、CCR3的表达。结果:在BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、IL-4,TNF-α水平、AB-PAS阳染面积、黏蛋白Muc5ac、CCR3蛋白IOD及Muc5ac mRNA、CCR3 mRNA表达方面,哮喘组与地塞米松干预组、SB328437干预组,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论:SB328437可抑制肺组织CCR3表达,进而抑制Muc5ac的表达和分泌,从而控制气道炎症。 展开更多
关键词 哮喘 小鼠 黏蛋白5ac(Muc5ac) 趋化因子受体3拮抗剂
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克拉霉素抑制气道黏液高分泌细胞内机制的研究 被引量:9
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作者 罗琳 尤列.皮尔曼 +1 位作者 维克多.科罗索夫 周向东 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期630-634,共5页
目的研究克拉霉素(CLA)抑制气道黏液高分泌的细胞内分子机制。方法运用中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)刺激人类支气管上皮细胞株HBE16构建气道黏液高分泌模型,予以CLA和信号末端调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126进行干预,采用RT-PCR检... 目的研究克拉霉素(CLA)抑制气道黏液高分泌的细胞内分子机制。方法运用中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)刺激人类支气管上皮细胞株HBE16构建气道黏液高分泌模型,予以CLA和信号末端调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126进行干预,采用RT-PCR检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,ELISA法检测细胞上清液中MUC5AC蛋白含量,Western blotting检测细胞内磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化c-Jun N端激酶(p-JNK)、磷酸化P38(p-P38)的含量。结果克拉霉素和U0126均能降低气道黏液高分泌模型中MUC5AC基因转录和蛋白表达水平,并且使p-ERK表达水平下降,但对p-EGFR、p-JNK、p-P38的表达无明显作用。结论克拉霉素能抑制细胞内信号通路分子ERK1/2磷酸化水平,从而减少了气道上皮细胞产生MUC5AC,由此发挥抑制气道黏液高分泌的作用。 展开更多
关键词 黏蛋白5AC 中性粒细胞弹性蛋白酶 克拉霉素 信号末端调节激酶
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机械牵张对人气道黏膜上皮细胞黏蛋白5AC表达的影响及其信号通路机制研究 被引量:8
11
作者 钟甜 尤列.皮尔曼 +1 位作者 维克多.科罗索夫 周向东 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期397-400,共4页
目的观察机械牵张对人气道黏膜上皮细胞黏蛋白(MUC)表达的影响,并对其信号转导机制进行初步探讨。方法采用多功能小型生物撞击机构建体外培养的人气道黏膜上皮细胞牵张模型,分别给予丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的三条主要通路抑制... 目的观察机械牵张对人气道黏膜上皮细胞黏蛋白(MUC)表达的影响,并对其信号转导机制进行初步探讨。方法采用多功能小型生物撞击机构建体外培养的人气道黏膜上皮细胞牵张模型,分别给予丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的三条主要通路抑制剂:JNK抑制剂(SP600125)、p38蛋白激酶抑制剂(SB203580)及ERK1/2抑制剂(U0126)(浓度均为30μmol/L),并设未进行机械牵张的对照组和单纯机械牵张组。采用流式细胞仪检测牵张前后胞内游离Ca2+荧光强度的变化,激光共聚焦显微镜观察胞内游离Ca2+的分布情况,并分别采用RT-PCR和ELISA方法检测MUC5AC mRNA表达和蛋白分泌量。结果牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞胞内Ca2+浓度、MUC5AC mRNA和蛋白表达(均P<0.01)。U0126和SB203580能抑制牵张所致MUC5AC mRNA和蛋白表达增加(均P<0.01)。结论机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞黏蛋白表达,其机制可能与胞内Ca2+浓度的升高以及ERK1/2、p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 机械牵张 游离钙离子 丝裂素活化蛋白激酶 黏蛋白5AC
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Wnt/β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌 被引量:3
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作者 李琪 陈贵华 周向东 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期603-608,共6页
目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞(16HBE)黏蛋白(MUC)5AC分泌的影响,以及Wnt/β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养(阴性对照组)以及高渗培养液刺激3、6、9... 目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞(16HBE)黏蛋白(MUC)5AC分泌的影响,以及Wnt/β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养(阴性对照组)以及高渗培养液刺激3、6、9、12 h组。ELISA法检测MUC5AC分泌量,Western blotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况。将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞,再给予高渗培养液刺激。采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量,采用Western blotting法检测细胞内经典Wnt/β-catenin通路相关信号分子的表达量,细胞免疫荧光法检测核因子(NF)-κB p65核转位情况。结果高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组,且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性(均P<0.05)。高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化(均P>0.05),而Wnt4表达量显著升高(P<0.05)。高渗刺激组细胞内β-catenin和Cyclin D1的相对表达量显著高于阴性对照组,细胞免疫荧光法提示NF-κB p65核转位(均P<0.05);而经转染Wnt4 siRNA后,高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组(P<0.05),细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κB p65的核转位现象也受到显著抑制(均P<0.05)。结论高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌,Wnt/β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用。 展开更多
关键词 高渗透压 黏蛋白5AC Wnt/β-eatenin信号通路 核因子ΚB
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Elafin在人支气管上皮细胞系16HBE胞质内对黏蛋白5AC生成的影响 被引量:1
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作者 魏华生 尤列.皮尔曼 +1 位作者 维克多.科罗索夫 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第7期809-813,共5页
目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE... 目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE细胞作为对照,均给予外源性EGF作为刺激物共同孵育。以RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性。免疫共沉淀法结合Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。结果转染重组质粒的细胞中MUC5ACmRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞(MUC5AC的含量0.55±0.07)(P<0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P<0.01)。结论 Elafin能够通过促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。 展开更多
关键词 ELAFIN 核因子-ΚB 小泛素样修饰蛋白-1 类泛素化 黏蛋白5AC
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宣肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织病理、气道杯状细胞及黏蛋白5AC的影响 被引量:7
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作者 李先莉 史利卿 +5 位作者 马建岭 季坤 温绍惠 王梁敏 李渊 魏双颖 《中国医药导报》 CAS 2022年第34期8-12,共5页
目的观察宣肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织病理、气道杯状细胞及黏蛋白5AC(MUC5AC)的影响。方法将鼠龄10~12周,体重(230±20)g的40只Wistar雄性大鼠,按随机数字表法分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组10只。除... 目的观察宣肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织病理、气道杯状细胞及黏蛋白5AC(MUC5AC)的影响。方法将鼠龄10~12周,体重(230±20)g的40只Wistar雄性大鼠,按随机数字表法分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组10只。除空白组正常饲养外,其余各组采用注入脂多糖加熏香烟方法制备COPD大鼠模型。造模完成后中药组给予宣肺健脾方(1 ml/100 g),西药组给予沐舒坦(1 ml/100 g),空白组及模型组给予等量0.9%生理盐水,连续14 d。各组进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及分类,进行阿尔辛蓝-过碘酸希夫(AB-PAS)染色观察杯状细胞,行免疫组织化学法检测MUC5AC。结果空白组肺组织结构完整,未见炎症细胞浸润,模型组肺组织结构破坏及炎症反应明显,中药组肺组织结构及炎症反应较模型组改善。模型组BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组偶有少量杯状细胞,模型组杯状细胞增生高于空白组;中药组、西药组杯状细胞增生低于模型组。模型组相对着色面积高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组相对着色面积低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组肺组织MUC5AC蛋白表达高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组MUC5AC蛋白表达低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宣肺健脾方可能通过抑制杯状细胞化生,下调MUC5AC的表达,减少气道黏液高分泌;同时可减轻肺组织病理损害。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 气道黏液高分泌 宣肺健脾方 杯状细胞 黏蛋白5AC
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Cdc42蛋白参与中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞黏蛋白高分泌 被引量:1
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作者 何明欣 周向东 +3 位作者 杨雅楼 徐立 张华 李琪 《疑难病杂志》 CAS 2023年第9期982-986,共5页
目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC高分泌的关系。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以Cdc42 siRNA和NE进行干预,将细胞分为6组:对照组、NE组、NE+Cdc42 siRNA组、Cdc42 ... 目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC高分泌的关系。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以Cdc42 siRNA和NE进行干预,将细胞分为6组:对照组、NE组、NE+Cdc42 siRNA组、Cdc42 siRNA组、阴性siRNA组、NE+阴性siRNA组。采用Western blot法检测Cdc42蛋白的相对含量,ELISA和免疫荧光检测各组细胞MUC5AC蛋白的表达水平。结果与对照组相比,NE组Cdc42蛋白含量明显增加(P<0.05),细胞MUC5AC蛋白表达水平亦显著增高(P<0.001);与NE组比较,NE+Cdc42 siRNA组的MUC5AC蛋白水平显著降低(P<0.05),其Cdc42蛋白含量亦明显降低(P<0.001);Cdc42 siRNA组以及阴性siRNA组的Cdc42蛋白、MUC5AC蛋白含量相较于对照组变化不大(P>0.05)。结论Cdc42在NE诱导的气道上皮细胞黏液高分泌的形成过程中可能发挥着重要的介导作用。 展开更多
关键词 气道黏蛋白5AC 细胞分裂周期蛋白42 中性粒细胞弹性蛋白酶 黏液高分泌
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芪仙汤提取物缓解苯并芘诱导的人气道上皮细胞黏蛋白5AC高表达的机制研究 被引量:2
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作者 孙亦鹏 史兆雯 +4 位作者 倪振华 缪夏轶 林玉华 毕俊杰 王雄彪 《上海医学》 CAS 2021年第4期251-256,共6页
目的探讨芪仙汤提取物对苯并芘(BaP)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC的抑制作用及其可能的机制。方法以人支气管黏液上皮细胞NCI-H292细胞株为研究对象,用BaP刺激细胞构建MUC5AC升高模型(模型组),分别用芪仙汤提取物240μg/mL(低浓度... 目的探讨芪仙汤提取物对苯并芘(BaP)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC的抑制作用及其可能的机制。方法以人支气管黏液上皮细胞NCI-H292细胞株为研究对象,用BaP刺激细胞构建MUC5AC升高模型(模型组),分别用芪仙汤提取物240μg/mL(低浓度组)和480μg/mL(高浓度组)处理细胞株,空白组予二甲基亚砜(DMSO)处理。采用CCK-8法检测芪仙汤提取物处理后细胞活性的变化,实时荧光定量PCR检测MUC5AC和细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA水平,免疫印迹法检测MUC5AC、CYP1A1、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK(p-ERK)1/2、相对分子质量为90000核糖体S6激酶(RSK)和磷酸化p90 RSK(p-p90 RSK)蛋白质表达水平,荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果浓度≤480μg/mL的芪仙汤提取物对NCI-H292细胞株活力无显著影响。与模型组相比,芪仙汤低、高浓度组MUC5AC蛋白质和MUC5AC mRNA水平均显著降低(P<0.05或0.01),ROS荧光强度值均显著降低(P<0.05或0.01),CYP1A1 mRNA水平均显著降低(P值均<0.01),p-ERK 1/2和p-p90 RSK蛋白质水平亦显著降低(P值均<0.01)。结论芪仙汤可下调BaP诱导的人气道上皮细胞MUC5AC基因和蛋白质高水平表达,其机制与抑制芳香烃受体活化介导的ROS和ERK通路激活相关。 展开更多
关键词 芪仙汤 黏蛋白质类 黏蛋白5AC 活性氧 苯并芘 芳香烃受体
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针刺对干眼症患者泪液黏蛋白5AC表达的影响 被引量:34
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作者 吴德佩 杨军 《中国中医眼科杂志》 2012年第4期267-269,共3页
目的观察针刺治疗干眼症的疗效及对泪液黏蛋白(Mucin,MUC)5AC表达的影响。方法 50例(100只眼)干眼症患者采用针刺局部和远端相结合的方法,取穴睛明、攒竹、太阳、四白等,治疗前后观察患者干眼症状,并行泪液分泌试验(Schirmer I test,SIt... 目的观察针刺治疗干眼症的疗效及对泪液黏蛋白(Mucin,MUC)5AC表达的影响。方法 50例(100只眼)干眼症患者采用针刺局部和远端相结合的方法,取穴睛明、攒竹、太阳、四白等,治疗前后观察患者干眼症状,并行泪液分泌试验(Schirmer I test,SIt)、泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)检查,免疫组化方法检测泪液黏蛋白5AC的表达量。结果泪液分泌量(mm/5 min):治疗前5.2±2.6,治疗后7.3±2.1(t=2.71,P=0.03)。泪膜破裂时间(s):治疗前3.7±1.4,治疗后6.9±3.8(t=2.59,P=0.04)。泪液黏蛋白5AC表达量(μg/ml):治疗前0.77±0.13,治疗后0.99±0.11(t=1.98,P=0.05)。临床疗效:显效43只眼,有效46只眼,无效11只眼,总有效率为89%。结论针刺治疗可以促进泪液黏蛋白5AC的表达,提高泪膜稳定性,明显改善干眼症状。 展开更多
关键词 针刺 干眼症 黏蛋白5AC
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IL-32及IL-5对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响及地塞米松的干预作用 被引量:2
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作者 郑飞彦 代大华 +2 位作者 王莉 杨红霞 张建勇 《现代医药卫生》 2017年第19期2912-2914,共3页
目的探讨白介素32(IL-32)及IL-5对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响及地塞米松的干预作用。方法将清洁级雄性BALB/c小鼠30只随机分成生理盐水(NS)对照组(NS组)、哮喘模型(AS)组(AS组)、AS+地塞米松(DEX)干预组(AS+DEX组),各10只。AS组第1... 目的探讨白介素32(IL-32)及IL-5对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响及地塞米松的干预作用。方法将清洁级雄性BALB/c小鼠30只随机分成生理盐水(NS)对照组(NS组)、哮喘模型(AS)组(AS组)、AS+地塞米松(DEX)干预组(AS+DEX组),各10只。AS组第1、13天予0.2 mL卵清蛋白(OVA)混悬液腹腔注射致敏,第19天予5%OVA溶液雾化激发,每次30 min,连续5 d。AS+DEX组在雾化激发前30 min予地塞米松(2 mg/kg)腹腔注射干预,连续5 d,余同AS组。NS组用生理盐水进行致敏和激发。用酶联免疫吸附试验检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IL-32吸光度(OD)和IL-5含量,苏木精-伊红染色及阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色肺组织,逆转录-聚合酶链反应检测Muc5ac mRNA表达,免疫组织化学法检测Muc5ac及IL-32蛋白表达。结果 AS组小鼠BALF中IL-5含量、IL-32 OD、AB-PAS阳性表达面积、Muc5ac mRNA,Muc5ac及IL-32蛋白表达均较NS组明显增高,AS+DEX组上述指标均较AS组明显降低,但仍高于NS组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-32和IL-5可促进哮喘小鼠气道黏蛋白Muc5ac高表达,DEX可能通过下调二者的表达抑制黏液高分泌。 展开更多
关键词 哮喘 气管 白细胞介素5 白细胞介素32 地塞米松 黏蛋白5AC 小鼠
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AMD3100干预CXCR4对哮喘小鼠气道黏蛋白MUC5ac蛋白表达的影响 被引量:6
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作者 王莉 刘小静 张建勇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期1082-1087,共6页
目的探讨AMD3100(Plerixafor,普乐沙福)干预CXCR4对哮喘小鼠气道黏蛋白MUC5ac的影响及可能机制。方法6~8周BALB/C雌性小鼠分为正常组(NS组)、哮喘组(AS组)和CXCR4阻滞剂AMD3100组(AMD组),各8只。卵清蛋白(OVA)致敏后,雾化吸入OVA激发制... 目的探讨AMD3100(Plerixafor,普乐沙福)干预CXCR4对哮喘小鼠气道黏蛋白MUC5ac的影响及可能机制。方法6~8周BALB/C雌性小鼠分为正常组(NS组)、哮喘组(AS组)和CXCR4阻滞剂AMD3100组(AMD组),各8只。卵清蛋白(OVA)致敏后,雾化吸入OVA激发制备哮喘模型,各组在激发前进行干预。通过酶联免疫吸附法检测肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-4,IL-5及CXCR4,肺组织行HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理学改变;免疫组织化学检测CXCR4、气道MUC5ac蛋白表达变化,RTPCR检测肺组织CXCR4 mRNA表达水平。结果AMD3100组小鼠BALF中IL-4、IL-5、CXCR4水平、支气管周围炎症病理评分、气道上皮杯状细胞和黏液物质阳性相对着色面积、肺组织MUC5ac蛋白、CXCR4蛋白表达及CXCR4 mRNA表达水平较哮喘组降低,但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论AMD3100干预CXCR4蛋白的表达,抑制哮喘小鼠气道炎症反应及下调MUC5ac的表达,减轻气道黏液高分泌,改善哮喘症状。 展开更多
关键词 支气管哮喘 AMD3100 CXC趋化因子受体4 MUC5ac蛋白
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黏液-纤毛标志物Mucin 5AC-acetylated alpha-tubulin在过敏性鼻炎患者鼻黏膜中的表达 被引量:4
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作者 郭沐涛 周穗子 邱前辉 《中国临床新医学》 2023年第1期31-36,共6页
目的探究过敏性鼻炎(AR)患者鼻腔黏液-纤毛清除功能在鼻黏膜分子水平上的损伤表现和严重程度。方法选取2021年3月至2022年3月期间在我院进行鼻中隔偏曲手术的40例患者的下鼻甲黏膜组织,其中AR患者21例(AR组),非AR患者(对照组)19例。通... 目的探究过敏性鼻炎(AR)患者鼻腔黏液-纤毛清除功能在鼻黏膜分子水平上的损伤表现和严重程度。方法选取2021年3月至2022年3月期间在我院进行鼻中隔偏曲手术的40例患者的下鼻甲黏膜组织,其中AR患者21例(AR组),非AR患者(对照组)19例。通过免疫荧光染色方法在蛋白水平上观察及评估黏液分泌标志物Mucin 5AC(MUC5AC)和纤毛标志物acetylated alpha-tubulin(acet.α-tubulin)表达情况。结果与对照组相比,AR组黏液分泌的总免疫荧光强度增加32.365%,纤毛长度缩短将近1/2,纤毛脱落评分上升将近3倍,纤毛总免疫荧光强度下降24.555%。结论AR患者黏液分泌量显著增加,纤毛排列不齐、变短、稀疏以及脱落增加可能是导致AR患者鼻腔黏膜黏液-纤毛清除功能减弱,继而加重AR症状严重程度的分子依据。 展开更多
关键词 过敏性鼻炎 黏液-纤毛清除功能 Mucin 5AC Acetylated alpha-tubulin
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