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复合PCR扩增人mtDNA HVR方法的初探 被引量:1
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作者 李琳 邵金陵 +2 位作者 段小红 李雪娟 刘振霞 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第7期1360-1363,共4页
目的:建立一种高效的扩增线粒体DNA高可变区(mtDNA HVR)的方法。方法:本研究选取5例健康成人静脉血,用人血全基因组DNA试剂盒,提取全基因组DNA,设计引物,用复合PCR方式,对线粒体DNA中的高可变区进行扩增。复合扩增的方式为:用6对套叠引... 目的:建立一种高效的扩增线粒体DNA高可变区(mtDNA HVR)的方法。方法:本研究选取5例健康成人静脉血,用人血全基因组DNA试剂盒,提取全基因组DNA,设计引物,用复合PCR方式,对线粒体DNA中的高可变区进行扩增。复合扩增的方式为:用6对套叠引物分开进行两次独立的PCR,扩增mtDNA HVR。第一次扩增用3对引物,目标DNA片段基本涵盖整个线粒体DNA的高可变区,扩增后得到互不重叠的3个短片段,分别为113 bp,126 bp和131 bp。第二次复合扩增用其余的3对引物,目标片段基本重叠在第一次扩增所得的目标片段的区域内,扩增得到3个互不重叠的片段为124 bp,133 bp和93 bp。所有扩增产物经过纯化后测序。结果:复合PCR方式获得的mtDNA HVR基因序列完整,5个样本均出现特异性条带,电泳结果条带单一、清晰。结论:复合扩增PCR方法对mtDNA HVR区的扩增效率高,测序结果稳定,结合6对套叠引物,不但保证了序列的完整性,另外,两次独立的PCR也减少了PCR反应过程中错配的发生,此法也适用于保存时间较久的古代线粒体DNA短片段的研究。复合扩增PCR还展示出了潜在的高产量的特点,相对传统PCR显示了其更多的优势。 展开更多
关键词 mtdna hvr MULTIPLEX-PCR 套叠引物
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汉族优秀游泳、赛艇运动员mtDNA高变区Ⅰ单核苷酸多态性(SNPs)与有氧工作能力关联的比较研究 被引量:2
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作者 高炳宏 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2009年第3期28-37,42,共11页
目的:探讨汉族优秀游泳、赛艇运动员和普通人mtDNA高变区ⅠSNPs在本群体中的频率分布高于10%位点的分布特点,并对两项目运动员mtDNA高变区ⅠSNPs与有氧工作能力进行关联分析;方法:分别以54、55和71名汉族优秀游泳、赛艇运动员和普通人... 目的:探讨汉族优秀游泳、赛艇运动员和普通人mtDNA高变区ⅠSNPs在本群体中的频率分布高于10%位点的分布特点,并对两项目运动员mtDNA高变区ⅠSNPs与有氧工作能力进行关联分析;方法:分别以54、55和71名汉族优秀游泳、赛艇运动员和普通人为研究对象,采用PCR产物纯化后直接测序和breath by breath方法,进行mtDNA高变区ⅠSNPs和有氧工作能力的检测;结果:1)54名游泳和55赛艇运动员mtDNA高变区ISNPs频率大于10%的位点分别为15和10个,其中,SNPs频率大于20%的位点有6个(两个项目位点完全相同),除位点C16167A外,其他均为常见SNPs;汉族普通人SNPs频率大于10%位点共有13个,大于20%位点有7个,其中,位点C16168A为普通人所独有;2)赛艇运动员位点C16167A的多态性频率高达92.7%,游泳运动员也达64.8%,明显高于普通人和我国优秀皮划艇运动员(P<0.05~0.001);3)游泳运动员有3个SNPs位点(T16362C、T16304C、C16167A)、赛艇运动员有2个SNPs位点(T16362C、T16223C),非剑桥序列组运动员的V.O2max/BW、V.Emax、O2-plusemax、Pmax或Tmax等指标显著高于剑桥序列组运动员(P<0.05~0.01);结论:1)位点C16167A可能成为汉族游泳和赛艇运动员运动能力相关的基因标记,但还需要进一步与运动员不同身体素质和运动能力表型进行关联研究后才能做出更为确定的结论;2)位点T16362C、T16304C和C16167A与汉族优秀游泳运动员的有氧工作能力存在关联,位点T16362C、T16223C与汉族优秀赛艇运动员氧工作能力存在关联,提示以上位点,可作为对运动训练有高敏感性的遗传标记,但不同项目间存在一定差异。这一研究结果对人类有氧能力和不同个体有氧能力以及运动能力的预测、评定、及其在选材中的应用均有重要意义。 展开更多
关键词 优秀运动员 汉族 游泳 赛艇 mtdna 高变区I 单核苷酸多态性(SNPs) 有氧能力
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中国内蒙古鄂伦春族线粒体DNA高变区Ⅰ和高变区Ⅱ遗传多态性 被引量:1
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作者 阎春霞 陈峰 +4 位作者 党永辉 李涛 郑海波 陈腾 李生斌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期439-447,共9页
收集50份鄂伦春族无关人群外周血样本,用ABIPRISM377测序仪对其mtDNAHVRⅠ和HVRⅡ进行测序,计算多态性位点数、单倍型数目、单倍型频率、平均核苷酸差异数目等多态性指标;结合已发表的其他民族mtDNA遗传资料,根据Nei法计算鄂伦春族与各... 收集50份鄂伦春族无关人群外周血样本,用ABIPRISM377测序仪对其mtDNAHVRⅠ和HVRⅡ进行测序,计算多态性位点数、单倍型数目、单倍型频率、平均核苷酸差异数目等多态性指标;结合已发表的其他民族mtDNA遗传资料,根据Nei法计算鄂伦春族与各群体之间的遗传距离,进行聚类分析,绘制系统发生树。鄂伦春族群体mtDNA两个高变区与CRS序列比对,分别发现52和24个多态性位点,分别界定了38和27种单倍型,单倍型多态性分别为0.964±0.018和0.929±0.019;平均核苷酸差异分别为7.379和2.408;用HVRⅠ序列多态性数据计算Fst和dA两种遗传距离,相关系数r为0.993(P<0.01);基于HVRⅠ序列的系统树显示鄂伦春族与中国台湾、南方汉族和中国香港人群遗传距离较近,与北方汉族、蒙古族及其国外人群遗传距离相对较远。我国鄂伦春族人群mtDNA具有相对独特的遗传特征,其遗传多态性和个体识别力较高,可用于民族起源、迁徙、法医学个体识别等领域研究。 展开更多
关键词 鄂伦春族 线粒体DNA 高变区Ⅰ 高变区Ⅱ 遗传多态性 遗传距离 聚类分析
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乳腺癌患者血浆线粒体D环高变区基因突变研究 被引量:1
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作者 靳斌 任军 +4 位作者 张亮 汪海丹 白俊 张利旺 斯小明 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2005年第1期1-3,10,共4页
目的:研究检测血浆线粒体DNA基因突变对于乳腺癌诊断的参考价值。方法:选取乳腺癌患者35例,健康 对照者10人,提取血浆DNA,设计两对引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增血浆线粒体DNA的D环HVR1和HVR2,然后用 变性高效液相色谱法(DHPLC)对产... 目的:研究检测血浆线粒体DNA基因突变对于乳腺癌诊断的参考价值。方法:选取乳腺癌患者35例,健康 对照者10人,提取血浆DNA,设计两对引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增血浆线粒体DNA的D环HVR1和HVR2,然后用 变性高效液相色谱法(DHPLC)对产物进行突变筛选。结果:乳腺癌患者的血浆DNA扩增率(46/140)和筛选的突变率(5/46) 与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论:检测血浆线粒体DNA基因突变可能对于乳腺癌的诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 乳腺癌 血浆DNA 患者 基因突变 诊断 D环 扩增 线粒体DNA 变性高效液相色谱法 对照组
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新疆维吾尔族群体线粒体DNA高变区Ⅰ遗传多态性
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作者 古丽巴努.阿不来提 木耶赛尔.伊斯马依力 +3 位作者 佐日古丽.伊斯马伊力 苏比奴尔.艾力 熊发政 马合木提.哈力克 《生物技术》 CAS 2018年第1期49-53,12,共6页
[目的]研究维吾尔族群体线粒体DNA高变区Ⅰ序列遗传多态性。[方法]收集240份新疆8个地域维吾尔族无关个体mt DNA高变区Ⅰ进行测序分析。[结果]发现多态性位点数为:喀什、和田、库车、且木、伊犁、哈密、吐鲁番、尉犁维吾尔族分别为75、9... [目的]研究维吾尔族群体线粒体DNA高变区Ⅰ序列遗传多态性。[方法]收集240份新疆8个地域维吾尔族无关个体mt DNA高变区Ⅰ进行测序分析。[结果]发现多态性位点数为:喀什、和田、库车、且木、伊犁、哈密、吐鲁番、尉犁维吾尔族分别为75、98、59、111、75、46和94。单倍型多样性分别为:喀什群体为0.996±0.014,和田群体为0.993±0.014,库车群体为0.993±0.015,且木群体为0.993±0.014,伊犁群体为0.993±0.013,哈密群体为0.995±0.012,吐鲁番群体为0.993±0.012,尉犁群体为0.994±0.023。用HVRⅠ序列多态性数据计算Fst和d A两种遗传距离,相关系数为r=0.993(P<0.01)。[结论]中国的维吾尔族人群mt DNA其遗传多态性和个体识别力比较高,并且维吾尔族群体是东亚与欧洲人群的过渡人群,这些数据可用于法医学、人类学、遗传制图个体识别等领域研究。 展开更多
关键词 维吾尔族 线粒体DNA 高变区Ⅰ 遗传距离 遗传多态性
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