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新疆野苹果种子MsWRKY33基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量：2
1
作者 李静 房震 叶春秀 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2328-2336,共9页
WRKY转录因子能够通过调节种子休眠和发芽来适当介导生命周期的启动。为探究新疆野苹果种子WRKY33转录因子在低温层积中的作用机理,通过对新疆野苹果[Malus sieversii(Ledeb.)M.Roem.]种子MsWRKY33进行克隆,生物信息学分析、亚细胞定位... WRKY转录因子能够通过调节种子休眠和发芽来适当介导生命周期的启动。为探究新疆野苹果种子WRKY33转录因子在低温层积中的作用机理,通过对新疆野苹果[Malus sieversii(Ledeb.)M.Roem.]种子MsWRKY33进行克隆,生物信息学分析、亚细胞定位及不同低温层积时期种子的基因表达量水平检测,初步揭示MsWRKY33基因在新疆野苹果种子低温层积下的功能。采用沙藏法进行低温(4℃)层积处理,常规保存(室温)种子作为对照,以0 d、30 d、60 d、90 d处理的新疆野苹果种子种胚为研究材料,提取种胚RNA,利用同源重组的方法克隆MsWRKY33,测序后进行生物信息学分析。并构建表达载体,进行亚细胞定位分析。最后通过实时荧光定量(qRT-PCR)分析新疆野苹果种子在不同低温层积时期MsWRKY33的表达水平。结果表明,MsWRKY33全长CDS序列为1560 bp,编码520个氨基酸。保守结构域表明,MsWRKY33为GroupⅠ家族WRKY转录因子成员;序列相似性和系统进化树分析结果显示:新疆野苹果MsWRKY33与NP_001281056.1(栽培苹果Malus domestica)、XP_050143309.1(欧洲野苹果Malus sylvestris)序列相似性度极高,亲缘关系最近;亚细胞定位分析显示MsWRKY33定位在细胞核中;不同低温层积时期qRT-PCR表达分析发现,MsWRKY33基因在低温层积60 d时表达水平最高,显著高于未层积时表达量。由此说明,新疆野苹果种子基因MsWRKY33在低温层积过程对解除种子休眠具有调控功能。 展开更多
关键词 新疆野苹果 种子 mswrky33 亚细胞定位 表达分析
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MsWRKY33转录调控MsACS2影响紫花苜蓿耐盐性的研究 被引量：7
2
作者 李心 武敬也 +3 位作者 陈菲儿 樊璐 马琳 王学敏 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期54-65,共12页
乙烯作为重要的植物激素之一,在植物逆境胁迫应答中发挥重要作用。ACS基因是乙烯合成过程中的关键限速酶(ACC合成酶)基因,本研究通过探究紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对ACS基因的调控关系,为MsWRKY33参与紫花苜蓿耐盐胁迫响应的具体调控机... 乙烯作为重要的植物激素之一,在植物逆境胁迫应答中发挥重要作用。ACS基因是乙烯合成过程中的关键限速酶(ACC合成酶)基因,本研究通过探究紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对ACS基因的调控关系,为MsWRKY33参与紫花苜蓿耐盐胁迫响应的具体调控机制奠定理论基础。利用同源克隆、载体构建、酵母单杂交、酵母双杂交、qRT-PCR等技术,验证MsWRKY33对AtACS2和MsACS2的转录调控,并对盐胁迫下转基因株系中MsACS2表达模式进行分析。结果显示:MsWRKY33转录因子可以与W-box元件特异性结合,且对AtACS2和MsACS2具有转录调控作用;MsWRKY33转基因株系中MsWRKY33基因的表达量显著高于对照,转基因株系中MsACS2的表达是在MsWRKY33基因大量表达后呈上升趋势,进一步说明紫花苜蓿MsACS2基因的表达可能受MsWRKY33转录因子的正向调控。因此,紫花苜蓿受到盐胁迫时可诱导MsWRKY33的表达,MsWRKY33转录因子通过正向调控MsACS2表达,可能影响乙烯合成,从而影响紫花苜蓿的盐胁迫响应。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 酵母单杂交 mswrky33 MsACS2 耐盐性
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紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对PstDC3000引起的细菌性叶斑病抗性研究 被引量：3
3
作者 张锦锦 李浩然 +3 位作者 马琳 王筱 张书兴 王学敏 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2021年第10期89-97,共9页
对PstDC3000侵染紫花苜蓿过程、发病症状以及MsWRKY33转录因子对PstDC3000侵染的抗性作用开展研究,为解析WRKY33转录因子抵抗细菌性叶斑病的功能提供理论依据。采用叶片注射的方法在紫花苜蓿上接种PstDC3000,通过表型观察、台盼蓝染色和... 对PstDC3000侵染紫花苜蓿过程、发病症状以及MsWRKY33转录因子对PstDC3000侵染的抗性作用开展研究,为解析WRKY33转录因子抵抗细菌性叶斑病的功能提供理论依据。采用叶片注射的方法在紫花苜蓿上接种PstDC3000,通过表型观察、台盼蓝染色和DAB染色等多种组织化学染色方法,结合植物组织病原菌浓度的测定,评价MsWRKY33超表达转基因紫花苜蓿植株和非转基因植株的感病程度。结果表明,PstDC3000能够侵染紫花苜蓿并造成紫花苜蓿感病甚至叶片死亡。表型和生理生化性状检测结果显示,MsWRKY33可以显著提高紫花苜蓿对PstDC3000的抗性,MsWRKY33转录因子在抵抗PstDC3000病原菌中发挥重要作用。为紫花苜蓿的细菌性叶斑病研究建立了一个模式,同时证明MsWRKY33基因正向调控了紫花苜蓿的细菌性叶斑病抗性,为进一步研究MsWRKY33转录因子调控紫花苜蓿的抗病机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 叶斑病 丁香假单胞菌 mswrky33转录因子 组织化学染色
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MsWRKY33蛋白的抗体制备及对非生物逆境的响应 被引量：1
4
作者 张锦锦 王云平 +2 位作者 王筱 张书兴 王学敏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期63-70,共8页
为在蛋白水平上探索紫花苜蓿MsWRKY33在抗逆性上的生物学功能,以紫花苜蓿品种中苜1号为材料,克隆了MsWRKY33抗原序列并对其性质和功能进行初步分析。对MsWRKY33蛋白的结构和特性进行生物信息学分析表明,MsWRKY33蛋白全长511 aa,主要由... 为在蛋白水平上探索紫花苜蓿MsWRKY33在抗逆性上的生物学功能,以紫花苜蓿品种中苜1号为材料,克隆了MsWRKY33抗原序列并对其性质和功能进行初步分析。对MsWRKY33蛋白的结构和特性进行生物信息学分析表明,MsWRKY33蛋白全长511 aa,主要由无规则卷曲和延伸链结构组成,不具有信号肽,是一个亲水性蛋白,免疫原性预测结果表明该蛋白免疫原性较强。结合序列的特异性选取适宜区段247~457 aa,利用该区段经蛋白纯化、免疫等步骤制备了MsWRKY33多克隆抗体。后续又采用Western Blotting的方法,对4种非生物胁迫(高盐、冷、PEG、ABA)下MsWRKY33蛋白的表达情况进行分析,发现4种胁迫均能诱导MsWRKY33蛋白表达增强,其中盐胁迫的诱导表达丰度最高,表明MsWRKY33在调控植物的高盐逆境响应中可能具有重要作用。试验结果为深入探索紫花苜蓿MsWRKY33基因功能及其对非生物逆境的抗性调控机制提供依据。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 mswrky33 多克隆抗体 蛋白免疫印记 盐胁迫
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紫花苜蓿MsWRKY33转录因子的分离及遗传转化研究 被引量：11
5
作者 冯光燕 王学敏 +3 位作者 付媛媛 方志红 高洪文 张新全 《草业学报》 CSCD 北大核心 2015年第11期48-57,共10页
WRKY转录因子是植物特有的转录因子,广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。但是对紫花苜蓿中WRKY转录因子的研究还较少。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个WRKY I类转录因子MsWRKY33。该基因CDS全长1536bp,编码512个氨基酸,结构分析显示MsWRK... WRKY转录因子是植物特有的转录因子,广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。但是对紫花苜蓿中WRKY转录因子的研究还较少。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个WRKY I类转录因子MsWRKY33。该基因CDS全长1536bp,编码512个氨基酸,结构分析显示MsWRKY33包括两个WRKY结构域和一个C2H2锌指结构(C-X4-CX23-H-X-H),表明其属于WRKY I族WRKY转录因子。亚细胞定位预测MsWRKY33蛋白定位在细胞核。MsWRKY33基因受盐、干旱和冷胁迫诱导,暗示基因可能参与了这些逆境胁迫的调控。构建原核表达载体pETMsWRKY33,SDS-PAGE分析表明在大肠杆菌中表达了MsWRKY33蛋白。扩增MsWRKY33编码区cDNA,以pBI121为基础载体,构建植物超表达载体pBI121-MsWRKY33。采用农杆菌介导的愈伤组织培养法转化紫花苜蓿。利用nptⅡ基因引物和载体特异引物检测抗性苗呈阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。qRT-PCR检测发现,MsWRKY33基因在转基因株系中得到增强表达。本研究为进一步探索WRKY转录因子基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 犕狊犠犚犓犢33 转录因子 遗传转化
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