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新疆野苹果MsPYR1-like基因生物信息学分析及其在种子萌发过程中的表达模式
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作者 房震 李静 +2 位作者 马娟 张凯 叶春秀 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期23-33,共11页
【目的】克隆新疆野苹果(Malus sieversii)脱落酸受体基因MsPYR1-like,研究其在4℃低温沙藏过程中的表达规律,为揭示MsPYR1-like基因的功能及其在新疆野苹果种子休眠解除中的作用提供依据。【方法】从NCBI数据库中选择金冠苹果(Malus do... 【目的】克隆新疆野苹果(Malus sieversii)脱落酸受体基因MsPYR1-like,研究其在4℃低温沙藏过程中的表达规律,为揭示MsPYR1-like基因的功能及其在新疆野苹果种子休眠解除中的作用提供依据。【方法】从NCBI数据库中选择金冠苹果(Malus domestica)PYR1-like基因序列,将其与新疆野苹果转录组数据库进行BLAST同源比对,获得新疆野苹果PYR1-like基因序列。采用在线网站Expasy ProtParma、Expasy ProtScale、TMHMM2.0、SignalP-6.0和Plant-mPLoc,对MsPYR1-like蛋白进行理化特性和亲疏水性分析以及跨膜结构、信号肽和亚细胞定位预测。使用NCBI的CDD数据库、SOPMA和Swiss-Model Workspace,分析MsPYR1-like蛋白的保守结构域、预测蛋白二级和三级结构。利用DNAMAN和MEGA 11进行蛋白序列比对和构建蛋白系统进化树,构建MsPYR1-like基因载体并对侵染烟草叶片进行亚细胞定位。采用室温和4℃低温沙藏层积法处理新疆野苹果种子,于处理0,30,60,90和120 d时取样测定种子萌发率,同时采用实时荧光定量PCR检测种子MsPYR1-like的相对表达量,采用酶联免疫吸附法测定脱落酸含量,分析种子萌发率、MsPYR1-like相对表达量和脱落酸含量三者之间的关系。【结果】MsPYR1-like基因开放阅读框全长621 bp,编码206个氨基酸,分子质量为23.14 ku,等电点5.37,不稳定系数41.16,脂肪族氨基酸指数74.17,为亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜结构。其蛋白序列具有SRPBCC超家族结构域,属于PYR/PYL/RACR蛋白家族,α-螺旋和无规则卷曲为二级结构主要组成。MsPYR1-like亚细胞定位在细胞核和细胞质膜中。同源性分析和系统进化树结果显示,MsPYR1-like与欧洲野苹果(Malus sylvestris)同源蛋白的亲缘关系最近。室温处理不同时间的新疆野菜果种子萌发率均为0%,低温沙藏0,30,60,90,120 d的种子萌发率分别为0%,0%,7%,95%和100%;随沙藏层积时间的增加,室温和4℃低温处理新疆野苹果种子的脱落酸含量均呈下降趋势,室温处理MsPYR1-like基因的相对表达量逐渐增加,而低温沙藏处理MsPYR1-like基因的相对表达量呈下降趋势。【结论】MsPYR1-like基因可能参与了新疆野苹果种子的休眠解除。 展开更多
关键词 种子休眠 种子萌发 脱落酸 新疆野苹果 mspyr1-like 生物信息学
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大豆抗豆卷叶螟GmKTI1-like的功能研究
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作者 谭玉荣 陈东亮 +4 位作者 杨守臻 赖振光 唐向民 孙祖东 曾维英 《生物技术通报》 北大核心 2025年第6期99-108,共10页
【目的】Kunitz型胰蛋白酶抑制剂在增强植物抵抗害虫方面发挥重要作用。前期研究表明胰蛋白酶抑制剂GmKTI1-like与大豆抗豆卷叶螟密切相关,探究GmKTI1-like基因在豆卷叶螟胁迫中的功能,为培育抗虫新品种提供重要抗性基因和育种新材料。... 【目的】Kunitz型胰蛋白酶抑制剂在增强植物抵抗害虫方面发挥重要作用。前期研究表明胰蛋白酶抑制剂GmKTI1-like与大豆抗豆卷叶螟密切相关,探究GmKTI1-like基因在豆卷叶螟胁迫中的功能,为培育抗虫新品种提供重要抗性基因和育种新材料。【方法】从大豆叶片中克隆GmKTI1-like,利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白质结构、染色体物理定位、亚细胞定位进行分析,采用RT-qPCR分析不同组织中GmKTI1-like的表达模式;利用农杆菌介导法获得转基因植株,经过多年的分子生物学和表型鉴定,筛选携带目标基因且遗传稳定的转基因抗虫大豆新种质,对其进行接虫鉴定及胰蛋白酶抑制剂酶活测定。【结果】GmKTI1-like位于第1染色体上,其编码的GmKTI1-like包含1个KTI结构域和1个跨膜结构域,亚细胞定位分析表明,GmKTI1-like定位于细胞膜上;荧光定量PCR显示,GmKTI1-like在大豆叶片中表达量最高;与野生型(WT)相比,豆卷叶螟胁迫下,转基因大豆植株抗虫性显著增强、胰蛋白酶抑制剂含量高。【结论】过表达大豆GmKTI1-like转基因株系抗虫性能力显著提高,说明其在大豆抗豆卷叶螟的防御反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 大豆 豆卷叶螟 胰蛋白酶抑制剂 GmKTI1-like
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墨兰A类MADS-box基因APETALA1-like的克隆与时空表达特性
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作者 田云芳 李春阁 +5 位作者 王会鱼 陈丽培 张耀广 刘宇邈 陈景鲜 杨玉珍 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第19期6289-6294,共6页
本研究对墨兰APETALA1-like(AP1)基因的克隆、分析和实时荧光定量(RT-qPCR)表达发现,所克隆的AP1为MIKC型MADS-box基因,具有保守的MADS区和相对保守的K区,且与朵丽蝶兰(AFD36438.1)同源性最高,为100%。将此基因命名为CsAP1,登录号为MW65... 本研究对墨兰APETALA1-like(AP1)基因的克隆、分析和实时荧光定量(RT-qPCR)表达发现,所克隆的AP1为MIKC型MADS-box基因,具有保守的MADS区和相对保守的K区,且与朵丽蝶兰(AFD36438.1)同源性最高,为100%。将此基因命名为CsAP1,登录号为MW654192。RT-qPCR实验分析显示,CsAP1在墨兰各个时期的组织器官中均有表达,相对表达丰度从高到低依次为:花萼(Ⅲ)>叶片(Ⅲ)>根(Ⅰ)>唇瓣(Ⅲ)>花葶(Ⅲ)>叶(Ⅱ)>根(Ⅲ)>根(Ⅱ)>花葶(Ⅱ)>花瓣(Ⅲ)>叶(Ⅰ)>花蕾(Ⅱ)>子房(Ⅲ)>合蕊柱(Ⅲ)。盛花期花萼和叶片中表达丰度特别高,该基因参与花器官萼片的形成,并可能调节开花时间。从生长发育时期上看,盛花期的表达量最高,说明CsAP1调控开花时间。对于叶,3个时期表达量逐渐升高,推断CsAP1促进开花。对于生殖器官花来说,该基因的表达量从花萼到花瓣再到合蕊柱自外而内逐渐降低。本研究为进一步研究墨兰AP1基因的功能和分子机制提供了基础。 展开更多
关键词 墨兰 APETALA1-like RT-QPCR 表达分析
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The BEL1-like transcription factor GhBLH5-A05 participates in cotton response to drought stress
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作者 Jing-Bo Zhang Yao Wang +4 位作者 Shi-Peng Zhang Fan Cheng Yong Zheng Yang Li Xue-Bao Li 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2024年第1期177-187,共11页
Drought stress impairs crop growth and development.BEL1-like family transcription factors may be involved in plant response to drought stress,but little is known of the molecular mechanism by which these proteins regu... Drought stress impairs crop growth and development.BEL1-like family transcription factors may be involved in plant response to drought stress,but little is known of the molecular mechanism by which these proteins regulate plant response and defense to drought stress.Here we show that the BEL1-like transcription factor GhBLH5-A05 functions in cotton(Gossypium hirsutum)response and defense to drought stress.Expression of GhBLH5-A05 in cotton was induced by drought stress.Overexpression of GhBLH5-A05 in both Arabidopsis and cotton increased drought tolerance,whereas silencing GhBLH5-A05 in cotton resulted in elevated sensitivity to drought stress.GhBLH5-A05 binds to cis elements in the promoters of GhRD20-A09 and GhDREB2C-D05 to activate the expression of these genes.GhBLH5-A05 interacted with the KNOX transcription factor GhKNAT6-A03.Co-expression of GhBLH5-A05 and GhKNAT6-A03 increased the transcription of GhRD20-A09 and GhDREB2C-D05.We conclude that GhBLH5-A05 acts as a regulatory factor with GhKNAT6-A03 functioning in cotton response to drought stress by activating the expression of the drought-responsive genes GhRD20-A09 and GhDREB2C-D05. 展开更多
关键词 Cotton(Gossypium hirsutum) BEL1-like transcription factor Drought stress Transcriptional regulation Drought tolerance
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N6-methyladenosine reader IGF2BP2 regulates NIPSNAP1-mediated mitophagy and mitochondrial dynamics to alleviate hepatic ischemia-reperfusion injury
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作者 Shan-Shan Guo Yan Zhao +6 位作者 Yan Hu Xin-Ying Wang Xu-Zi Zhao Pei-Yan Zhong Qin-Rong Luan Zhe-Cheng Wang Ji-Hong Yao 《World Journal of Gastroenterology》 2025年第22期60-75,共16页
BACKGROUND Hepatic ischemia-reperfusion(I/R)injury related to liver transplantation and hepatic resection remains a challenge in clinical practice.Accumulating evidence indicates that mitochondrial dysfunction is a cr... BACKGROUND Hepatic ischemia-reperfusion(I/R)injury related to liver transplantation and hepatic resection remains a challenge in clinical practice.Accumulating evidence indicates that mitochondrial dysfunction is a critical cause of I/R injury.The protein 4-nitrophenylphosphatase domain and non-neuronal SNAP25-like protein homolog 1(NIPSNAP1)is involved in the regulation of mitophagy and the recruitment of autophagy receptor proteins independent of PTEN induced putative kinase 1.AIM To clarify the protective mechanism of NIPSNAP1 against hepatic I/R,with a focus on mitophagy and mitochondrial dynamics,as well as the potential mechanism by which n6-methyladenosine(m6A)modification regulates NIPSNAP1.METHODS Mice were administered an adeno-associated virus in vivo and a hepatic I/R model was established via portal vein interruption followed by reperfusion to explore the effect of NIPSNAP1 on hepatic I/R.HepG2 cells were subjected to hypoxia/reoxygenation treatment in vitro.RESULTS We observed a significant downregulation of both NIPSNAP1 and insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 2(IGF2BP2)expression in vivo and in vitro.NIPSNAP1 knockdown impaired mitophagy and disrupted mitochondrial dynamics;in contrast,NIPSNAP1 overexpression resulted in the opposite effects.Further studies revealed that IGF2BP2 functions as an m6A reader that targets and binds NIPSNAP1,thereby regulating its mRNA stability.CONCLUSION NIPSNAP1 prevents hepatic I/R injury by promoting mitophagy and maintaining mitochondrial homeostasis,serving as a novel target of the m6A reader IGF2BP2.Therefore,targeting the IGF2BP2/NIPSNAP1 axis may facilitate the development of better therapeutics for hepatic I/R. 展开更多
关键词 Hepatic ischemia-reperfusion 4-nitrophenylphosphatase domain and non-neuronal SNAP25-like protein homolog 1 MITOPHAGY Mitochondrial dynamics Interacted with insulin-like growing factor 2 mRNA-binding protein 2 mRNA stability
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文心兰开花相关OnAP1-like基因的克隆及表达分析 被引量:8
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作者 崔波 武振江 +3 位作者 刘佳 张国付 袁秀云 叶永忠 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期357-364,共8页
以南茜文心兰(Gower Ramsey)盛花期花葶提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,获得一个958 bp的AP1(APETALA1)-like基因的cDNA全长序列,其基因编码区690 bp,共编码氨基酸229个,命名为OnAP1-like(登录号:KC426946)。蛋白质二级结构分... 以南茜文心兰(Gower Ramsey)盛花期花葶提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,获得一个958 bp的AP1(APETALA1)-like基因的cDNA全长序列,其基因编码区690 bp,共编码氨基酸229个,命名为OnAP1-like(登录号:KC426946)。蛋白质二级结构分析表明,该蛋白质48.91%为α螺旋,10.92%为β折叠,40.17%为无规则卷曲,为亲水性蛋白质。蛋白序列比对和进化树分析表明,OnAP1-like蛋白与蕙兰AP1-like蛋白一致性最高,进化距离最近。利用RT-qPCR对从文心兰不同时期不同器官中的OnAP1-like基因表达量进行分析,结果表明,同一器官不同发育时期比较,在叶中,花蕾期的表达量最高;在根中,随发育时间推移,表达量逐渐升高,至花后期达到最高;在花葶中的表达量的趋势与根相同。同一时期不同器官比较,抽葶前,根中表达量高于叶片;花蕾期,花瓣中的表达量最高;盛花期和花后期,花葶中的表达量最高。推测该基因在花的发育及形成中发挥作用。 展开更多
关键词 文心兰 MADS-box基因AP1-like RT-QPCR 克隆 表达分析
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梅花PmSOC1-like基因的克隆与表达分析 被引量:8
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作者 李玉舒 杨炜茹 +2 位作者 程堂仁 王佳 张启翔 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期78-85,共8页
SOC1/TM3(Suppressor of overexpression of constans 1/Tomato MADS-box gene 3)是MADS-box家族一员,它能够整合多条开花途径的开花信号,调节植物由营养生长向生殖生长的转变。为了解梅花成花转变过程的分子机理,采用RT-PCR的方法从梅... SOC1/TM3(Suppressor of overexpression of constans 1/Tomato MADS-box gene 3)是MADS-box家族一员,它能够整合多条开花途径的开花信号,调节植物由营养生长向生殖生长的转变。为了解梅花成花转变过程的分子机理,采用RT-PCR的方法从梅花长蕊绿萼中克隆到3个SOC1的同源基因,分别命名为Pm SOC1-1、Pm SOC1-2和PmSOC1-3,并采用荧光定量PCR对3个基因的表达模式进行了分析。序列分析表明,3个基因的编码区长度分别为645 bp(Pm SOC1-1)、654 bp(Pm SOC1-2)和660 bp(Pm SOC1-3);编码的氨基酸长度分别为214,217,219 aa。系统进化结果显示,Pm SOC1-1、Pm SOC1-2和Pm SOC1-3分别与拟南芥SOC1/TM3亚家族中的SOC1、AGL42/71/72和AGL14/19聚为一组。实时荧光定量分析结果表明,3个Pm SOC1-like基因均在茎、叶等营养器官中表达量较高,在花、果实和种子等生殖器官中表达量较低;在梅花花芽分化过程中,3个Pm SOC1-like基因的表达量整体呈下降趋势,推测PmSOC1-like基因可能在诱导梅花由营养生长向生殖生长转变过程中起重要作用。 展开更多
关键词 梅花 PmSOC1-like 基因克隆 表达分析
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菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒EP-1-like基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备方法 被引量:6
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作者 刘鹏程 时敏 +3 位作者 陈亚锋 黄芳 孟祥锋 陈学新 《环境昆虫学报》 CSCD 2008年第1期33-38,共6页
本实验提取被菜蛾盘绒茧蜂寄生后24h的小菜蛾幼虫体内总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(Cotesia vestalis polydnavirus,CvBV)EP-1-like基因,将其分别克隆到表达载体pET30a、pET28a中,转化宿主菌BL21(D... 本实验提取被菜蛾盘绒茧蜂寄生后24h的小菜蛾幼虫体内总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(Cotesia vestalis polydnavirus,CvBV)EP-1-like基因,将其分别克隆到表达载体pET30a、pET28a中,转化宿主菌BL21(DE3),获得单克隆重组质粒pET-30a-EP1L和pET-28a-EP1L。经IPTG诱导,pET-28a-EP1L成功表达了约34.8kDa的包涵体蛋白。将诱导条件优化以后,采用割胶回收的方法纯化包涵体,将纯化后的表达蛋白免疫新西兰大耳兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1:128000,Western blot检测证明抗体具有良好的免疫反应特异性。 展开更多
关键词 CvBV EP-1-like 原核表达 多克隆抗体
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亚东鲑基因组中Tc1-like转座子的序列歧化特征分析 被引量:8
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作者 郭秀明 李福贵 +1 位作者 蒋霞云 邹曙明 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期15-21,共7页
根据鱼类Tc1-like超家族转座子的末端反向重复序列设计单引物,对西藏亚东鲑基因组进行PCR扩增、回收、克隆和测序,鉴定出亚东鲑两条长度为1 607 bp和1 473 bp的Tc1-like超家族转座子序列,命名为Tbt1和Tbt2。序列分析表明,亚东鲑Tbt1转... 根据鱼类Tc1-like超家族转座子的末端反向重复序列设计单引物,对西藏亚东鲑基因组进行PCR扩增、回收、克隆和测序,鉴定出亚东鲑两条长度为1 607 bp和1 473 bp的Tc1-like超家族转座子序列,命名为Tbt1和Tbt2。序列分析表明,亚东鲑Tbt1转座子左右两端分别存在一个196 nt和225 nt的末端反向重复序列(Inverted terminal repeats,ITR),在左右ITR中分别包含2个12 nt的亚末端反向重复序列(Subterminal inverted repeats,SIR);亚东鲑Tbt2转座子分别存在一个32 nt和31 nt短的ITR,其左右ITR中各仅包含1个12 nt的SIR。亚东鲑Tbt1、Tbt2转座子的转座酶编码区在进化过程中各已积累了4个和9个终止突变,两者均不能表达完整的转座酶。亚东鲑Tbt2与其它鲑科鱼类Tc1-like转座子的相似度低于30%,而与金鱼Tca2转座子的序列相似度高达98%,显示该转座子的获得可能起源于基因水平转移(horizontal gene transfer,HGT)方式。 展开更多
关键词 亚东鲑 Tc1-like转座子 序列分析
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萼脊兰SeAP1-like基因的克隆与表达载体构建 被引量:4
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作者 蒋素华 袁秀云 +3 位作者 王洁琼 武振江 张国付 崔波 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第1期105-109,共5页
根据NCBI网站上萼脊兰AP1-like全长基因序列设计引物,采用RT-PCR法从萼脊兰花瓣中扩增Se AP1-like基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的萼脊兰Se AP1-like基因为743 bp,编码247个氨基酸。将Se AP1-like基因插入p CAMBIA1304... 根据NCBI网站上萼脊兰AP1-like全长基因序列设计引物,采用RT-PCR法从萼脊兰花瓣中扩增Se AP1-like基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的萼脊兰Se AP1-like基因为743 bp,编码247个氨基酸。将Se AP1-like基因插入p CAMBIA1304载体中,经PCR、双酶切鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体p CAMBIA1304-Se AP1。对Se AP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的二维结构。结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,该蛋白分子属于亲水性蛋白。二级结构分析表明,其包含57.49%的α螺旋、6.07%的延伸链、36.44%的不规则折叠。 展开更多
关键词 萼脊兰 SE AP1-like基因 克隆 载体构建
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猪红细胞CR1-like膜分布状态的初步研究 被引量:3
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作者 尹伟 薛翼鹏 +7 位作者 姜俊兵 范阔海 孙娜 孙耀贵 马海利 李步高 王治维 李宏全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期985-990,共6页
为进一步研究猪红细胞的天然免疫调控机制,本研究合成免疫抗原肽段,制备获得了猪CR1-like单克隆抗体,并应用CR1-like单克隆抗体通过荧光免疫细胞化学技术观察猪红细胞CR1-like的天然分布状态,运用流式细胞检测技术检测了膜流动性变化对... 为进一步研究猪红细胞的天然免疫调控机制,本研究合成免疫抗原肽段,制备获得了猪CR1-like单克隆抗体,并应用CR1-like单克隆抗体通过荧光免疫细胞化学技术观察猪红细胞CR1-like的天然分布状态,运用流式细胞检测技术检测了膜流动性变化对猪红细胞CR1-like发挥免疫黏附功能的影响。结果显示,于荧光显微镜下观察,猪红细胞表面可见绿色荧光,且经膜固定处理的猪红细胞表面的绿色荧光分布呈片状,未经膜固定处理的猪红细胞表面的荧光点呈颗粒状分布,较膜固定组分布明显成簇化;流式细胞仪检测荧光强度发现,膜固定组、未固定组均明显高于空白对照组,差异极显著(P<0.01);同时未固定组平均荧光强度明显高于膜固定组,差异极显著(P<0.01)。证实天然状态下猪红细胞表面的CR1-like分布呈分散状态,发挥免疫功能时,CR1-like表现出多价高效的结合特性,其分布状态表现为颗粒样成簇分布。 展开更多
关键词 猪CR1-like单克隆抗体 分布状态 膜流动性 免疫黏附
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油茶转录因子基因CoSOC1-like的克隆和表达分析 被引量:1
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作者 黄国文 管天球 +2 位作者 赵雨云 陈莫林 刘宏辉 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2022年第2期129-139,共11页
[目的]克隆油茶的SOC1同源基因(CoSOC1-like),分析其序列特征和表达模式及其蛋白进化。[方法]以3年生油茶嫩叶为材料提取RNA,利用RT-PCR和RACE方法克隆油茶的CoSOC1-like基因,用生物信息学工具分析其序列特征,用荧光定量PCR分析其表达模... [目的]克隆油茶的SOC1同源基因(CoSOC1-like),分析其序列特征和表达模式及其蛋白进化。[方法]以3年生油茶嫩叶为材料提取RNA,利用RT-PCR和RACE方法克隆油茶的CoSOC1-like基因,用生物信息学工具分析其序列特征,用荧光定量PCR分析其表达模式,用基因瞬时表达法分析其蛋白的亚细胞定位。[结果]油茶CoSOC1-like基因的CDS全长为654 bp,推测蛋白质由127个氨基酸组成,蛋白分子量为24.958 kD,等电点(pI)为6.8,基因库的登录号为MT036382。CoSOC1-like具有植物Ⅱ型MADSbox基因的蛋白结构,且C末端含有MOTIF结构域,是一个MADS-box家族转录因子。CoSOC1-like蛋白有31个磷酸化位点,建立在二级结构基础上的CoSOC1-like蛋白的三级结构具有明显活性部位;CoSOC1-like基因瞬时表达分析表明,油茶CoSOC1-like蛋白定位于细胞核,符合转录因子的细胞核定位特征。系统进化分析表明:油茶CoSOC1-like与茶树SOC1-like蛋白聚类在同一个进化支上。荧光定量PCR分析表明:CoSOC1-like基因存在于油茶所有的器官中,尤其在花芽中的相对表达量最多。[结论]CoSOC1-like基因在油茶的花芽分化中起重要作用,也可能参与根、茎、叶和种子等器官的生长发育。本结果为进一步研究油茶成花的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 油茶 SOC1-like 克隆 序列分析 表达分析
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松墨天牛dynamin-1-like protein基因的鉴定及表达分析 被引量:2
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作者 陈敬祥 程杰 林同 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期524-532,共9页
为了探讨GTP酶超基因家族中dynamin-1-like protein基因在昆虫中的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛dynamin-1-like protein基因,命名为Ma DLP1(Gen Bank:KU245763)。该序列长为2 133 bp,编码710个氨... 为了探讨GTP酶超基因家族中dynamin-1-like protein基因在昆虫中的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛dynamin-1-like protein基因,命名为Ma DLP1(Gen Bank:KU245763)。该序列长为2 133 bp,编码710个氨基酸。由此预测的蛋白质二级结构主要由α螺旋与无规则卷曲组成,其次是β片层与β转角;Ma DLP1基因编码蛋白质,定位于细胞核。通过DNAMAN软件比对发现Ma DLP1与赤拟谷盗的DLP1同源性最高,为82%,且存在3个保守酶域;用Clustal X和MEGA4.0构建系统发育树,显示松墨天牛与赤拟谷盗处在同一分支。RT-qPCR分析结果显示,Ma DLP1在各虫态不间断表达,幼虫期在5龄幼虫中表达量最高,化蛹期间表达量先上升后下降,羽化期间表达量表现为先上升后下降,并在初羽化的成虫中表达量达到最大值;Ma DLP1在幼虫和成虫头部表达量较高,且在幼虫脂肪体中表达最高;成虫的足、翅、触角和卵巢中也都有表达。说明Ma DLP1的表达与松墨天牛的完全变态发育相关。 展开更多
关键词 松墨天牛 dynamin-1-like PROTEIN CDNA文库 RT-QPCR
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大豆GmTTG1-like基因的克隆与分析及植物表达载体构建 被引量:1
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作者 陈蕾 董德坤 +2 位作者 袁凤杰 朱丹华 金庆生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期553-559,共7页
在大豆(Glycine max L.Merr.)中克隆了一个1008bp的表皮毛相关基因GmTTG1-like(Glycine max Transparent Testa Glabra 1-like);生物信息学分析表明,GmTTG1-like蛋白在结构上具有4个WD40重复(WD40-repeat)结构域,与烟草中NtTTG2(Nicotia... 在大豆(Glycine max L.Merr.)中克隆了一个1008bp的表皮毛相关基因GmTTG1-like(Glycine max Transparent Testa Glabra 1-like);生物信息学分析表明,GmTTG1-like蛋白在结构上具有4个WD40重复(WD40-repeat)结构域,与烟草中NtTTG2(Nicotiana tabacum Testa Glabra 2)具有较高同源性。推测GmTTG1-like与大豆表皮毛的生物学功能有关,并可能作用于大豆发育和防卫反应过程。采用RTPCR和q-RT-PCR两种方法检测GmTTG1-like在植物根、茎、叶、花和种子中的表达。构建GmTTG1-like植物表达载体并获得可以侵染的农杆菌阳性克隆。 展开更多
关键词 大豆 表皮毛 GmTTG1-like WD40重复
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Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷缓解肝X受体激动剂诱导的小鼠肝脏脂肪性变 被引量:3
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作者 唐蔚青 李红霞 满永 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2008年第12期953-956,共4页
目的探讨Niemann-Pick C1-Like 1在肝X受体激动剂诱导的肝脏脂肪性变中的作用。方法给C57BL/6小鼠和Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠喂食0.015%胆固醇饮食21天,胃饲溶剂或肝X受体激动剂T0901317一周后,收集小鼠肝脏,称重;抽提肝脏... 目的探讨Niemann-Pick C1-Like 1在肝X受体激动剂诱导的肝脏脂肪性变中的作用。方法给C57BL/6小鼠和Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠喂食0.015%胆固醇饮食21天,胃饲溶剂或肝X受体激动剂T0901317一周后,收集小鼠肝脏,称重;抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏表达与脂肪合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1的mRNA水平。结果在胃饲T0901317一周后,C57BL/6小鼠肝脏由1.1±0.1g增大到2.8±0.3g,肝脏甘油三酯含量由34.2±18.1mg/g增至232.2±67.9mg/g,固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高;而Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏由0.9±0.1g增大到1.5±0.1g,肝脏甘油三酯含量由43.7±26.5mg/g增至104.9±62.1mg/g,脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高。但在T0901317诱导下,Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏脂肪酸合成酶mRNA水平仍比C57BL/6小鼠低63%。结论Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷降低肝X受体激动剂诱导的肝脏固醇调节元件结合蛋白1c和脂肪酸合成酶的表达,缓解小鼠肝脏脂肪性变。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 Niemann-Pick C1-like 1 肝X受体 肝脏脂肪性变 T0901317
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梅花花器官发育相关基因PmSOC1-like的功能初探 被引量:1
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作者 李玉舒 杨炜茹 +3 位作者 杨宇杰 程堂仁 王佳 张启翔 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期74-82,共9页
SOC1/TM3(SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS 1/Tomato MADS-box gene 3)是MADS-box家族一员,它能够整合多条开花途径的开花信号,调节植物由营养生长向生殖生长的转变。在从梅花长蕊绿萼品种中克隆到3个SOC1同源基因PmSOC1-1、P... SOC1/TM3(SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS 1/Tomato MADS-box gene 3)是MADS-box家族一员,它能够整合多条开花途径的开花信号,调节植物由营养生长向生殖生长的转变。在从梅花长蕊绿萼品种中克隆到3个SOC1同源基因PmSOC1-1、PmSOC1-2和PmSOC1-3的基础上,构建由CaMV35S启动子驱动的植物表达载体,并在拟南芥中过量表达,以研究其功能。通过对转基因植株表型观察发现,3个PmSOC1-like基因都具有使野生型拟南芥提前开花的作用。其中,PmSOC1-2作用最强,PmSOC1-1居中,PmSOC1-3作用最弱。对转基因拟南芥内源成花基因的qRT-PCR检测说明,PmSOC1-like基因主要是通过上调其下游花分生组织特性基因(AGL24、LFY、AP1和FUL)来促进植物开花;此外,PmSOC1-1和PmSOC1-2还导致了花瓣细丝状、花萼叶片化、花瓣和花萼宿存等花器官形态的改变,说明它们可能还具有影响花器官发育的功能。研究结果将有助于阐明梅花由营养生长向生殖生长转变的分子机制。 展开更多
关键词 梅花 PmSOC1-like 早花 功能分析
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池蝶蚌组织蛋白酶L1-like基因的克隆及表达特征分析 被引量:1
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作者 彭扣 胡蓓娟 +5 位作者 赵大显 王军花 盛军庆 吴娣 史建伍 洪一江 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1556-1566,共11页
为了解淡水贝类是否存在组织蛋白酶L的亚型及其亚型的免疫相关作用,本实验利用已构建的池蝶蚌血细胞全长c DNA文库,筛选获得与之同源的EST序列,结合RACE技术进一步克隆了池蝶蚌一个新的组织蛋白酶L基因的c DNA全长,命名为Hs Cts L1-lik... 为了解淡水贝类是否存在组织蛋白酶L的亚型及其亚型的免疫相关作用,本实验利用已构建的池蝶蚌血细胞全长c DNA文库,筛选获得与之同源的EST序列,结合RACE技术进一步克隆了池蝶蚌一个新的组织蛋白酶L基因的c DNA全长,命名为Hs Cts L1-like基因(Gen Bank登录号为KF015273)。该序列全长为1280 bp,5′-非翻译区(5′UTR)为31 bp,3′-非翻译区(3′UTR)为256 bp,开放阅读框区(ORF)为993 bp,编码330个氨基酸,预测蛋白相对分子量为36.86 ku,理论等电点为6.23。序列分析结果显示,Hs Cts L1-like与其他软体动物相对应序列具有共同结构特征,包含信号肽、前肽抑制域和成熟肽三部分,在其他物种中已鉴定的Cts L签名序列标签(ERF/WNIN、GNFD、GCXGG和QCHN等)在Hs Cts L1-like中均可找到。其氨基酸序列同缢蛏Cts L1(AGL33704.1)同源性最高,达67%;与报道的三角帆蚌Cts L(ADV03094)和池蝶蚌中另一个Cts L(AEX88474)仅均为52.91%;系统进化分析表明,Hs Cts L1-like与缢蛏、长牡蛎和合浦珠母贝的Cts L1聚为一分支,推测Hs Cts L1-like属于Cts L家族中的亚型1。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测显示,Hs Cts L1-like m RNA在肝脏中表达量最高,其次是卵巢和精巢。注射鳗弧菌后,血细胞和肝脏Hs Cts L1-like m RNA转录水平显著升高,暗示其是一个免疫有关的基因,参与了池蝶蚌的先天免疫应答反应。 展开更多
关键词 池蝶蚌 组织蛋白酶L1-like 组织表达 克隆 序列分析 Q RT-PCR
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ORM1-like3基因单核苷酸多态性与客家人群哮喘发病的关系 被引量:1
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作者 谭家余 黄湘 +1 位作者 袁春雷 王冬娥 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期3583-3587,共5页
目的 探讨ORM1-like 3基因的单核苷酸多态性(SNPs)与客家人群哮喘发病的相关性.方法 选取确诊的客家人群哮喘患者194例(哮喘组)和同期健康查体者200例(对照组)为研究对象,利用MassARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间... 目的 探讨ORM1-like 3基因的单核苷酸多态性(SNPs)与客家人群哮喘发病的相关性.方法 选取确诊的客家人群哮喘患者194例(哮喘组)和同期健康查体者200例(对照组)为研究对象,利用MassARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱平台对ORM1-like 3基因的6个SNPs位点进行基因分型.结果 哮喘组与对照组的性别(χ^2=0.013,P=0.909)和年龄(t=0.728,P=0.259)差异均无统计学意义.与对照组相比,哮喘组嗜酸性粒细胞计数(Z=-5.670,P=0.000)和IgE(Z=-9.158,P=0.000)明显升高,CRP水平(Z=-1.716,P=0.086)差异无统计学意义,吸入性过敏原(χ^2=55.452,P=0.000)和食物过敏原(χ^2=12.853,P=0.000)检出率明显升高.单纯哮喘组与哮喘合并过敏性鼻炎组比较,除rs3859192差异有统计学意义(χ^2=6.659,P=0.036)外,其余5个位点差异均无统计学意义(P〉0.05).总的基因型分型成功率为97.34%.与对照组相比,哮喘组rs7216389的等位基因分布(χ^2=7.103,P=0.008)和基因型分布(χ^2=7.695,P=0.021)差异均有统计学意义,但进行Bonferroni校正后基因型分布差异无统计学意义(Pc=0.126).与对照组比较,哮喘组rs12603332、rs8069176和rs3859192的等位基因分布(χ^2=2.119,P=0.145;χ^2=2.167,P=0.141;χ^2=0.026,P=0.871)和基因型分布(χ^2=2.197,P=0.333;χ^2=5.686,P=0.058;χ^2=5.052,P=0.080)差异均无统计学意义.与对照组比较,哮喘组rs2305480和rs4795400的等位基因分布(χ^2=14.722,P=0.000;χ^2=10.417,P=0.001)和基因型分布(χ^2=12.351,P=0.002;χ^2=12.271,P=0.002)差异均有统计学意义,进行Bonferroni校正后两组间差异仍均有统计学意义(Pc=0.012;Pc=0.012).与CC基因型相比,rs2305480的CT、TT基因型显著增加哮喘发生的危险性(P=0.033,P=0.003),OR值(95% CI)分别为1.763(1.044~2.978)和5.681(1.600~20.171),CT+TT基因型增加哮喘的发生,OR值(95% CI)为2.130(1.306~3.475).与TT基因型相比,rs4795400的CT基因型不增加哮喘发生的危险性(P=0.059),而CC基因型显著增加哮喘发生的危险性(P=0.002),OR值(95% CI)为4.440(1.600~12.316).在82例初次确诊的哮喘患者中,与CC基因型相比,rs2305480的CT+TT基因型的FVC占预计值百分比和FEV1占预计值百分比下降明显(均P〈0.05).与TT+CT基因型相比,rs4795400的CC基因型的FVC占预计值百分比和FEV1占预计值百分比下降亦明显(均P〈0.05);rs2305480的基因型分布在初诊哮喘的病情严重程度不同分级之间差异无统计学意义(χ^2=2.130,P=0.144),rs4795400差异有统计学意义(χ^2=9.522,P=0.002).结论 ORM1-like 3基因的rs2305480和rs4795400位点与客家人群哮喘的发病有关,它们的基因型分布可能影响初诊哮喘患者的肺功能,而且rs4795400可能与病情严重程度有关. 展开更多
关键词 哮喘 ORM1-like 3 单核苷酸多态性 客家人
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肝脏表达的Niemann-Pick C1-Like 1对小鼠胆汁胆固醇浓度的调节作用以及依折麦布对其功能的影响 被引量:1
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作者 唐蔚青 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期597-597,共1页
关键词 Niemann—Pick C1-like 1 依折麦布
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重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性
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作者 廖成水 王晓利 +5 位作者 田文静 张梦珂 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1315-1324,共10页
旋毛虫plancitoxin-1-like(Ts-Pt)是旋毛虫125种DNaseⅡ家族蛋白中唯一具有典型DNaseⅡ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点。为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-P... 旋毛虫plancitoxin-1-like(Ts-Pt)是旋毛虫125种DNaseⅡ家族蛋白中唯一具有典型DNaseⅡ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点。为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-Pt活性位点突变体片段,以p ET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达。重组Ts-Pt突变体蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析。利用琼脂糖凝胶电泳法和核酸酶酶谱分析重组Ts-Pt突变体蛋白的核酸酶活性。成功构建含Ts-Pt突变体重组质粒的基因工程菌,SDS-PAGE和亲和层析纯化结果显示,重组Ts-Pt突变体蛋白呈包涵体表达。重组蛋白经复性后并没有表现出核酸酶活性,但核酸酶酶谱分析结果显示,包涵体表达的重组Ts-Pt突变体蛋白表现出降解DNA的能力。同时,N端和C端活性位点H及HCK和DHSK突变并不影响Ts-Pt的核酸酶活性,研究结果为进一步研究庞大的DNaseⅡ家族蛋白在旋毛虫发育和感染方面的作用提供一定的参考。 展开更多
关键词 旋毛虫 plancitoxin-1-like 活性位点 突变体 核酸酶
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