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昆虫抗冻蛋白MpAFP149抗血清的制备及转基因烟草免疫定位的检测
被引量：
2
1
作者
王艳
邱立明
+3 位作者
代春英
王晶
张富春
马纪
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1101-1104,共4页
目的:制备昆虫抗冻蛋白MpAFP149特异性抗血清,以便从细胞水平阐明昆虫抗冻蛋白在转基因烟草中的功能基础。方法:将具有完整读码框的MpAFP149基因连接到真核表达载体pcDNA3上,用做DNA免疫质粒。另外,将编码成熟肽的抗冻蛋白基因片段MpsAF...
目的:制备昆虫抗冻蛋白MpAFP149特异性抗血清,以便从细胞水平阐明昆虫抗冻蛋白在转基因烟草中的功能基础。方法:将具有完整读码框的MpAFP149基因连接到真核表达载体pcDNA3上,用做DNA免疫质粒。另外,将编码成熟肽的抗冻蛋白基因片段MpsAFP149插入原核表达载体pGEX-4T-1中,形成的重组质粒pGEX-4T-1-MpsAFP149转化大肠杆菌BL21(DE3),获得融合蛋白GST-sAFP149,用于蛋白免疫。采用"DNA初免-蛋白质加强"的策略免疫小鼠,制备抗血清,Western blot检测抗血清的特异性。制备野生型和转有MpAFP149转基因烟草叶片的超薄切片,利用免疫胶体金技术检测异源抗冻蛋白的表达及亚细胞水平的表达定位。结果:构建了昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149的原核和真核表达载体;获得了预期的相对分子质量(Mr)约为36000的融合蛋白。Western blot和转基因烟草的免疫定位结果表明此免疫策略可使小鼠产生特异性的昆虫抗冻蛋白抗血清。抗冻蛋白MpAFP149在转基因烟草中得到了表达并主要分布植物细胞质外体中的细胞壁上。结论:含有抗冻蛋白基因MpAFP149的真核表达质粒pcDNA3-MpAFP149和融合蛋白GST-sAFP149,通过"DNA初免-蛋白质加强"的免疫策略,可使小鼠产生专一性的抗血清。该抗血清可有效地用于抗冻蛋白基因MpAFP149转基因烟草的免疫定位研究。
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关键词
mpafp149
基因
载体构建
抗血清
免疫定位
原文传递
叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性
被引量：
3
2
作者
王艳
马纪
+3 位作者
黄薇
邱立明
叶锋
张富春
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期1253-1260,共8页
根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Souther...
根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中,但同质化水平不高;RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T1代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302-MpAFP149)于–1℃低温处理3d,观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明,叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草,但与核转化的T1代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3d时,叶绿体型转基因烟草和T1代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%,而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。
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关键词
抗冻蛋白基因
mpafp149
叶绿体转化载体
烟草
耐寒性
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职称材料
题名
昆虫抗冻蛋白MpAFP149抗血清的制备及转基因烟草免疫定位的检测
被引量：
2
1
作者
王艳
邱立明
代春英
王晶
张富春
马纪
机构
新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1101-1104,共4页
基金
农业部转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08005-022B)
文摘
目的:制备昆虫抗冻蛋白MpAFP149特异性抗血清,以便从细胞水平阐明昆虫抗冻蛋白在转基因烟草中的功能基础。方法:将具有完整读码框的MpAFP149基因连接到真核表达载体pcDNA3上,用做DNA免疫质粒。另外,将编码成熟肽的抗冻蛋白基因片段MpsAFP149插入原核表达载体pGEX-4T-1中,形成的重组质粒pGEX-4T-1-MpsAFP149转化大肠杆菌BL21(DE3),获得融合蛋白GST-sAFP149,用于蛋白免疫。采用"DNA初免-蛋白质加强"的策略免疫小鼠,制备抗血清,Western blot检测抗血清的特异性。制备野生型和转有MpAFP149转基因烟草叶片的超薄切片,利用免疫胶体金技术检测异源抗冻蛋白的表达及亚细胞水平的表达定位。结果:构建了昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149的原核和真核表达载体;获得了预期的相对分子质量(Mr)约为36000的融合蛋白。Western blot和转基因烟草的免疫定位结果表明此免疫策略可使小鼠产生特异性的昆虫抗冻蛋白抗血清。抗冻蛋白MpAFP149在转基因烟草中得到了表达并主要分布植物细胞质外体中的细胞壁上。结论:含有抗冻蛋白基因MpAFP149的真核表达质粒pcDNA3-MpAFP149和融合蛋白GST-sAFP149,通过"DNA初免-蛋白质加强"的免疫策略,可使小鼠产生专一性的抗血清。该抗血清可有效地用于抗冻蛋白基因MpAFP149转基因烟草的免疫定位研究。
关键词
mpafp149
基因
载体构建
抗血清
免疫定位
Keywords
mpafp149 gene
vector construction
antibody
immunogold localization
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性
被引量：
3
2
作者
王艳
马纪
黄薇
邱立明
叶锋
张富春
机构
新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期1253-1260,共8页
基金
国家自然科学基金项目(30760056)
教育部2008促进与美大地区科研合作与高层次人才培养项目资助
文摘
根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中,但同质化水平不高;RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T1代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302-MpAFP149)于–1℃低温处理3d,观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明,叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草,但与核转化的T1代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3d时,叶绿体型转基因烟草和T1代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%,而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。
关键词
抗冻蛋白基因
mpafp149
叶绿体转化载体
烟草
耐寒性
Keywords
Antifreeze protein
gene
mpafp149
Chloroplast transformed vector
Tobacco
Cold tolerance
分类号
S572 [农业科学—烟草工业]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
昆虫抗冻蛋白MpAFP149抗血清的制备及转基因烟草免疫定位的检测
王艳
邱立明
代春英
王晶
张富春
马纪
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
原文传递
2
叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性
王艳
马纪
黄薇
邱立明
叶锋
张富春
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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