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mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法 被引量:1
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作者 周家伟 武志强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期172-180,共9页
【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已... 【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考。【方法】以水稻线粒体WA352基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体。【结果】第一步组装构建10个载体,第二步组装构建2个载体,最后通过multisite LR反应构建1个终表达载体。【结论】详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展。 展开更多
关键词 线粒体基因编辑 mitotalens载体 Platinum gate TALEN assembly multisite LR
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植物线粒体基因遗传操作技术研究综述
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作者 李仁蓉 韦佳秀 +3 位作者 郭春梅 丁映风 杨正安 杨飞 《植物生理学报》 北大核心 2025年第3期229-234,共6页
植物线粒体具有产生能量、氧化还原调控、代谢物合成、逆境和病害应答等重要功能,对于植物生存至关重要。由植物线粒体DNA序列产生的细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)在植物杂交育种中具有重要的应用价值。但由于缺乏线... 植物线粒体具有产生能量、氧化还原调控、代谢物合成、逆境和病害应答等重要功能,对于植物生存至关重要。由植物线粒体DNA序列产生的细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)在植物杂交育种中具有重要的应用价值。但由于缺乏线粒体遗传操作技术手段,大多数作物CMS基因功能都未能进行验证,线粒体遗传过程及其调控CMS发生的分子机理仍未能被清楚阐明。本文综述了近年提出的基于tRNA输送、PPR蛋白重新设计和mitoTALEN三种植物线粒体遗传操作技术,分别对其技术原理及其应用进行了介绍,为将来研究线粒体基因功能提供参考依据。 展开更多
关键词 线粒体 遗传操作 细胞质雄性不育 PPR蛋白 mitotalen
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线粒体DNA编辑技术及其在生物医学中的应用 被引量:1
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作者 廖媛 陈方兵 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期668-675,共8页
线粒体拥有一套独立的基因组,参与维持线粒体功能。对线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)进行编辑,可以为其基因功能、相关疾病机理和治疗研究提供重要线索。但由于mtDNA所处环境和损伤修复机制的特殊性,可用于mtDNA编辑的工具较为有... 线粒体拥有一套独立的基因组,参与维持线粒体功能。对线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)进行编辑,可以为其基因功能、相关疾病机理和治疗研究提供重要线索。但由于mtDNA所处环境和损伤修复机制的特殊性,可用于mtDNA编辑的工具较为有限。近年来,随着核酸酶技术和碱基编辑技术的快速发展,可靶向线粒体的核酸酶工具和碱基编辑器相继问世,为mtDNA编辑提供了有力工具。本文总结了近年来针对动物mtDNA而开发的一系列靶向基因编辑工具的主要进展及其在生物医学领域的应用,重点围绕mtDNA碱基编辑器DdCBE,并对mtDNA编辑目前存在的问题与应用前景做了初步展望,以期为线粒体基因编辑新工具的开发,及其在基础研究、疾病模拟和临床治疗等场景中更广泛的应用提供有益参考。 展开更多
关键词 线粒体DNA mtDNA编辑 核酸酶技术 碱基编辑器 MitoZFN mitotalen DdCBE
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Mitochondrial DNA editing:Key to the treatment of neurodegenerative diseases
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作者 Ye Hong Ying Song +2 位作者 Wenjun Wang Jinghui Shi Xi Chen 《Genes & Diseases》 2025年第4期358-369,共12页
Neuronal death is associated with mitochondrial dysfunction caused by mutations in mitochondrial DNA.Mitochondrial DNA becomes damaged when processes such as replica-tion,repair,and nucleotide synthesis are compromise... Neuronal death is associated with mitochondrial dysfunction caused by mutations in mitochondrial DNA.Mitochondrial DNA becomes damaged when processes such as replica-tion,repair,and nucleotide synthesis are compromised.This extensive accumulation of damaged mitochondrial DNA subsequently disrupts the normal function of mitochondria,lead-ing to aging,degeneration,or even death of neurons.Mitochondrial dysfunction stands as a pivotal factor in the development of neurodegenerative diseases,including Parkinson’s dis-ease,Alzheimer’s disease,Huntington’s disease,and amyotrophic lateral sclerosis.Recog-nizing the intricate nature of their pathogenesis,there is an urgent need for more effective therapeutic interventions.In recent years,mitochondrial DNA editing tools such as zinc finger nucleases,double-stranded DNA deaminase toxin A-derived cytosine base editors,and tran-scription activator-like effector ligand deaminases have emerged.Their emergence will revo-lutionize the research and treatment of mitochondrial diseases.In this review,we summarize the advancements in mitochondrial base editing technology and anticipate its utilization in neurodegenerative diseases,offering insights that may inform preventive strategies and ther-apeutic interventions for disease phenotypes. 展开更多
关键词 Base editor CRISPR-Cas9 Mitochondrial DNA mitotalens mitoZFNs Neurodegenerative diseases
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