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TYR、MITF、ASIP基因对不同羽色番鸭黑色素沉积的遗传效应研究
1
作者 陆艳凤 张蕾 +2 位作者 孙国波 段修军 陈佳乐 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期1-6,共6页
旨在探究不同羽色番鸭黑色素沉积的分子机理。本研究以黑羽及白羽番鸭各100只为研究群体,测定300日龄番鸭血浆中酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)和刺鼠信号蛋白(ASIP)的活性及总黑色素含量,并分析3个功能基因(TYR、MITF、ASI... 旨在探究不同羽色番鸭黑色素沉积的分子机理。本研究以黑羽及白羽番鸭各100只为研究群体,测定300日龄番鸭血浆中酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)和刺鼠信号蛋白(ASIP)的活性及总黑色素含量,并分析3个功能基因(TYR、MITF、ASIP)mRNA表达对番鸭5个组织(皮肤、肝脏、肾脏、胸肌和腿肌)黑色素沉积的遗传相关性。结果:黑羽番鸭血浆中的TYR及MITF活性、总黑色素含量极显著高于白羽番鸭(P<0.01),ASIP活性则显著低于白羽番鸭(P<0.05)。黑羽番鸭皮肤组织TYR、MITF的mRNA表达量最高,极显著高于肝脏、肾脏、胸肌和腿肌(P<0.01),且显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于白羽番鸭。除肝脏组织外,黑羽番鸭各组织中ASIP的mRNA表达量均低于白羽番鸭,且皮肤组织ASIP的mRNA表达量极显著低于白羽番鸭(P<0.01)。黑羽番鸭皮肤、肝脏、腿肌组织的黑色素含量极显著高于白羽番鸭(P<0.01),肾脏和胸肌黑色素含量显著高于白羽番鸭(P<0.05)。番鸭皮肤组织TYR、MITF的mRNA表达量与其黑色素含量呈极显著正相关(P<0.01),ASIP基因呈极显著负相关(P<0.01)。黑羽、白羽番鸭皮肤组织中功能基因mRNA表达与黑色素沉积的回归方程分别为Y_(1)=-1.27+0.47X_(1)+0.38X_(2)-0.41X3,Y_(2)=-1.04-0.40X_(1)-0.34X_(2)+0.48X3。研究结果揭示TYR、MITF、ASIP基因与黑色素沉积关系密切,可作为调控黑色素沉积的关键基因,用于开展番鸭羽色性状选育。 展开更多
关键词 番鸭 实时荧光定量PCR 黑色素沉积 TYR mitf ASIP 遗传效应
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miR-137靶向MITF调控山羊黑色素细胞生成黑色素的机制研究 被引量：2
2
作者 于凤姣 刘开东 +5 位作者 宋伟杰 柳楠 李和刚 赵金山 高霄霄 贺建宁 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期189-200,共12页
旨在探讨miR-137在黑山羊被毛颜色形成中的调控作用,为研究黑色素生成的分子机制提供新的视角。本研究选取4日龄黑山羊肩后约5 cm处皮肤组织分离黑色素细胞,通过免疫组化和免疫荧光试验对黑色素细胞定位,采用多巴染色和免疫荧光的方法... 旨在探讨miR-137在黑山羊被毛颜色形成中的调控作用,为研究黑色素生成的分子机制提供新的视角。本研究选取4日龄黑山羊肩后约5 cm处皮肤组织分离黑色素细胞,通过免疫组化和免疫荧光试验对黑色素细胞定位,采用多巴染色和免疫荧光的方法鉴定山羊黑色素细胞,裂解黑色素细胞测定黑色素的含量,通过细胞转染、实时荧光定量PCR、Western blot等方法探究miR-137通过靶向黑素细胞诱导转录因子(melanocyte inducing transcription factor,MITF)对黑色素细胞生成黑色素的调控机制。结果显示,在毛乳头上方及外毛根鞘处有黑色素细胞的存在,黑色素细胞呈两极或三极状,多巴染色鉴定黑色素细胞呈棕黑色阳性,免疫荧光鉴定毛色生成有关的标记基因表达阳性。转染过表达载体后的山羊黑色素细胞与NC组相比,黑色素含量降低(P<0.05),同时,inhibitor组趋势相反(P<0.05)。通过RT-qPCR与Western blot对黑色素细胞生成相关基因的表达水平进行分析,结果显示,过表达或抑制miR-137对靶基因MITF的mRNA表达水平影响并不显著(P>0.05)。而过表达miR-137对黑色素细胞生成的标志基因TYR、TYRP-1、TYRP-2的mRNA表达起抑制作用(P<0.05),同时,inhibitor组趋势相反(P<0.05)。MITF的蛋白质表达水平mimic组显著低于mimic NC组(P<0.05),inhibitor组的蛋白质表达水平显著高于inhibitor NC组(P<0.05),mimic组黑色素细胞生成的标志基因TYR、TYRP-1、TYRP-2的蛋白质表达水平显著低于mimic NC组(P<0.05),inhibitor组高于inhibitor NC组(P<0.05)。本研究发现,miR-137不影响MITF的mRNA表达量,而是通过靶向MITF间接抑制山羊黑色素细胞黑色素的生成,这为研究miR-137在山羊肤色和毛色形成中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 miR-137 mitf 黑色素细胞 黑色素生成 山羊
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基于AGE-RAGE/MITF-TYR信号通路探究人参发酵液的皮肤美白功效
3
作者 林嘉慧 严建刚 +4 位作者 谢果 刘文利 梅傲宇 李晓敏 刘洪霞 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第7期1208-1219,1288,共13页
该研究旨在通过液质联用技术鉴定人参发酵液(Panax ginseng fermentation broth,GFB)中人参皂苷成分,结合网络药理学、分子对接和实验验证探究GFB美白活性及作用机制。结果表明,GFB共含有15种主要人参皂苷成分,网络药理学和分子对接预测... 该研究旨在通过液质联用技术鉴定人参发酵液(Panax ginseng fermentation broth,GFB)中人参皂苷成分,结合网络药理学、分子对接和实验验证探究GFB美白活性及作用机制。结果表明,GFB共含有15种主要人参皂苷成分,网络药理学和分子对接预测GFB主要通过作用于高级糖基化终产物-受体/小眼畸形相关转录因子-酪氨酸酶(advanced glycation end products-receptor for advanced glycation end products/microphthalmia-associated transcription factor-tyrosinase,AGE-RAGE/MITF-TYR)通路,调节酪氨酸酶的表达和细胞对氧化应激的反应,从而减少黑色素合成。细胞实验结果表明,GFB除了能显著降低细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累(P<0.001),还能显著抑制B16小鼠黑色素瘤细胞中黑色素含量和酪氨酸酶活性(P<0.05)。GFB通过抑制AGE-RAGE/MITF-TYR信号通路,降低皮肤内ROS积累和抑制酪氨酸酶活性,最终发挥美白活性,具有多成分-多靶点-多途径的特点。 展开更多
关键词 人参发酵液 网络药理学 分子对接 美白 抗氧化 AGE-RAGE/mitf-TYR信号通路
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CDK5对羊驼皮肤黑色素细胞TYR和MITF mRNA表达的调节 被引量：10
4
作者 张瑞娜 范瑞文 +5 位作者 程志学 田雪 刘佳 高磊 马峥 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1712-1717,共6页
为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通... 为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通过Western blot和qRT-PCR的方法检测转染后黑色素细胞中CDK5蛋白、TYR和MITF mRNA的表达。免疫组化结果显示CDK5位于黑色素细胞的胞质和细胞核内;West-ern blot结果显示转染组黑色素细胞中CDK5蛋白表达量明显高于对照组;qRT-PCR结果显示CDK5可下调MITF的表达,同时上调TYR的表达,转染组黑色素细胞中MITF和TYR mRNA的表达水平分别是对照组细胞的0.264 9和3.931 3倍。结果揭示CDK5可能通过调节黑色素细胞核中TYR和MITF mRNA的表达,从而参与调控羊驼毛色形成。 展开更多
关键词 CDK5 TYR mitf 黑色素细胞 毛色 羊驼
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绵羊MITF-M在黑素细胞中过表达后的功能分析 被引量：11
5
作者 杨玉静 张丹瑾 +4 位作者 聂瑞强 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期4214-4221,共8页
【目的】小眼畸形相关转录因子-M型(microphthalmia associated transcription factor M,MITF-M)在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用,克隆绵羊小眼畸形相关转录因子-M型基因序列,研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊MITF-M是... 【目的】小眼畸形相关转录因子-M型(microphthalmia associated transcription factor M,MITF-M)在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用,克隆绵羊小眼畸形相关转录因子-M型基因序列,研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊MITF-M是否影响TYR、TYRP-1和TYRP-2的表达,从而探究对黑色素的生成的影响。【方法】使用试验室冻存的第5代绵羊黑素细胞,通过PCR方法用引物以绵羊黑素细胞cDNA为模板克隆MITF-M基因cDNA序列,构建绵羊MITF-M克隆载体和真核表达载体;通过细胞转染技术在细胞水平过量表达绵羊MITF-M;转染后使用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用分光光度计对绵羊黑素细胞中黑色素含量进行测定,并进行Real-time PCR试验检测转染后细胞MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2基因在mRNA水平表达量的变化,Western blot试验检测转染后细胞MITF、TYR蛋白水平的变化。【结果】经测序和拼接,最终获得长度为1 242 bp的绵羊MITF-M基因的cDNA序列;成功构建真核表达载体,载体上连有一个启动报告基因绿色荧光蛋白和特异性TYRP-2基因启动子;细胞转染后,在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光说明转染效率明显;分光光度计检测显示,转染后绵羊黑素细胞中黑色素量增加1.15倍(P<0.05);荧光定量检测结果显示,绵羊黑素细胞中MITF mRNA表达量增加极显著(P<0.001),表明绵羊MITF-M转染效率显著,TYR mRNA表达量增加极显著(P<0.001),TYRP-1 mRNA表达量升高至5.06倍(P<0.05),TYRP-2 mRNA表达量升高至1.49倍,变化不明显。蛋白免疫印迹结果显示,绵羊黑素细胞中MITF-M转染组MITF蛋白表达量是空载体组的1.65倍(P<0.001),转染组TYR蛋白表达量是空载体组的2.38倍(P<0.001),这与荧光定量检测结果一致。【结论】通过PCR和克隆技术及核酸测序技术获得了绵羊MITF-M基因全长1 242 bp的CDS区,过表达绵羊MITF-M会使黑素细胞TYR、TYRP-1的表达量增加,对TYRP-2的表达量变化不明显,从而揭示绵羊MITF-M可以通过调节TYR和TYRP-1的表达量控制绵羊黑素细胞中黑色素的生成。 展开更多
关键词 小眼畸形相关转录因子(mitf) TYR TYRP-1 TYRP-2
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补骨脂对SCF/Kit/MITF信号通路的调控作用 被引量：18
6
作者 王鹰 李海东 +1 位作者 孙仁美 曾志华 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2011年第9期657-660,663,共5页
目的探讨中药单体补骨脂对SCF/Kit/MITF信号通路的调控作用。方法建立黑素细胞和角质形成细胞共培养体系,加入终浓度为2mg/mL的补骨脂醇提物,每24h更换新鲜培养基和补骨脂素1次,连续3d后收集细胞,RT-PCR法检测正常对照组和补骨脂组SCF,c... 目的探讨中药单体补骨脂对SCF/Kit/MITF信号通路的调控作用。方法建立黑素细胞和角质形成细胞共培养体系,加入终浓度为2mg/mL的补骨脂醇提物,每24h更换新鲜培养基和补骨脂素1次,连续3d后收集细胞,RT-PCR法检测正常对照组和补骨脂组SCF,c-kit,MITF和酪氨酸酶mRNA的表达。用终浓度2mg/mL的补骨脂处理角质形成细胞爬片,连续3d后用免疫组化法检测正常对照组和补骨脂组SCF蛋白的表达。黑素细胞爬片,加入经补骨脂处理后的角质形成细胞上清,免疫组化法检测正常对照组和补骨脂组MITF蛋白的表达。结果补骨脂组SCF,c-kit,MITF和酪氨酸酶mRNA表达均较正常组明显增高(P=0.000)。经补骨脂处理后的角质形成细胞SCF免疫组化结果显示,细胞浆呈深棕黄色着色,与正常对照组的差异有统计学意义(P=0.000),加入经补骨脂处理的角质形成细胞培养上清后的黑素细胞MITF免疫组化结果显示,细胞核呈深棕黄色着色,与正常培养黑素细胞的差异有统计学意义(P=0.007)。结论中药单体补骨脂能促进角质形成细胞分泌SCF,进而促进MITF的表达,使酪氨酸酶表达增加。 展开更多
关键词 补骨脂 黑素细胞 角质形成细胞 SCF/Kit/mitf
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坝上长尾鸡MITF基因核心启动子鉴定与分析 被引量：6
7
作者 刘小辉 彭永东 +2 位作者 周荣艳 张传生 李祥龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1116-1123,共8页
旨在探明坝上长尾鸡小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因启动子活性区与结构,为研究MITF基因在毛囊组织中的表达调控提供依据。本研究采用双荧光素酶表达载体的方法,构建了6个含有不同长度... 旨在探明坝上长尾鸡小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因启动子活性区与结构,为研究MITF基因在毛囊组织中的表达调控提供依据。本研究采用双荧光素酶表达载体的方法,构建了6个含有不同长度坝上长尾鸡MITF基因启动子片段的pGL3-Basic表达载体及4个核心启动子区突变载体,转染DF1细胞48h后检测双荧光素酶活性。结果,确定了鸡MITF基因启动子的核心区域为-660^+200bp。其中突变位点-579bp、-505bp、-274bp、-220bp、-203^-202bp、-98bp、-46bp、-14bp、+1bp、+28bp对MITF基因启动子活性有较大影响,在突变区域预测到HOX家族(HOXA3、HOXD8、HOXD9、HOXD10、HOX11)、NF-1、DBP、TFIID和TFIIB与MITF序列的结合性发生了变化。 展开更多
关键词 坝上长尾鸡 mitf基因 启动子 转录因子
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Waardenburg综合征Ⅱ型患者MITF基因突变分析 被引量：6
8
作者 陈静 杨淑芝 +7 位作者 刘军 韩冰 王国建 张昕 康东洋 戴朴 杨伟炎 袁慧军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期433-438,共6页
Waardenburg综合征(WS)是临床上常见的常染色体显性遗传性耳聋综合征,MITF基因突变与部分Waardenburg综合征Ⅱ型(WS2)病例的发病有关。MITF属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,能调节酪氨酸酶基因,参与黑色素细胞的分化。文章... Waardenburg综合征(WS)是临床上常见的常染色体显性遗传性耳聋综合征,MITF基因突变与部分Waardenburg综合征Ⅱ型(WS2)病例的发病有关。MITF属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,能调节酪氨酸酶基因,参与黑色素细胞的分化。文章报道了1个携带MITF基因点突变的3代Waardenburg综合征Ⅱ型中国家系。先证者表现为先天性重度感音神经性聋、虹膜异色、面部雀斑;其他家系成员除一名仅表现为先天性耳聋外,均表现为颜面、上肢雀斑和/或早白发。患者可检测到c.639delA杂合突变,该突变在MITF基因第7外显子上产生了终止密码子(p.I220X),突变产生的截短的MITF蛋白没有DNA结合活性。该突变是WS2病例中第3个位于MITF第7外显子的突变,尚未见报道。该突变与已报道的位于第7外显子其他两个突变仅相差1个碱基,氨基酸改变十分相似,但在表型上有显著差别,提示遗传背景对WS临床表型有重要影响。 展开更多
关键词 Waardenburg综合征Ⅱ型 遗传性耳聋 mitf基因 基因突变
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家兔MITF基因部分外显子多态性的PCR-SSCP分析 被引量：5
9
作者 何孟颉 李挺 +2 位作者 王晓明 潘雨来 吴信生 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期575-579,共5页
小眼畸形相关转录因子MITF是色素细胞的发育成熟中的重要因子,可调控酪氨酸基因家族的表达,参与黑素生成的调控,从而影响动物的毛色。本实验采用PCR-SSCP技术,检测白色獭兔、海狸色獭兔和闽西南黑兔群体中家兔MITF基因的5个外显子和部... 小眼畸形相关转录因子MITF是色素细胞的发育成熟中的重要因子,可调控酪氨酸基因家族的表达,参与黑素生成的调控,从而影响动物的毛色。本实验采用PCR-SSCP技术,检测白色獭兔、海狸色獭兔和闽西南黑兔群体中家兔MITF基因的5个外显子和部分内含子区域的多态性,结果发现,引物1、2、5、7的扩增片段均未表现出多态,在获得的大小为255 bp的引物4扩增片段中发现一个SNP(C43T)位点,在各群体中表现为3种等位基因型AA、BB、AB。测序结果表明第4外显子扩增片段的突变位于5′端的内含子区域,不影响氨基酸序列。统计结果显示,白色獭兔群体不处在哈代温伯格平衡状态(P<0.05),其余群体则均处于平衡状态。闽西南黑兔群体表现出中度多态(0.5>PIC>0.25),其余群体为低度多态。 展开更多
关键词 家兔 mitf 毛色 多态性 PCR-SSCP
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正常人黑素细胞MITF对酪氨酸酶相关蛋白的转录调控研究 被引量：15
10
作者 黎钊 王平 +1 位作者 洪为松 郑俊惠 《医学研究杂志》 2013年第3期58-62,共5页
目的研究正常人黑素细胞小眼畸形相关转录因子(MITF)对与黑素生成密切相关的酪氨酸酶相关蛋白(TRPs)家族的转录调控。方法应用小RNA干扰技术(慢病毒感染),对培养的原代正常人黑素细胞进行MITF基因沉默,然后应用实时定量PCR和免疫印迹方... 目的研究正常人黑素细胞小眼畸形相关转录因子(MITF)对与黑素生成密切相关的酪氨酸酶相关蛋白(TRPs)家族的转录调控。方法应用小RNA干扰技术(慢病毒感染),对培养的原代正常人黑素细胞进行MITF基因沉默,然后应用实时定量PCR和免疫印迹方法,分别检测MITF基因沉默前后,MITF、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)的基因与蛋白表达水平。结果正常人黑素细胞具有显著表达的MITF、TYR、TYRP1和TYRP2;MITF基因沉默后,MITF、TYR和TYRP1的基因表达水平分别下降2倍(P=0.001)、1.5倍(P=0.05)和5倍(P=0.005),TYRP2的表达水平上调3倍(P=0.004);而MITF基因沉默后的MITF、TYR、TYRP1的蛋白表达也显著下降,TYRP2蛋白显著升高。结论 黑素细胞TRPs家族与MITF转录调控密切相关,TYRP2可能存在不依赖于MITF的转录调控。 展开更多
关键词 黑素细胞 mitf TYR TYRP1 TYRP2
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MITF基因扩增预测重组人血管内皮抑素联合达卡巴嗪一线治疗晚期黑色素瘤疗效的临床研究 被引量：6
11
作者 马家芳 孔燕 +5 位作者 崔传亮 梁龙 张虔男 唐碧霞 代杰 郭军 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2013年第6期494-497,共4页
目的探讨小眼畸形相关转录因子(MITF)基因扩增对重组人血管内皮抑素(恩度)联合达卡巴嗪一线治疗晚期黑色素瘤的疗效预测作用。方法收集60例接受恩度联合达卡巴嗪一线治疗晚期黑色素瘤患者的石蜡包埋组织样本,采用实时定量PCR检测MITF基... 目的探讨小眼畸形相关转录因子(MITF)基因扩增对重组人血管内皮抑素(恩度)联合达卡巴嗪一线治疗晚期黑色素瘤的疗效预测作用。方法收集60例接受恩度联合达卡巴嗪一线治疗晚期黑色素瘤患者的石蜡包埋组织样本,采用实时定量PCR检测MITF基因扩增,观察患者的疾病控制率和远期疗效。结果 56例晚期黑色素瘤样本成功检测,MITF基因扩增率为51.8%(29/56),其中肢端、非肢端皮肤、黏膜、原发不明黑色素瘤中的MITF基因扩增率分别为31.2%、63.2%、80.0%和36.4%(P=0.050)。MITF基因扩增组与无扩增组患者接受恩度联合达卡巴嗪治疗的疾病控制率分别为58.6%(17/29)和81.5%(22/27),差异无统计学意义(P=0.063);两组的中位无进展生存期分别为6.4个月(95%CI:0.5～12.2个月)和8.4个月(95%CI:6.8～10.3个月),差异亦无统计学意义(P=0.169)。结论中国晚期黑色素瘤患者MITF基因扩增率较高,检测MITF基因扩增可能有助于预测恩度联合达卡巴嗪治疗晚期黑色素瘤的疗效,总生存结果有待进一步随访。 展开更多
关键词 恶性黑色素瘤 重组人血管内皮抑素 恩度 达卡巴嗪 mitf扩增
暂未订购
不同物种Mitf基因编码区生物信息学分析 被引量：7
12
作者 张丽英 李祥龙 +2 位作者 周荣艳 李兰会 杨清芳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第22期13298-13300,13308,共4页
[目的]对不同物种Mitf基因编码区(CDS)进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学方法分析了小家鼠、褐家鼠、人、黑猩猩、狨、毛猩猩、猕猴、家马、大熊猫、野猪、原鸡和非洲爪蟾Mitf基因编码区的遗传多样性,并对Mitf氨基酸序列、组成... [目的]对不同物种Mitf基因编码区(CDS)进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学方法分析了小家鼠、褐家鼠、人、黑猩猩、狨、毛猩猩、猕猴、家马、大熊猫、野猪、原鸡和非洲爪蟾Mitf基因编码区的遗传多样性,并对Mitf氨基酸序列、组成成分、导肽、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构和结构域进行预测和推断。[结果]在12个物种的37条Mitf基因CDS序列中,共检测到466个多态位点,生成16种单倍型,Mitf基因序列编码区在种内及种间存在丰富的遗传多样性;Mitf蛋白理论等电点均低于7,呈酸性,N端无信号肽,无跨膜结构域,肽链表现为亲水性;蛋白质二级结构的主要元件为α-螺旋和无规则卷曲,有2个保守结构域。[结论]该研究为探明Mitf基因在不同种间和种内的遗传分化,进而为相关黑色素基因的遗传学和进化分析奠定了基础。 展开更多
关键词 mitf基因 编码区 物种 生物信息学
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Mitf-M在羊驼皮肤组织的表达与序列分析及免疫组织化学定位 被引量：7
13
作者 朱芷葳 贺俊平 +2 位作者 于秀菊 程志学 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期794-800,共7页
【目的】克隆羊驼皮肤组织表达的Mitf-M CDS序列,比较分析羊驼皮肤组织Mitf-M的特征,进一步定位分析Mitf-M蛋白表达的位置,为深入研究羊驼毛色基因表达机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增方法分段扩增Mitf-M CDS区,分别利用Clustal X... 【目的】克隆羊驼皮肤组织表达的Mitf-M CDS序列,比较分析羊驼皮肤组织Mitf-M的特征,进一步定位分析Mitf-M蛋白表达的位置,为深入研究羊驼毛色基因表达机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增方法分段扩增Mitf-M CDS区,分别利用Clustal X和BioEdit生物学软件对氨基酸序列进行多重序列比较分析,免疫组织化学技术对Mitf-M蛋白定位分析。【结果】羊驼皮肤组织表达的Mitf-M的CDS区由419个氨基酸组成,具有bHLH-zip转录家族的保守结构域,该基因与牛和犬亲缘关系最近,Mitf-M蛋白主要分布于羊驼皮肤组织毛球基底层细胞之间与毛乳头周围的黑色素细胞中。【结论】与其它物种相比较,羊驼皮肤组织表达的Mitf-M蛋白保守性很强,在进化过程中的变异不大,可见Mitf-M为毛发的色素沉积提供重要的物质基础。 展开更多
关键词 羊驼 皮肤 毛囊 mitf-M PCR 免疫组织化学
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microRNA-96-5p靶向调控羊驼黑色素细胞中MITF基因的表达 被引量：6
14
作者 张利环 马悦悦 +2 位作者 刘文艳 蓝吴涛 朱芷葳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1229-1237,共9页
旨在预测并验证调控小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因表达的关键miRNA。使用在线软件对与MITF具有靶向关系的miRNAs进行预测。在羊驼黑色素细胞中,利用荧光定量PCR检测过表达和抑制表达m... 旨在预测并验证调控小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因表达的关键miRNA。使用在线软件对与MITF具有靶向关系的miRNAs进行预测。在羊驼黑色素细胞中,利用荧光定量PCR检测过表达和抑制表达miR-96-5p后MITF基因的表达量;通过免疫细胞化学技术对过表达和抑制表达miR-96-5p的细胞进行MITF特异抗体的染色。结果表明,miR-96-5p是调控MITF表达的一个关键miRNA,经荧光定量PCR、免疫细胞化学技术检测,当过表达miR-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量极显著降低(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著低于空白组(P<0.01),当抑制表达miRNA-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量显著升高(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著高于空白组(P<0.01)。miR-96-5p可以靶向结合MITF基因,在MITF转录后水平发挥调控作用,抑制MITF的转录,抑制MITF及其下游基因TYR、TYRP1、TYRP2的表达。 展开更多
关键词 miR-96-5p mitf miRNAs预测 靶基因验证
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过表达miR-193b对黑色素细胞中MITF和TYR表达的影响 被引量：3
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作者 张亚玲 许冬梅 +5 位作者 杜斌 谢建山 范瑞文 于秀菊 朱芷葳 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期938-943,共6页
旨在探讨miR-193b对黑色素生成关键基因MITF和TYR表达的影响,进而说明miR-193b对黑色素形成的影响。本研究通过细胞转染技术,在绵羊黑色素细胞中过表达miR-193b,检测黑色素细胞中黑色素含量的变化,采用实时荧光定量PCR和Western blot分... 旨在探讨miR-193b对黑色素生成关键基因MITF和TYR表达的影响,进而说明miR-193b对黑色素形成的影响。本研究通过细胞转染技术,在绵羊黑色素细胞中过表达miR-193b,检测黑色素细胞中黑色素含量的变化,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别对转染细胞中MITF和TYR mRNA和蛋白表达水平进行测定。结果显示:过表达miR-193b的黑色素细胞,黑色素含量明显减少;MITF mRNA和TYR mRNA表达均显著降低(P<0.01),分别降低0.233倍和0.198倍;MITF和TYR蛋白表达量也显著降低(P<0.01),分别降低0.232倍和0.321倍。本研究表明,过表达miR-193b使黑色素细胞中MITF和TYR表达量降低而间接影响黑色素生成。 展开更多
关键词 miR-193b mitf TYR 黑色素细胞
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GPNMB通过调控MITF下游色素相关基因表达影响黑色素细胞色素的生成 被引量：2
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作者 赵兵令 李亚楠 +6 位作者 陈天直 刘颖 常露程 范瑞文 薛霖莉 王海东 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1334-1342,共9页
【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达... 【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达载体序列分析来筛选出合适的酶切位点,在此选取SalⅠ和XbaⅠ作为酶切位点。并对GPNMB基因序列设计含有SalⅠ和XbaⅠ酶切位点的全长引物,克隆GPNMB基因全长序列,将含有酶切位点的GPNMB基因片段与T载体进行连接,送华大基因测序。将构建成功的T载体提取质粒,双酶切后将其与含有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体相连接,送华大基因进一步测序确认。使用质粒中提试剂盒获得大量去内毒素的GPNMB慢病毒真核表达载体。通过体外培养小鼠黑色素细胞,选择细胞对数生长期利用细胞转染技术过量表达GPNMB。观察转染后黑色素细胞形态特征变化和绿色荧光蛋白的表达量,收集黑色素细胞,并对其进行转染效率验证,黑色素含量进行测定,以及经Real-time PCR和Western blot检测转染后PMEL、MITF、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的mRNA和蛋白的表达量。【结果】与正常组(Control)相比试验组(Vector-GFP-GPNMB)、空载组(Vector-GFP)中黑色素细胞的形态特征无明显变化,并且试验组、空载组的绿色荧光蛋白表达量显示5μg DNA/孔转染效率最高。相对于空载组和正常组,试验组的GPNMB mRNA和蛋白水平都显著的升高(P<0.01)。与空载组相比,试验组黑色素含量升高1.34倍,差异显著(P<0.01)。Real-time PCR检测结果显示,MITF mRNA显著降低2.25倍(P<0.01);PMEL mRNA显著升高1.59倍(P<0.05);TYRP1 mRNA显著升高2.35倍(P<0.01);TYRP2 mRNA显著升高1.60倍(P<0.01);TYR mRNA升高1.65倍和OA1 mRNA升高1.5倍,但变化不明显。Western blot检测结果显示,MITF蛋白显著降低1.59倍(P<0.01);TYR蛋白显著升高1.23倍(P<0.01);TYRP2蛋白显著升高4.35倍(P<0.01);OA1蛋白显著升高1.31倍(P<0.05);TYRP1蛋白升高1.05倍,但变化不明显。【结论】GPNMB过量表达使MITF下游基因PMEL、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的表达量增加,却使MITF的表达量降低,由此表明GPNMB可能受非MITF调控路径调节PMEL、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的表达,从而影响黑色素的生成。 展开更多
关键词 GPNMB mitf 黑色素细胞 黑色素生成
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阿魏酸调节C-KIT/MITF蛋白表达影响黑素生成的实验研究 被引量：3
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作者 李伟 王加志 +2 位作者 曲岩 王兴焱 陈景华 《中国医药导报》 CAS 2017年第6期28-31,共4页
目的探讨不同浓度阿魏酸对UVB诱导的A375细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法常规体外培养A375细胞,分为空白组、模型组、阿魏酸低浓度(10μmol/L)组、阿魏酸高浓度(100μmol/L)组和阳性对照组,除空白组外,各组均以UVB 20 mJ/cm^2照射... 目的探讨不同浓度阿魏酸对UVB诱导的A375细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法常规体外培养A375细胞,分为空白组、模型组、阿魏酸低浓度(10μmol/L)组、阿魏酸高浓度(100μmol/L)组和阳性对照组,除空白组外,各组均以UVB 20 mJ/cm^2照射,阿魏酸高低浓度组加含阿魏酸的培养液、阳性对照组加入含熊果苷的培养液作用24 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;采用多巴氧化法研究酪氨酸酶活性的变化;比色法测定黑素含量,免疫印迹法测定C-KIT和MITF蛋白表达。结果与空白组比较,模型组细胞酪氨酸酶活性和黑素含量明显增加,阿魏酸低、高浓度组和阳性对照组均可抑制UVB诱导的A375细胞酪氨酸酶活性增高和黑素生成,其机制可能是通过下调C-KIT和MITF蛋白表达而实现的。结论高浓度阿魏酸可明显下调C-KIT/MITF蛋白表达,进而抑制酪氨酸酶活性和黑素生成。 展开更多
关键词 阿魏酸 C-KIT/mitf 黑变病 黑素合成
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Mitf-M基因突变对猪耳蜗血管纹发育的影响 被引量：2
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作者 陈林军 邱士伟 +6 位作者 龙熙 陈磊 唐朝颖 塞娜 郭维维 杨仕明 韩维举 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期483-487,共5页
目的研究Mitf-M基因突变是否会引起血管纹毛细血管、边缘细胞的变化,从而进一步了解Mitf-M基因突变引起Waardenburg综合征的病变机制。方法取出生后7d、10d、30d、40d的野生型和Mitf-M突变型猪共24头,分离解剖耳蜗外侧壁,运用免疫组织... 目的研究Mitf-M基因突变是否会引起血管纹毛细血管、边缘细胞的变化,从而进一步了解Mitf-M基因突变引起Waardenburg综合征的病变机制。方法取出生后7d、10d、30d、40d的野生型和Mitf-M突变型猪共24头,分离解剖耳蜗外侧壁,运用免疫组织化学技术染色,观察野生型和Mitf-M突变型猪耳蜗血管纹毛细血管、边缘细胞在出生后不同时期的免疫荧光的差异。结果 Mitf-M突变型猪与野生型猪在出生后7d、10d及30d,血管纹毛细血管之间没有明显差异,而在40d,Mitf-M突变型猪相对野生型猪的血管纹毛细血管出现明显的减少,并有统计学意义。在7d、40d,Mitf-M突变型猪耳蜗血管纹边缘细胞的细胞骨架均无明显破坏,边缘细胞数量之间没有明显差异。结论 Mitf-M基因突变不引起血管纹边缘细胞骨架的破坏及边缘细胞数量的减少,且Mitf-M突变型猪在出生后早期30d内血管纹毛细血管没有明显变化,在40d后Mitf-M突变型猪较野生型猪的耳蜗血管纹毛细血管出现明显的减少。 展开更多
关键词 mitf 血管纹 边缘细胞 血管纹毛细血管 猪
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獭兔MITF基因部分外显子多态性研究 被引量：3
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作者 牛晓艳 任克良 +4 位作者 曹亮 李燕平 郑建婷 黄淑芳 唐耀平 《山西农业科学》 2013年第11期1231-1234,1238,共5页
M ITF是色素细胞发育成熟中的重要因子,参与黑素生成的调控,从而影响动物毛色。采用PCR测序技术,检测了白色獭兔、海狸色獭兔样本中MITF基因5个外显子区域的多态性。结果表明,外显子2,4未表现出多态,外显子1,5,7中存在一些多态位点,这... M ITF是色素细胞发育成熟中的重要因子,参与黑素生成的调控,从而影响动物毛色。采用PCR测序技术,检测了白色獭兔、海狸色獭兔样本中MITF基因5个外显子区域的多态性。结果表明,外显子2,4未表现出多态,外显子1,5,7中存在一些多态位点,这些多态位点存在于白色个体之间或白色和海狸色个体之间。表明MITF中部分多态与獭兔毛色有显著关联,说明MITF是影响毛色的关键基因。 展开更多
关键词 獭兔 mitf 毛色 多态性
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外用0.5% MITF-siRNA霜治疗黄褐斑临床疗效及安全性观察 被引量：2
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作者 赵广 殷勤伟 +3 位作者 孟如松 杨庆琪 贾恒明 张华峰 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第8期692-695,共4页
目的观察MITF-siRNA霜外用治疗黄褐斑的临床疗效及安全性。方法经临床诊断为黄褐斑的33例患者给予外用MITF-siRNA霜治疗,2次/d,并用MicroskinⅡ多功能偏振光皮肤镜图像分析系统对治疗前后黄褐斑皮损进行客观测量,通过测量L×,A×... 目的观察MITF-siRNA霜外用治疗黄褐斑的临床疗效及安全性。方法经临床诊断为黄褐斑的33例患者给予外用MITF-siRNA霜治疗,2次/d,并用MicroskinⅡ多功能偏振光皮肤镜图像分析系统对治疗前后黄褐斑皮损进行客观测量,通过测量L×,A×,B×值并计算ITAo值以评价局部外用siRNA霜的治疗效果。结果经MITF-siRNA霜外用治疗12周后,有效率90.3%,治疗前后ITAo值显著改善(P<0.01)。观察过程中仅有1例局部出现红斑,停用至红斑消退后,继续外用siRNA霜后达到显效。结论局部外用MITF-siRNA霜可以显著淡化色斑,疗效确切且安全性好。 展开更多
关键词 mitf—siRNA霜 黄褐斑 疗效观察
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