多囊卵巢综合征颗粒细胞中miR-let-7a-5p表达及其临床意义

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作者 李玉娟 李端 +2 位作者 申朝静 郝翠芳 徐仰英 《生殖医学杂志》 2026年第3期349-355,共7页

目的探讨miR-let-7a-5p表达与多囊卵巢综合征(PCOS)的发生及临床指标的相关性。方法选取2023年5-12月于青岛大学附属妇女儿童医院就诊并接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者为研究对象,PCOS患者为PCOS组(31例),因输卵管因素或男性... 目的探讨miR-let-7a-5p表达与多囊卵巢综合征(PCOS)的发生及临床指标的相关性。方法选取2023年5-12月于青岛大学附属妇女儿童医院就诊并接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者为研究对象,PCOS患者为PCOS组(31例),因输卵管因素或男性因素不孕的非PCOS患者为对照组(31例)。两组患者均采用拮抗剂促排卵方案,取卵日留取卵泡液,从卵泡液中分离颗粒细胞,提取总RNA并反转录为cDNA。定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-let-7a-5p的表达,分析miR-let-7a-5p表达量与临床相关数据的相关性。结果与对照组相比,PCOS组黄体生成素(LH)、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)、获卵数和纤维蛋白原(FIB)水平均显著升高(P<0.05);卵泡刺激素(FSH)水平、凝血酶原时间(PT)及活化部分凝血酶时间(APTT)均显著下降(P<0.05)。与对照组相比,PCOS患者颗粒细胞中miR-let-7a-5p的相对表达量显著降低(P<0.05),miR-let-7a-5p表达量与PCOS的基本临床指标均无显著相关性(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,颗粒细胞中miR-let-7a-5p的高表达与PCOS的发病风险呈显著负相关[OR=0.18,95%CI(0.05,0.64),P<0.01]。结论PCOS患者颗粒细胞中miR-let-7a-5p相对表达量显著降低,可能参与了PCOS发病机制。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 MICRORNA miR-let-7a-5p 颗粒细胞

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微RNA-let-7a-5p通过调节鼠双微体2/肿瘤蛋白53信号通路抑制胃癌细胞增殖

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作者 黄勇 赵星星 +6 位作者 程安琪 苏韫 张晗 王芳 龚红霞 曹旺杰 刘永琦 《解剖学报》 2026年第2期218-227,共10页

目的探讨微RNA let-7a-5p通过调控鼠双微体2(MDM2)/肿瘤蛋白53(p53)信号通路对胃癌细胞凋亡和周期阻滞的作用。方法收集20对胃癌组织及配对的癌旁组织标本,检测let-7a-5p表达;生物信息学数据库分析let-7a-5p在胃癌中的表达及与预后的关... 目的探讨微RNA let-7a-5p通过调控鼠双微体2(MDM2)/肿瘤蛋白53(p53)信号通路对胃癌细胞凋亡和周期阻滞的作用。方法收集20对胃癌组织及配对的癌旁组织标本,检测let-7a-5p表达;生物信息学数据库分析let-7a-5p在胃癌中的表达及与预后的关系,预测let-7a-5p的靶基因;构建let-7a-5p过表达和低表达细胞模型;CCK-8、划痕实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移、凋亡和周期分布;双荧光素酶报告基因实验验证let-7a-5p与MDM2的靶向关系;Western blotting和Real-time PCR检测MDM2、p53及通路中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞髓细胞增生原癌基因(c-myc)、Bcl-2和Bax的表达。结果与癌旁组织相比,let-7a-5p在胃癌组织中低表达(P<0.05),且低表达患者预后较差;转染let-7a-5p模拟物(let-7a-5p mimics)可明显过表达人胃癌细胞HGC-27细胞中let-7a-5p的水平(P<0.01),而转染let-7a-5p抑制剂(let-7a-5p inhibitor)可降低人胃癌细胞AGS中let-7a-5p的表达(P<0.05)。Let-7a-5p过表达可抑制HGC-27的增殖和迁移,促进凋亡和周期阻滞;Let-7a-5p低表达则促进AGS细胞增殖和迁移,抑制凋亡和周期阻滞;Targeiscan数据库和双荧光素酶报告基因实验结果表明,let-7a-5p直接靶向MDM2,负调控其表达;Western blotting和Real-time PCR实验结果表明,let-7a-5p过表达可上调p53和Bax的表达,下调MDM2、Bcl-2、Cyclin D1和c-myc的表达。Let-7a-5p低表达可上调MDM2、Bcl-2、Cyclin D1、c-myc的表达,下调p53、Bax的表达。结论Let-7a-5p通过抑制MDM2/p53信号通路促进胃癌细胞凋亡和周期阻滞。 展开更多

关键词 胃癌 微RNa-let-7a-5p 鼠双微体2/肿瘤蛋白53信号通路 周期阻滞 免疫印迹法 人

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急性缺血性脑卒中患者血清中microRNA-26a-5p、SLC7A11表达水平与认知功能障碍的相关性

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作者 吴典英 于洪 +2 位作者 张哲 王超 王忠清 《中国实验诊断学》 2026年第2期200-206,共7页

目的探究急性缺血性脑卒中患者血清中微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)、血清溶质载体家族7成员11(SLC7A11)水平与认知功能障碍的相关性。方法选择齐齐哈尔市第一医院2023年5月至2025年5月收治的急性缺血性脑卒中患者125例为研究对象,并依据... 目的探究急性缺血性脑卒中患者血清中微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)、血清溶质载体家族7成员11(SLC7A11)水平与认知功能障碍的相关性。方法选择齐齐哈尔市第一医院2023年5月至2025年5月收治的急性缺血性脑卒中患者125例为研究对象,并依据蒙特利尔认知评价(MoCA)量表,对其发病是否出现认知功能障碍分为认知障碍组(MoCA评分<26分,n=43)与非认知障碍组(MoCA评分≥26分,n=82);对比血清中miR-26a-5p、SLC7A11表达水平,行多因素Logistic回归分析影响患者发生认知功能障碍的相关因素;用Spearman秩相关分析确定血清中miR-26a-5p、SLC7A11表达水平与认知功能障碍的相关性,绘制ROC曲线分析血清中miR-26a-5p、SLC7A11对认知功能障碍的预测价值。结果认知障碍组患者高血压史、糖尿病史、高血脂史占比较高,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、活性氧(ROS)水平均明显高于非认知障碍组,差异有统计学意义(P<0.05);认知障碍组与非认知障碍组比较,SLC7A11水平下降,miR-26a-5p水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic分析显示,TNF-α、hs-CRP、ROS、miR-26a-5p、IL-1β、SLC7A11是影响急性缺血性脑卒中患者发生认知功能障碍的危险因素;Spearman秩相关分析,认知功能障碍与miR-26a-5p呈正相关,与SLC7A11呈负相关;ROC曲线分析显示,miR-26a-5p、SLC7A11联合检测效能高于单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR-26a-5p、SLC7A11是患者发生认知功能障碍的风险因素,联合检测对认知功能障碍有较高预测效能。 展开更多

关键词 急性缺血性脑卒中 微小RNa-26a-5p 血清溶质载体家族7成员1 认知功能障碍 炎症因子

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Circ_0022382/let-7a-5p/PI3K/AKT/mTOR轴促进乳腺癌细胞增殖和迁移 被引量：1

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作者 刘伟 张俊 +6 位作者 张佳雯 叶雨 诸健琴 虞绮雯 李涛 孙晓春 陈华标 《江苏大学学报(医学版)》 2025年第2期145-153,共9页

目的:研究circ_0022382对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法:①筛选乳腺癌中高表达的circRNA,首先分别对乳腺癌circRNA相关GEO数据集(GSE165884)和miRNA相关GEO数据集(GSE45498)进行差异分析,然后通过ENCORI数据库预测... 目的:研究circ_0022382对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法:①筛选乳腺癌中高表达的circRNA,首先分别对乳腺癌circRNA相关GEO数据集(GSE165884)和miRNA相关GEO数据集(GSE45498)进行差异分析,然后通过ENCORI数据库预测差异表达的circRNA所结合的miRNA,最后通过韦恩图对circRNA结合的miRNA和GEO数据库预测的miRNA取交集,得到交集的miRNA及其对应的circRNA。②分别予以收敛引物和发散引物对乳腺癌细胞MDA-MB-231来源的互补DNA(cDNA)和基因组DNA(gDNA)进行PCR,并通过琼脂糖凝胶电泳实验对PCR产物进行分离以验证circ_0022382的环形结构。③实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7及正常乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌组织和癌旁组织中circ_0022382表达水平。④在MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中分别转染si-NC、si-circ_0022382,采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用克隆形成实验和划痕愈合实验检测乳腺癌细胞增殖和迁移;qRT-PCR检测let-7a-5p的表达水平;在si-circ_0022382组中分别转染let-7a-5p inhibitor NC、let-7a-5p inhibitor,克隆形成实验和划痕愈合实验检测乳腺癌细胞增殖和迁移。⑤通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析let-7a-5p的下游信号通路;在MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中分别转染let-7a-5p NC、let-7a-5p mimic,蛋白质印迹法和细胞荧光免疫法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达,蛋白质印迹法检测let-7a-5p inhibitor和si-circ_0022382共转染后乳腺癌细胞p-AKT表达。结果:①GSE165884差异分析得到37个高表达的circRNA,GSE45498差异分析得到6个低表达的miRNA,37个高表达的circRNA中,circ_0022382对应的miRNA和6个低表达的miRNA有交集基因let-7。②乳腺癌细胞MDA-MB-231来源的cDNA既可以通过发散引物又可以通过收敛引物来扩增,而gDNA只能通过收敛引物来扩增。③与MCF-10A细胞相比,circ_0022382在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中均显著高表达(P均<0.001);乳腺癌组织中circ_0022382表达亦明显高于癌旁组织(P<0.05)。④下调circ_0022382表达后,MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖和迁移能力均显著下降(P均<0.001),let-7a-5p的表达水平均显著升高(P<0.01和P<0.05);在si-circ_0022382组中,共转染let-7a-5p inhibitor能够显著挽救MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖和迁移能力的下降(P<0.01和P<0.001)。⑤KEGG信号通路富集分析结果显示,PI3K-AKT和mTOR信号通路显著富集;与let-7a-5p NC组相比,let-7a-5p mimic组的p-AKT、p-PI3K和mTOR的蛋白水平显著下降;在si-circ_0022382组中,共转染let-7a-5p inhibitor能够显著挽救MDA-MB-231和MCF-7细胞中p-AKT表达水平的降低。结论:circ_0022382在乳腺癌中高表达,通过靶向let-7a-5p/PI3K/AKT/mTOR轴促进乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,其有可能作为乳腺癌治疗和诊断的潜在靶点。 展开更多

关键词 circ_0022382 let-7a-5p pI3K/AKT/mTOR信号通路 增殖 迁移

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血清lncRNASNHG7与miR-34a-5p水平表达在血流感染诊断及预后评估中的价值

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作者 龚晓波 彭翠翠 +2 位作者 莫滨榕 林勇清 于晓钧 《现代检验医学杂志》 2025年第5期67-72,共6页

目的探究血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)与微小RNA(miR)-34a-5p表达在血流感染(BSI)诊断及预后评估中的价值。方法选取广西梧州市红十字会医院2022年3月~2023年3月急诊科收治的193例疑似BSI患者为研究对象,经诊断后... 目的探究血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)与微小RNA(miR)-34a-5p表达在血流感染(BSI)诊断及预后评估中的价值。方法选取广西梧州市红十字会医院2022年3月~2023年3月急诊科收治的193例疑似BSI患者为研究对象,经诊断后将BSI患者作为感染组(n=100),非BSI患者作为非感染组(n=93);BSI患者治疗28天后根据预后情况,分为死亡组(n=32)和生存组(n=68)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA SNHG7,miR-34a-5p表达水平;Target Scan Human网站预测miR-34a-5p与lncRNA SNHG7的靶向关系。Pearson法分析血清lncRNA SNHG7水平与miR-34a-5p水平的相关性;多因素Logistic回归分析BSI患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA SNHG7,miR-34a-5p对预后的评估价值。结果感染组血清lncRNA SNHG7(1.47±0.35)水平显著高于非感染组(1.03±0.15),miR-34a-5p水平(0.85±0.21)显著低于非感染组(1.02±0.13),差异具有统计学意义(t=11.203,6.703,均P<0.05)。与生存组比较,死亡组血清lncRNASNHG(1.68±0.21 vs 1.37±0.19)、C反应蛋白(CRP)(85.74±9.16mg/Lvs 63.18±7.68mg/L)、降钙素原(PCT)水平(56.37±8.72ng/ml vs 34.69±5.54ng/ml)、白蛋白(92.51±10.18g/L vs 65.27±7.24g/L)、急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分(28.15±5.12分vs 16.35±4.31分)升高,血清miR-34a-5p水平(0.67±0.14 vs 0.93±0.16)降低,差异具有统计学意义(t=7.357~15.340,均P<0.05)。lncRNA SNHG7与miR-34a-5p有靶向结合位点,且lncRNA SNHG7与miR-34a-5p呈负相关(r=-0.568,P<0.05)。血清lncRNA SNHG7,miR-34a-5p为BSI患者预后的影响因素(均P<0.05)。血清lncRNA SNHG7,miR-34a-5p二者联合评估BSI患者预后的曲线下面积(AUC)优于血清lncRNA SNHG7,miR-34a-5p各自单独检测(Z=2.001,2.304,均P<0.05),其灵敏度和特异度分别为78.12%,97.06%。结论BSI患者血清lncRNA SNHG7水平明显升高,而血清miR-34a-5p水平明显降低,二者与BSI患者预后密切相关,且二者联合对BSI患者预后有较好的评估价值。 展开更多

关键词 长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7 微小RNa-34a-5p 血流感染

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miR-let-7a-5p靶向调控SNAP23影响食管鳞状细胞癌发展的研究 被引量：2

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作者 陈娇 刘清 +3 位作者 黄丛改 郑树涛 刘涛 卢晓梅 《癌变·畸变·突变》 2025年第1期63-71,共9页

目的:探讨微小RNA miR-let-7a-5p靶向调控突触体相关蛋白23(SNAP23)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)发展的机制。方法:在人类癌症差异表达的miRNA数据库(dbDEMC)中分析了食管癌组织和癌旁正常组织中miR-let-7a-5p的表达水平,在人类癌症miRNA... 目的:探讨微小RNA miR-let-7a-5p靶向调控突触体相关蛋白23(SNAP23)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)发展的机制。方法:在人类癌症差异表达的miRNA数据库(dbDEMC)中分析了食管癌组织和癌旁正常组织中miR-let-7a-5p的表达水平,在人类癌症miRNA的交互式分析和可视化数据库(CancerMIRNome)中,采用Kaplan-Meier生存曲线及对数秩检验探讨了食管癌组织中miR-let-7a-5p的表达水平与患者预后之间的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测人永生化食管上皮细胞SHEE和ESCC细胞系中miR-let-7a-5p的表达;利用慢病毒载体转染技术,构建miR-let-7a-5p过表达的稳定转染细胞株;分别采用EdU细胞增殖实验、集落形成实验检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。在dbDEMC和CancerMIRNome数据库中分析miR-let-7a-5p在食管癌患者外周血中的表达情况。在ENCORI、Diana Tarbase、miRDB数据库寻找miR-let-7a-5p的下游靶基因。Western blot法检测SNAP23蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验分析miR-let-7a-5p和SNAP23的靶向关系。结果:在食管癌组织中,miR-let-7a-5p的表达水平较癌旁正常组织降低,其表达水平与患者总生存期呈正相关(HR=0.57,P<0.05)。与人永生化食管上皮细胞SHEE相比,ESCC细胞系中miR-let-7a-5p呈低表达(P<0.01)。与对照组相比,增强miR-let-7a-5p表达后,ESCC细胞系TE-13的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05或P<0.01)。在ESCC患者的外周血中,miR-let-7a-5p的表达水平较健康对照组增加(P<0.01)。分泌蛋白SNAP23被预测出是miR-let-7a-5p的下游靶基因。过表达miR-let-7a-5p后SNAP23的蛋白表达水平下降(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7a-5p可下调野生型-SNAP23的相对荧光素酶活性(P<0.01)。结论:miR-let-7a-5p通过靶向下调SNAP23的表达,抑制ESCC的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 miR-let-7a-5p 突触体相关蛋白23 侵袭转移 靶向治疗

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LncRNA MALAT1靶向miR-106a-5p/Smad7对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

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作者 白波 马佳良 +2 位作者 刘永权 张玉舰 陈国栋 《河北医学》 2025年第7期1102-1108,共7页

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子(MALAT1)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响,及其是否与微小RNA-106a-5p(miR-106a-5p)/母亲DPP同源物7(Smad7)有关。方法:以人软骨细胞系C20/A4作为研究对象,通过... 目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子(MALAT1)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响,及其是否与微小RNA-106a-5p(miR-106a-5p)/母亲DPP同源物7(Smad7)有关。方法:以人软骨细胞系C20/A4作为研究对象,通过IL-1β诱导软骨细胞损伤模型,并分为IL-1β组、IL-1β+sh-NC组、IL-1β+sh-MALAT1组、IL-1β+sh-MALAT1+inhibitor NC组、IL-1β+sh-MALAT1+miR-106a-5p inhibitor组,不进行IL-1β诱导的C20/A4为Control组。通过qRT-PCR对LncRNA MALAT1、miR-106a-5p和Smad7 mRNA表达进行检测;通过MTT和流式细胞术对细胞增殖及凋亡进行检测;通过ELISA对IL-6、IL-8、IL-10水平进行检测;通过双荧光素酶报告实验对miR-106a-5p与LncRNA MALAT1、Smad7靶向关系进行验证;通过Western blot对凋亡相关蛋白进行检测。结果:相较于Control组,IL-1β组LncRNA MALAT1、Smad7 mRNA表达、细胞增殖抑制率、凋亡率、IL-6、IL-8水平、Bax蛋白表达升高,miR-106a-5p表达、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);相较于IL-1β组和IL-1β+sh-NC组,IL-1β+sh-MALAT1组LncRNA MALAT1、Smad7 mRNA表达、细胞增殖抑制率、凋亡率、IL-6、IL-8水平、Bax蛋白表达降低,miR-106a-5p表达、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);相较于IL-1β+sh-MALAT1组和IL-1β+sh-MALAT1+inhibitor NC组,IL-1β+sh-MALAT1+miR-106a-5p inhibitor组LncRNA MALAT1无差异(P>0.05),miR-106a-5p表达、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达降低,Smad7 mRNA表达、细胞增殖抑制率、凋亡率、IL-6、IL-8水平、Bax蛋白表达升高(P<0.05);MALAT1靶向调控miR-106a-5p/Smad7轴。结论:沉默MALAT1,能够使miR-106a-5p表达上调,同时抑制Smad7表达,进而促进细胞增殖,抑制细胞凋亡及炎症反应,缓解IL-1β诱导的软骨细胞损伤。 展开更多

关键词 LncRNA MALAT1 miR-106a-5p/Smad7 IL-1Β 软骨细胞

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参附注射液调控microRNA-let-7e-5p的表达改善大鼠心肌肥大

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作者 毛竹君 熊耀康 +1 位作者 宋洁 袁文俊 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期4454-4457,共4页

目的:研究参附注射液对大鼠心肌肥大模型microRNA-let-7e-5p的调控机制。方法:取健康SD大鼠行腹主动脉缩窄手术建立心肌肥大模型,分成3组:参附注射液组(SFI,6.0m L·kg-1·d-1);模型组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-... 目的:研究参附注射液对大鼠心肌肥大模型microRNA-let-7e-5p的调控机制。方法:取健康SD大鼠行腹主动脉缩窄手术建立心肌肥大模型,分成3组:参附注射液组(SFI,6.0m L·kg-1·d-1);模型组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);假手术组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);腹腔注射相应药物,连续12周。采用茎环Realtime RT-PCR方法检测大鼠心肌microRNA-let-7e-5p的表达。利用生物信息学方法分析microRNA-let-7e-5p的候选靶基因,并用RT-PCR与Western Blot方法检测靶基因Caspase-3的m RNA与蛋白表达水平。结果:模型组大鼠心肌mi RNA-let-7e-5p下调,Caspase-3 m RNA及蛋白过表达;参附注射液组大鼠心肌microRNA-let-7e-5p表达量、Caspase-3 m RNA及蛋白表达水平与假手术组接近。结论:mi RNA-let-7e-5p在心肌肥大中可能发挥重要作用,参附注射液可能通过上调或维持mi RNA-let-7e-5p的表达,降低Caspase-3的水平,抑制腹主动脉缩窄大鼠心室重构,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大有明显的治疗作用。 展开更多

关键词 参附注射液 心肌肥大 microrna-let-7e-5p CASpASE-3

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基于miR-216a-5p/Smad7轴探讨lncRNA OIP5-AS1在慢性心力衰竭心肌纤维化中的影响

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作者 陶金松 张婷 +5 位作者 李伟章 陆翊超 Seidu A.Richard 顾剑 李健 韩进 《中国循证心血管医学杂志》 2025年第9期1085-1089,共5页

目的探讨lncRNA OIP5-AS1通过miR-216a-5p/Smad7轴在慢性心力衰竭心肌纤维化中的影响。方法利用主动脉弓缩窄法(TAC)构建慢性心力衰竭小鼠模型,研究lncRNA OIP5-AS1在体内心脏纤维化中的作用,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)用于激活心脏成纤维细胞... 目的探讨lncRNA OIP5-AS1通过miR-216a-5p/Smad7轴在慢性心力衰竭心肌纤维化中的影响。方法利用主动脉弓缩窄法(TAC)构建慢性心力衰竭小鼠模型,研究lncRNA OIP5-AS1在体内心脏纤维化中的作用,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)用于激活心脏成纤维细胞(CFs)模拟体外心肌纤维化。采用qRT-PCR和Western blot检测lncRNA OIP5-AS1在CFs中的表达,转染lncRNA OIP5-AS1过表达质粒,验证lncRNA OIP5-AS1过表达对体外心肌纤维化的影响。此外,使用生物信息学分析预测miR-216a-5p为lncRNA OIP5-AS1的下游靶点,Smad7为miR-216a-5p的下游靶点。qRT-PCR检测血清样本中lncRNA OIP5-AS1和miR-216a-5p的水平。结果LncRNA OIP5-AS1在心力衰竭小鼠心脏组织和AngⅡ处理的CFs中表达显著下调(P<0.001)。lncRNA OIP5-AS1表达上调显著抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化表型(P<0.001)。LncRNA OIP5-AS1在CFs中的过表达逆转了AngⅡ诱导的CFs增殖(P<0.01)。在CFs中,lncRNA OIP5-AS1过表达后,miR-216a-5p的表达水平显著下调(P<0.001)。此外,在转染miR-216a-5p模拟物的CFs中,Smad7的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.001)。结论LncRNA OIP5-AS1可能通过miR-216a-5p/Smad7轴抑制心脏纤维化,为慢性心力衰竭抗心脏纤维化治疗提供一个新的靶点。 展开更多

关键词 LncRNA OIp5-AS1 miR-216a-5p SMAD7 心肌纤维化 慢性心力衰竭 小鼠

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miR-130a-5p靶向PCGF1调节CXCL8/NF-κB/SLC7A11信号通路促进胶质瘤细胞铁死亡

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作者 黎成 陈波 肖庆保 《解剖科学进展》 2025年第4期453-457,共5页

目的探究miR-130a-5p靶向PCGF1对胶质瘤细胞铁死亡的影响及机制。方法将U87细胞分为mimics NC组、miR-130a-5p mimics组、miR-130a-5p mimics+Vector组和miR-130a-5p mimics+PCGF1组,并用Lipofectamine 3000转染试剂进行转染。RT-qPCR... 目的探究miR-130a-5p靶向PCGF1对胶质瘤细胞铁死亡的影响及机制。方法将U87细胞分为mimics NC组、miR-130a-5p mimics组、miR-130a-5p mimics+Vector组和miR-130a-5p mimics+PCGF1组,并用Lipofectamine 3000转染试剂进行转染。RT-qPCR方法检测各组细胞中miR-130a-5p以及PCGF1和CXCL8 mRNA表达;Western blot方法检测各组细胞中PCGF1、p-NF-κB p65和SLC7A11蛋白表达;CCK-8方法检测各组细胞的细胞活力;铁含量检测试剂盒检测各组细胞中铁含量;DHE探针检测各组细胞中ROS水平;ELISA方法检测各种细胞中MDA含量。生物信息学预测miR-130a-5p与PCGF1 mRNA的潜在结合位点并采用双荧光素酶报告基因实验验证二者结合。结果过表达miR-130a-5p降低胶质瘤细胞的细胞活力,增加细胞中铁沉积、ROS水平和MDA含量。PCGF1结合miR-130a-5p,过表达miR-130a-5p降低胶质瘤细胞中PCGF1 mRNA和蛋白表达。过表达PCGF1部分逆转过表达miR-130a-5p对胶质瘤细胞的细胞活力的下调作用以及细胞中铁沉积、ROS水平和MDA含量的上调作用。过表达miR-130a-5p降低胶质瘤细胞中CXCL8 mRNA以及p-NF-κB p65和SLC7A11蛋白表达,过表达PCGF1部分逆转过表达miR-130a-5p对胶质瘤细胞中CXCL8 mRNA以及p-NF-κB p65和SLC7A11蛋白表达的下调作用。结论miR-130a-5p通过靶向抑制PCGF1表达诱导胶质瘤细胞铁死亡,其机制可能与抑制CXCL8/NF-κB/SLC7A11信号通路激活有关。 展开更多

关键词 胶质瘤 铁死亡 miR-130a-5p pCGF1 CXCL8/NF-κB/SLC7A11信号通路

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LncRNA SNHG7调控miR-10a-5p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤 被引量：6

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作者 宋丹 杜少斐 +1 位作者 彭佳欣 李继业 《中国中西医结合肾病杂志》 2020年第11期978-982,共5页

目的:探讨长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)是否通过调控微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)的表达而参与高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的过程。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为8组:对照组、高糖组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-SN... 目的:探讨长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)是否通过调控微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)的表达而参与高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的过程。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为8组:对照组、高糖组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-SNHG7组、高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-10a-5p组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-10a-5p的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证SNHG7与miR-10a-5p的靶向结合关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组比较,高糖组SNHG7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-10a-5p的表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,高糖组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与高糖+pcDNA组比较,高糖+pcDNA-SNHG7组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向调控miR-10a-5p的表达及活性;与高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组比较,高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:SNHG7过表达可能通过靶向调控miR-10a-5p的表达从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。 展开更多

关键词 LncRNA SNHG7 miR-10a-5p 肾小管上皮细胞 炎症 凋亡

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miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响 被引量：1

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作者 朱彦彬 李立 +2 位作者 王贤芝 仲伟 张富钊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第13期1563-1568,共6页

目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划... 目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:PDGF-bb处理能够增强血管平滑肌细胞增殖,抑制miR-33的表达;miR-33a-5p与SMAD7在3′UTR区存在结合位点,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p过表达抑制SMAD7的表达;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、下调增殖标记蛋白PCNA和Ki67表达,促进细胞凋亡、上调凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,降低伤口愈合率、抑制细胞迁移,下调MMP-2和MMP-9的表达(P<0.01)。结论:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的降解,并促进凋亡。 展开更多

关键词 血管平滑肌细胞 miR-33a-5p SMAD7 增殖 凋亡 迁移

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胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达及其临床意义 被引量：3

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作者 马悦 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2022年第8期902-907,共6页

目的 检测胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达,并探讨其临床意义。方法 选取180例初诊胃癌患者(癌症组)和153名健康志愿者对照组。取外周血检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR... 目的 检测胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达,并探讨其临床意义。方法 选取180例初诊胃癌患者(癌症组)和153名健康志愿者对照组。取外周血检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;癌症组随访1年,分析死亡的影响因素,评估血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对癌症组1年内死亡的预测价值。结果 癌症组血清miR-20a-5p表达高于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组血清miR let-7a表达低于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组1年内死亡率为17.78%,Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、血清miR-20a-5p表达、未遵医嘱治疗均是影响癌症组1年内死亡的危险因素(RR=4.076,4.100,4.845,4.968,5.924,4.768,P<0.05),血清miR let-7a表达是其保护因素(RR=0.587,P<0.05);血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度、AUC均高于单独预测(P<0.01)。结论 胃癌患者血清miR-20a-5p表达高,miR let-7a表达低,与临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移均有关,上述因素均可影响患者的生存率,且血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合可预测胃癌1年内死亡风险。 展开更多

关键词 胃癌 miR-20a-5p miR let-7a 生存分析

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circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移 被引量：2

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作者 莫勇真 王裕民 +4 位作者 范春梅 晏其佳 曾朝阳 蒋卫红 熊芳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1946-1958,共13页

目的鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA(circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽... 目的鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA(circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实circPVT1是鼻咽癌发生发展过程中一个重要驱动因子。 展开更多

关键词 鼻咽癌 circpVT1 侵袭迁移 miR-24-3p let-7a-5p FSCN1

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环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫体外增殖的机制 被引量：2

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作者 尹艳玲 黄爽 +5 位作者 姚倩 吴江平 郭浩晨 杨新 宋军科 赵光辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3989-3999,共11页

旨在探究环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)在HCT-8细胞中增殖的作用机制。以C.parvum感染HCT-8细胞为研究模型,利用Western blot检测HCT-8细胞中的自噬蛋白LC3B-II和p62的表达情况;利用qRT-PCR... 旨在探究环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)在HCT-8细胞中增殖的作用机制。以C.parvum感染HCT-8细胞为研究模型,利用Western blot检测HCT-8细胞中的自噬蛋白LC3B-II和p62的表达情况;利用qRT-PCR和双荧光素酶报告基因试验检测和验证ciRS-7与miR-219a-5p的靶向关系,利用qRT-PCR检测HCT-8细胞中C.parvum的荷虫量(C.parvum hsp70基因的mRNA水平)。结果显示:C.parvum感染诱导HCT-8细胞中LC3B-II和p62的蛋白质表达水平在感染后8、12、24、36和48 h显著上调;过表达ciRS-7显著抑制了C.parvum感染细胞中LC3B-II的蛋白质表达水平,但升高了p62的蛋白质表达水平,而干扰ciRS-7表达的作用相反;C.parvum感染诱导HCT-8细胞中miR-219a-5p的显著下调表达,且ciRS-7可靶向调节miR-219a-5p的表达;miR-219a-5p mimics显著增加了C.parvum感染细胞中LC3B-II的蛋白质表达水平,但降低了p62的蛋白质表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics可逆转过表达ciRS-7对C.parvum感染细胞中LC3B-II蛋白质表达的抑制和p62蛋白质表达的促进作用;miR-219a-5p mimics显著抑制了感染细胞中C.parvum hsp70基因的mRNA表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics逆转了过表达ciRS-7对感染细胞中C.parvum hsp70基因的mRNA表达水平的上调作用。ciRS-7通过靶向miR-219a-5p抑制C.parvum感染诱发的HCT-8细胞自噬,进而促进C.parvum在HCT-8细胞中的增殖。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 circRNA ciRS-7/miR-219a-5p轴 自噬 增殖

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hsa-let-7a-5p调控牙周膜干细胞增殖及凋亡 被引量：1

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作者 张晔琳 马丽娅 +2 位作者 彭旭晖 杨禾丰 佘睿 《昆明医科大学学报》 CAS 2023年第10期47-54,共8页

目的探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及凋亡的影响。方法将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs,通过RT-qPCR测定转染效率,通过CCK-8、细胞... 目的探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及凋亡的影响。方法将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs,通过RT-qPCR测定转染效率,通过CCK-8、细胞周期、EdU实验检测let-7a-5p对PDLSCs增殖的影响,通过细胞凋亡实验检测PDLSCs的凋亡率。结果let-7a-5p成功转染进入PDLSCs。let-7a-5p mimics可抑制PDLSCs增殖能力(P<0.05),促进PDLSCs凋亡(P<0.01)。let-7a-5p inhibitor可促进PDLSCs增殖能力(P<0.05),抑制PDLSCs凋亡(P<0.01)。结论hsa-let-7a-5p可抑制PDLSCs增殖,促进PDLSCs凋亡。 展开更多

关键词 hsa-let-7a-5p MICRORNA 牙周膜干细胞 增殖 凋亡

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miR-193a-5p/HOXA7轴对急性髓细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

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作者 何迪 李斌 +1 位作者 喻镁佳 陈琪 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第3期374-379,共6页

目的探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用。方法收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用。体外培养AML细胞... 目的探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用。方法收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用。体外培养AML细胞系THP-1,分别给予转染空载体、miR-193a-5p过表达慢病毒载体、HOXA7 shRNA慢病毒载体及同时转染miR-193a-5p和HOXA7过表达慢病毒表达载体,检测不同干预方式下THP-1细胞的增殖与凋亡情况、细胞内miR-193a-5p、HOXA7的表达变化。结果AML患者骨髓细胞中miR-193a-5p表达低于健康志愿者,而HOXA7表达高于健康志愿者(P<0.01)。荧光素酶活性分析显示miR-193a-5p具有负调控HOXA7的作用。转染miR-193a-5p过表达慢病毒载体的THP-1细胞内的HOXA7表达低于空载体细胞(P<0.01)。与转染空载体细胞比较,转染miR-193a-5p过表达慢病毒载体或转染HOXA7 shRNA慢病毒载体抑制了THP-1细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。同时转染miR-193a-5p和HOXA7过表达慢病毒表达载体的THP-1细胞增殖强于空载体细胞(P<0.05)。结论miR-193a-5p在AML患者骨髓细胞中表达量显著降低,其可通过抑制HOXA7表达及THP-1细胞增殖来促进THP-1细胞凋亡。 展开更多

关键词 miR-193a-5p HOXA7 急性髓细胞白血病 增殖 凋亡

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hsa-Let-7a-5p靶向结合TGF-βR1抑制局限性硬皮病成纤维细胞纤维化 被引量：1

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作者 王立铨 黄久佐 +3 位作者 俞楠泽 马旭达 李天浩 龙笑 《基础医学与临床》 2022年第12期1841-1849,共9页

目的探讨hsa-Let-7a-5p对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子-β受体(TGF-βR)和TGF-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-Let-7a-5p和shTGF-βR1的慢病毒载体及空白慢病毒载体感染LSFs。CCK-8法和划痕... 目的探讨hsa-Let-7a-5p对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子-β受体(TGF-βR)和TGF-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-Let-7a-5p和shTGF-βR1的慢病毒载体及空白慢病毒载体感染LSFs。CCK-8法和划痕实验检测各组LSFs的增殖和迁移情况。RT-qPCR、免疫荧光和Western blot检测转染的效率以及各组LSFs的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-βR1、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染LSFs后,shTGF-βR1组的TGF-βR1表达量明显低于对照组(P<0.05);shTGF-βR1组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;shTGF-βR1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。生物信息学分析表明hsa-Let-7a-5p可以与TGF-βR13′-UTR的靶区位置配对,hsa-Let-7a-5p慢病毒转染组的hsa-Let-7a-5p表达量明显高于对照组(P<0.05),TGF-βR1表达量明显降低(P<0.05)。hsa-Let-7a-5p组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;hsa-Let-7a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论hsa-Let-7a-5p在体外通过靶向结合TGF-βR1调控TGF-β/Smad通路,抑制LSFs增殖与迁移,降低LSFs的纤维化标志物,从而抑制局限性硬皮病的纤维化。 展开更多

关键词 hsa-Let-7a-5p 局限性硬皮病 纤维化

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室旁核微小RNA 7a-5p在自发性高血压大鼠交感神经兴奋亢进中的作用及机制 被引量：1

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作者 安美玲 徐佳琪 +6 位作者 郝翊帆 袁月 王秀文 张敏 未晓巍 李华 王仁俊 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1201-1214,共14页

目的探讨下丘脑室旁核内微小RNA 7a-5p(miR-7a-5p)在自发性高血压大鼠(SHR)交感神经兴奋亢进中的作用及机制。方法取12周龄正常血压大鼠(WKY)和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射miR-7a-5p-空载病毒(Null)组、过表达miR-7a... 目的探讨下丘脑室旁核内微小RNA 7a-5p(miR-7a-5p)在自发性高血压大鼠(SHR)交感神经兴奋亢进中的作用及机制。方法取12周龄正常血压大鼠(WKY)和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射miR-7a-5p-空载病毒(Null)组、过表达miR-7a-5p基因重组腺相关病毒(rAAV)+敲减miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(miR-7a-5p+NC antimiR-7a-5p)组、过表达miR-7a-5p基因rAAV+敲减miR-7a-5p基因rAAV(miR-7a-5p+antimiR-7a-5p)组、敲减miR-7a-5p基因rAAV+过表达miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(antimiR-7a-5p+NC miR-7a-5p)组;另取12周龄WKY大鼠和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射γ-氨基丁酸A型受体功能性α_(1)亚基(GABRA1)-Null组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV阴性对照(GABRA1+NC siGABRA1)组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV(GABRA1+siGABRA1)组和敲减GABRA1基因rAAV+过表达GABRA1基因rAAV阴性对照(siGABRA1+NC GABRA1)组,4周后观察血流动力学指标、肾交感神经活动(RSNA)和血浆去甲肾上腺素(NE)水平变化;采用免疫荧光检测室旁核内原癌基因AP-1转录因子亚基FosB(FosB)及GABRA1阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测室旁核内miR-7a-5p和GABRA1mRNA表达水平;免疫印迹法检测室旁核内GABRA1蛋白表达量;分离培养新生Wistar大鼠原代下丘脑神经细胞和传代培养NG108神经细胞系,并转染miR-7a-5p激动剂(agomiR-7a-5p)、抑制剂(antagomiR-7a-5p)或miR-7a-5p激动剂阴性对照(NC agomiR-7a-5p),48h后检测miR-7a-5p基因表达水平和GABRA1蛋白表达量,TargetScan软件预测和双荧光素酶报告系统检测miR-7a-5p和GABRA1的靶向关系。结果室旁核注射rAAV 4周后,过表达miR-7a-5p导致WKY和SHR的RSNA增强(均P<0.05),FosB阳性神经元数量上调,GABRA1阳性神经元数量下调(均P<0.01)。室旁核过表达GABRA1导致WKY和SHR的RSNA减弱(均P<0.05)。与WKY大鼠相比,过表达或敲减miR-7a-5p/GABRA1基因对SHR的RSNA的影响更显著(均P<0.05)。与WKY大鼠相比,SHR室旁核内miR-7a-5p表达上调(2.50±0.20比1.01±0.06,t=7.11,P<0.01),GABRA1蛋白表达水平下调(0.60±0.06比1.00±0.04,t=5.31,P<0.01)。在原代下丘脑神经细胞或NG108细胞内转染agomiR-7a-5p可导致GABRA1蛋白表达下调。TargetScan预测发现,miR-7a-5p和GABRA1mRNA的3’非翻译区(3’UTR)存在序列结合,双荧光素酶报告基因证实miR-7a-5p靶向调控GABRA1基因。结论SHR室旁核内上调的miR-7a-5p可通过靶向抑制GABRA1蛋白表达引起交感神经过度兴奋,从而影响高血压的发生发展。 展开更多

关键词 自发性高血压大鼠 交感神经兴奋 室旁核 微小RNA 7a-5p γ-氨基丁酸A型受体α_(1)亚基

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