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胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达及临床意义 被引量:3
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作者 张波 徐皓 池堂春 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期86-89,93,共5页
目的探究胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达水平及其临床意义。方法随机选取行手术治疗的胃癌患者60例,采用qRT-PCR检测胃癌与癌旁组织中miR-148a-3p的表达水平,采用免疫组化检测胃癌组织中LC3与Beclin 1的表达,统计分析胃癌组织中miR-1... 目的探究胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达水平及其临床意义。方法随机选取行手术治疗的胃癌患者60例,采用qRT-PCR检测胃癌与癌旁组织中miR-148a-3p的表达水平,采用免疫组化检测胃癌组织中LC3与Beclin 1的表达,统计分析胃癌组织中miR-148a-3p表达水平与临床病理特征及LC3、Beclin 1表达的相关性。采用脂质体法在SGC-7901细胞中转染miR-148a-3p并使用免疫荧光实验检测LC3的定位,Western blot检测LC3及Beclin1的表达量。结果胃癌组织中miR-148a-3p表达水平显著低于癌旁组织,并且与胃癌肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移情况、临床分期具有相关性,且与LC3及Beclin 1的表达呈负相关。过表达miR-148a-3p后SGC-7901细胞中LC3荧光斑点的数量显著减少,并且LC3Ⅱ与LC3Ⅰ表达量的比值及Beclin1表达量均显著降低。结论 miR-148a-3p的低表达可能参与了胃癌的恶性演进,并且miR-148a-3p可能通过抑制细胞自噬发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 胃细胞癌 microrna-148a-3p 自噬 BECLIN1
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LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-148a-3p对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、侵袭、多柔比星耐药的影响
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作者 顾喆赟 陶健 王铃 《中国细胞生物学学报》 2025年第7期1553-1561,共9页
该文旨在探讨长链非编码RNA KCNQ1OT1调节微小RNA(miR)-148a-3p对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、侵袭、多柔比星(DOX)耐药的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DLBCL组织及细胞(OCI-LY1)中LncRNA KCNQ1OT1和miR-148a-3p... 该文旨在探讨长链非编码RNA KCNQ1OT1调节微小RNA(miR)-148a-3p对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、侵袭、多柔比星(DOX)耐药的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DLBCL组织及细胞(OCI-LY1)中LncRNA KCNQ1OT1和miR-148a-3p水平;将OCILy1细胞分为对照组(Ctrl)、sh-NC组、sh-K1组、sh-K1+miR-In-NC组、sh-K1+miR-148a-3p-In组;EdU法和细胞克隆形成实验检测各组OCI-Ly1细胞增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;Western blot检测OCI-Ly1细胞中MMP-2、MMP-9和Ki67蛋白表达水平;筛选DOX耐药细胞OCILy1/DOX20,并采用CCK-8法测定各组细胞存活率;双荧光素酶实验测定miR-148a-3p与LncRNA KCNQ1OT1的靶向关系。DLBCL组织或OCI-LY1细胞中LncRNA KCNQ1OT1水平较高,miR-148a-3p水平较低(P<0.05);LncRNA KCNQ1OT1沉默后OCI-LY1细胞EdU阳性率、集落形成数、细胞侵袭数、LncRNA KCNQ1OT1水平以及MMP-2、MMP-9和Ki67蛋白表达水平降低,miR-148a-3p水平升高(P<0.05);进一步抑制miR-148a-3p表达后细胞EdU阳性率、集落形成数、细胞侵袭数、LncRNA KCNQ1OT1水平以及MMP-2、MMP-9和Ki67蛋白表达水平升高,miR-148a-3p水平降低(P<0.05)。在DOX浓度为10~80 nmol/L时,KCNQ1OT1沉默后OCI-Ly1/DOX20细胞存活率降低(P<0.05),进一步抑制miR-148a-3p表达后细胞存活率升高(P<0.05)。KCNQ1OT1与miR-148a-3p间存在靶向关系(P<0.05)。LncRNA KCNQ1OT1下调可能通过调控miR-148a-3p,抑制人DLBCL细胞增殖和侵袭,减弱细胞DOX耐药性。 展开更多
关键词 长链非编码RNA KCNQ1OT1 微小RNa-148a-3p 弥漫大B细胞淋巴瘤 多柔比星 耐药
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猪miR-148a-3p的生物信息学分析与靶基因验证
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作者 齐婧 谭娅 +7 位作者 裴国海 张静 龙建华 赵春萍 杜春林 王婧 田景红 史开志 《中国畜牧杂志》 北大核心 2025年第9期191-201,共11页
miR-148a-3p是前期课题组通过转录组测序发现的在猪卵巢组织中高表达的小RNA(microRNAs,miRNAs)之一,为探究miR-148a-3p对猪繁殖性状的调控作用,本研究围绕miR-148a-3p序列开展进化分析、靶基因预测及功能富集分析、组织表达分析,并通... miR-148a-3p是前期课题组通过转录组测序发现的在猪卵巢组织中高表达的小RNA(microRNAs,miRNAs)之一,为探究miR-148a-3p对猪繁殖性状的调控作用,本研究围绕miR-148a-3p序列开展进化分析、靶基因预测及功能富集分析、组织表达分析,并通过双荧光素酶报告系统验证靶标关系。结果表明,各物种miR-148a-3p的第2~8位碱基完全一致,猪miR-148a-3p与人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)和猕猴(Macaca mulatta)亲缘关系较近;对miR-148a-3p靶基因进行GO和KEGG功能富集分析发现,miR-148a-3p的靶基因可富集到子宫内胚胎发育、正向调控转移酶活性、酶联受体蛋白信号通路、PI3K-Akt、TGF-β和MAPK信号通路等与动物繁殖相关的信号通路中。miR-148a-3p可与PRLR基因的CDS区域结合。RT-qPCR结果显示,miR-148a-3p在保育猪卵巢组织中的表达量最高且极显著高于其他组织,且在黄体期的卵巢组织中,miR-148a-3p和PRLR的表达量呈负相关趋势。双荧光素酶报告系统结果显示,超表达miR-148a-3p能显著抑制PRLR野生型载体的荧光活性。综上,miR-148a-3p与PRLR存在靶向关系,且可靶向PRLR-CDS区域,为进一步探究miR-148a-3p调控繁殖性状的分子机制提供了依据。 展开更多
关键词 柯乐猪 miR-148a-3p pRLR 卵巢 繁殖性状
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缺氧诱导的外泌体miR-148a-3p对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制
4
作者 黄玉荣 王迪迪 +5 位作者 陈冬梅 彭湃澜 何磊 杨旺柳 娄伦生 杨杰 《贵州医科大学学报》 2025年第12期1717-1725,1739,共10页
目的探讨缺氧条件下外泌体微小RNA-148-3p(microRNA-148-3p,miR-148-3p)对SW480细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响及其对DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)与细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling ... 目的探讨缺氧条件下外泌体微小RNA-148-3p(microRNA-148-3p,miR-148-3p)对SW480细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响及其对DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)与细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表达的调控作用机制。方法CoCl2处理SW480细胞构建缺氧模型,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力;采用差异超速离心法提取细胞外泌体,通过透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)与纳米流式分析其形态、粒径、浓度及标志蛋白CD9(cluster of differentiation 9)、CD63的表达;收集常氧与缺氧SW480细胞的外泌体,分别与常氧SW480细胞共培养24 h;采用Transwell和划痕实验评估细胞侵袭与迁移,流式细胞术检测细胞周期与凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测miR-148-3p、DNMT1及SOCS3信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达,蛋白质印迹法检测DNMT1和SOCS3蛋白表达。结果与对照组相比,缺氧来源外泌体促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),下调miR-148-3p与SOCS3 mRNA表达(P<0.05),同时降低DNMT1和SOCS3蛋白水平(P<0.05)。结论缺氧状态下SW480细胞外泌体促进SW480细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,可能与抑制miR-148-3p表达来调控DNMT1/SOCS3通路有关。 展开更多
关键词 缺氧 外泌体 SW480细胞 微小RNa-148a-3p DNMT1/SOCS3通路
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miR-148a-3p在儿童癫痫疾病中的功能研究
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作者 徐健 岳保珠 +3 位作者 李锦亮 岳娜 计岳龙 丁砚生 《分子诊断与治疗杂志》 2025年第7期1201-1203,1207,共4页
目的探讨miR-148a-3p在儿童癫痫疾病中的作用,为癫痫的临床诊断和治疗开辟一条新途径。方法分析2022年1月至2023年6月在潍坊市妇幼保健院就诊癫痫患儿19例设为实验组,另选15名同期体检健康儿童为对照组。通过荧光定量PCR法检测miR-148a... 目的探讨miR-148a-3p在儿童癫痫疾病中的作用,为癫痫的临床诊断和治疗开辟一条新途径。方法分析2022年1月至2023年6月在潍坊市妇幼保健院就诊癫痫患儿19例设为实验组,另选15名同期体检健康儿童为对照组。通过荧光定量PCR法检测miR-148a-3p的表达。应用TargetScan及miRNADB数据库预测miR-148a-3p靶基因并分别进行GO功能和KEGG通路分析。流式细胞术检测miR-148a-3p及其靶基因与细胞凋亡之间的关系。结果实验组患者血浆中miR-148a-3p表达水平显著高于对照组,差异有统计学(P<0.05)。TargetScan和miRNADB数据库预测503个交集靶基因。miR-148a-3p的503个交集靶基因,通过PPI网络分析,显示出10个MCODE结构模块。显著富集的GO包括神经元识别、突触泡循环等。显著富集Pathway主要包括癌症相关、FoxO信号通路、PI3K/Akt信号通路、TGF-beta信号通路等。细胞凋亡实验发现抑制miR-148a-3p可降低KA诱导的神经元细胞凋亡。SYNJ1被鉴定为miR-148-3p的靶基因。结论miR-148a-3p可能通过激活SYNJ1信号通路作为凋亡促进剂,促进癫痫的发生,是一个颇有研究价值的生物学靶标。 展开更多
关键词 癫痫 miR-148a-3p 靶基因 神经元凋亡
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miR-148a-3p、NF-κB与冠心病患者冠脉病变程度和预后的关系
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作者 刘亚聪 赵晨晖 +1 位作者 刘宁 唐苏姣 《中国处方药》 2025年第2期94-97,共4页
目的探讨微小RNA(miR)-148a-3p、核因子(NF)-κB与冠心病患者冠脉病变程度和预后的关系。方法选取扬州大学附属苏北人民医院心内科2022年5月~2024年4月收治的冠心病患者85例为病例组,另选取同时期收治的冠脉造影正常无冠心病患者36例为... 目的探讨微小RNA(miR)-148a-3p、核因子(NF)-κB与冠心病患者冠脉病变程度和预后的关系。方法选取扬州大学附属苏北人民医院心内科2022年5月~2024年4月收治的冠心病患者85例为病例组,另选取同时期收治的冠脉造影正常无冠心病患者36例为对照组。收集所有患者的临床资料[年龄、性别、病程、糖尿病、高血压、冠状动脉(简称“冠脉”)Gensini评分等]和实验室资料(miR-148a-3p、NF-κB水平),以Gensini评分评估冠心病患者冠脉病变程度。比较两组的miR-148a-3p、NF-κB水平和Gensini评分,并采用Pearson相关性分析miR-148a-3p、NF-κB水平与Gensini评分的关系。随访6个月,根据心血管不良事件的发生情况,将病例组分为预后良好组(n=54)和预后不良组(n=31)。采用单因素和多因素Logistic回归分析冠心病患者预后的影响因素,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-148a-3p、NF-κB单一或联合检测对冠心病患者预后的预测价值。结果病例组的NF-κB水平、Gensini评分高于对照组,miR-148a-3p水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Gensini评分与NF-κB呈正相关,与miR-148a-3p呈负相关(P<0.05)。单因素分析结果显示,合并高血压、糖尿病,Gensini评分及miR-148a-3p、NF-κB水平为冠心病不良预后的影响因素(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示伴有糖尿病和高血压、低miR-148a-3p水平、高NF-κB水平和高Gensini评分为影响冠心病患者预后的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-148a-3p、NF-κB单一及联合检测冠心病患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.846、0.826和0.909(P<0.05)。结论miR-148a-3p、NF-κB水平与冠心病患者冠脉病变程度有关,且对冠心病患者预后不良均具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 微小RNa-148a-3p 核因子-ΚB 冠心病 冠脉病变程度 预后
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非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg的表达及其对预后的评估价值
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作者 郭华 赵静 李丹丹 《实用癌症杂志》 2025年第3期366-368,372,共4页
目的 分析非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、表皮生长因子受体(EGRF)及鳞状细胞癌抗原(SCCAg)表达情况及对预后的评估价值。方法 选择97例化疗治疗的非小细胞肺癌患者,检测肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达情况。随访1年,根据患... 目的 分析非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、表皮生长因子受体(EGRF)及鳞状细胞癌抗原(SCCAg)表达情况及对预后的评估价值。方法 选择97例化疗治疗的非小细胞肺癌患者,检测肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达情况。随访1年,根据患者是否发生淋巴转移分为预后不良组(淋巴转移)、预后良好组(无淋巴转移),比较2组肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达情况,分析非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达对预后的评估价值。结果 随访1年,97例非小细胞肺癌患者中,26例发生淋巴转移,预后不良发生率为26.80%(26/97)。预后不良组肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达高于预后良好组(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达与预后有关(P<0.05)。绘制ROC曲线发现,非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达对预后评估的AUC分别为0.876、0.721、0.719,均有一定诊断价值。结论 非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p、EGFR及SCCAg表达情况与预后有关,对预后具有一定的评估价值。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 鳞状细胞癌抗原 miR-148a-3p 预后
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MicroRNA-122-5p、microRNA-33a-3p在胃癌患者中的表达及与临床病理特征和预后的关系 被引量:5
8
作者 张伟 蔡振花 +5 位作者 周瑞轻 刘小慧 江麒麟 刘红波 董永杰 冯运章 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第13期17-22,共6页
目的探究胃癌患者血清microRNA-122-5p(miR-122-5p)、microRNA-133a-3p(miR-133a-3p)mRNA相对表达量与临床病理特征及预后的关系。方法采集胃癌患者血清标本94例,以相同例数的健康体检者的血清样本作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反... 目的探究胃癌患者血清microRNA-122-5p(miR-122-5p)、microRNA-133a-3p(miR-133a-3p)mRNA相对表达量与临床病理特征及预后的关系。方法采集胃癌患者血清标本94例,以相同例数的健康体检者的血清样本作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-qPCR)技术检测血清miR-122-5p、miR-133a-3p mRNA相对表达量,同时分析两者与胃癌患者临床病理特征的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析miR-122-5p、miR-133a-3p的表达与胃癌患者预后的关系。结果胃癌患者血清miR-122-5p、miR-133a-3p mRNA相对表达量低于健康体检者(P<0.05);有淋巴结转移、分化程度低、浸润至浆膜层的患者血清miR-122-5p mRNA相对表达量低于无淋巴结转移,中、高分化程度、浸润至黏膜下各层的患者(P<0.05);有淋巴结转移、低分化程度、浸润至浆膜层、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的患者血清miR-133a-3p mRNA相对表达量低于无淋巴结转移,中、高分化程度,浸润至黏膜下各层,TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期的患者(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线结果显示,miR-122-5p低表达胃癌患者5年生存率低于miR-122-5p高表达胃癌患者(P<0.05);miR-133a-3p低表达胃癌患者的5年生存率低于miR-133a-3p高表达胃癌患者(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-122-5p、miR-133a-3p mRNA相对表达量呈低表达,并且两者与胃癌的恶性程度和患者不良预后密切相关,血清miR-122-5p、miR-133a-3p可能成为胃癌患者预后预测的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 胃肿瘤 microrna-122-5p microrna-133a-3p 临床病理特征 预后
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SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能 被引量:4
9
作者 向威 吕磊 +2 位作者 郑福鑫 章传华 袁敬东 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期161-167,共7页
目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9... 目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 SLC9A3-AS1 miR-148a-3p ROCK1
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热性惊厥患儿血清miR-148a-3p HMGB125(OH)D水平与癫痫发作的相关性 被引量:9
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作者 张义堂 秦小菀 +7 位作者 石岩 侯海燕 殷雪 李哲 徐会民 刘麦叶 李万桢 宋春雨 《中国实用神经疾病杂志》 2023年第5期599-604,共6页
目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局... 目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局是否发生癫痫,分为热性惊厥癫痫组36例和热性惊厥非癫痫组86例,同期选择55例未发生惊厥的呼吸道感染仅发热的患儿为对照组,比较3组患儿的血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平。收集3组患儿临床资料进行多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线分析miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D对热性惊厥患儿癫痫发作的预测价值。结果热性惊厥癫痫组的血清miR-148a-3p表达量、HMGB1水平高于热性惊厥非癫痫组、对照组[(2.26±0.57)vs(1.71±0.43)vs(1.50±0.38);(7.45±1.87)μg/L vs(6.70±1.58)μg/L vs(5.33±1.29)μg/L;均P<0.05],血清25(OH)D水平低于热性惊厥非癫痫组、对照组[(26.83±6.79)μg/L vs(34.24±8.56)μg/L vs(42.16±4.15)μg/L;P<0.05]。惊厥类型、惊厥持续时间、退热后脑电图结果、miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D与癫痫发作存在相关关系(P<0.05)。miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D预测热性惊厥患儿癫痫发作的灵敏度为83.33%、77.78%、72.22%,特异度为74.42%、68.60%、63.95%。结论血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平与热性惊厥患儿癫痫发作有一定相关性,可作为临床辅助诊断标志物。 展开更多
关键词 热性惊厥 癫痫 miR-148a-3p 高迁移率族蛋白B1 25-羟维生素D
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MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响 被引量:3
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作者 朱楠 张积森 +2 位作者 荆珏华 钱军 仇汪宝 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期159-163,共5页
目的:探讨microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照。转染后应用实时定量逆... 目的:探讨microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照。转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析。结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤 凋亡 microrna-199a-3p 转染
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血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系 被引量:5
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作者 张丽 凌晨 沈轶骊 《中国现代医学杂志》 CAS 2024年第5期1-6,共6页
目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访1... 目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。 展开更多
关键词 结直肠癌 手术 预后 microrna-21 microrna-193a-3p
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miR-148a-3p通过抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路抑制Th1细胞极化 被引量:4
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作者 张晗 李雪 +10 位作者 刘元林 刘伟江 王洋 白海涛 张金霞 苏菲娅 袁福临 李露 孟广雨 郑荣秀 张毅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期816-823,共8页
目的探讨miR-148a-3p调控1型辅助性T(Th1)细胞极化调控的分子机制。方法分离6周龄小鼠的脾单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获得初始CD4+(naïveCD4+)Th细胞,用流式细胞术测定naïve CD4+Th细胞CD62L表达水平。用小鼠白细胞介素12... 目的探讨miR-148a-3p调控1型辅助性T(Th1)细胞极化调控的分子机制。方法分离6周龄小鼠的脾单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获得初始CD4+(naïveCD4+)Th细胞,用流式细胞术测定naïve CD4+Th细胞CD62L表达水平。用小鼠白细胞介素12(IL-12)和IL-2及抗小鼠IL-4,CD28和CD3ε单克隆抗体的混合因子体外诱导naïveCD4+Th细胞向Th1细胞极化,同时在诱导体系中加入miR-148a-3p模拟物,诱导72 h。流式细胞术检测干扰素γ(IFN-γ)和CD4双阳性(IFN-γ+CD4+)细胞百分比,实时荧光定量PCR检测Th1细胞极化相关基因IFN-γ、信号转导与转录激活因子1(STAT1)、IL-12受体β_(1)(IL-12Rβ_(1))、IL-12Rβ_(2)、STAT4和T细胞介导的转录调节因子21(Tbx21)mRNA表达水平;Western印迹法检测Th1细胞极化关键转录因子STAT4和磷酸化STAT4(p⁃STAT4)蛋白表达水平。经生物信息学分析预测miR-148a-3p对IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路分子IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的调控靶标序列,用双荧光素酶载体psiCHECK2分别构建IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的3′UTR序列(psi-wt)及靶标点突变(psi-mutant)序列的克隆载体。将psi-wt和psi-mutant载体分别与miR-148a-3p模拟物共转染至人宫颈癌HeLa细胞,转染36 h后裂解细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果经免疫磁珠分选获得的naïveCD4+Th细胞高表达CD62L,表明naïveCD4+Th细胞分离成功;诱导后Th1细胞极化百分比为(71±5)%,miR-148a-3p模拟物转染后Th1细胞极化百分比下降至(61±3)%(P<0.05)。miR-148a-3p模拟物转染可下调Th1极化关键转录因子STAT1(P<0.01),Tbx21(P<0.01)和STAT4(P<0.01)mRNA表达水平,同时IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的关键受体IL-12Rβ_(1)(P<0.05)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)及调控Th1极化关键细胞因子IFN-γ(P<0.01)mRNA表达水平亦显著下调。miR-148a-3p模拟物转染可显著下调Th1极化过程所必需的STAT4和p-STAT4蛋白表达水平。生物信息学预测miR-148a-3p靶标并用双荧光素酶报告载体构建含其psi-wt和psi-mutant序列的克隆载体;经双荧光素酶报告系统检测证实,miR-148a-3p可靶向下调IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的多个关键分子STAT4(P<0.01),Tbx21(P<0.01),IL-12Rβ_(1)(P<0.01)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)表达。结论miR-148a-3p通过靶向抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路中STAT4,Tbx21,IL-12Rβ_(1)和IL-12Rβ_(2)蛋白表达抑制Th1细胞极化。 展开更多
关键词 miR-148a-3p 1型辅助性T细胞 细胞极化 干扰素Γ
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基于miR-148a-3p/SMAD2轴探讨当归多糖对高糖诱导RGC凋亡的影响 被引量:4
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作者 王江涛 王艳新 +1 位作者 贾冠美 曹朗 《中国中医眼科杂志》 2024年第7期601-609,共9页
目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimic... 目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimics-NC、miR-NC的RGC,分为对照组(CG)、模型组(MG)、APS低剂量(APS-L)组、APS高剂量(APS-H)组、APS-H+miR-148a-3p对照品组(APS+miR-NC)、APS-H+miR-148a-3p抑制剂组(miR-148a-3p inhibitor),分别以相应的高糖和APS处理,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-148a-3p和SMAD2 mRNA表达水平,检测细胞活力、凋亡情况和氧化应激指标水平,Western Blot法检测SMAD2蛋白表达水平,双荧光素酶实验检测miR-148a-3p和SMAD2的靶向关系。结果(1)miR-148a-3p/SMAD2表达:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组中miR-148a-3p表达水平均高于MG组(t_(APS-L)=6.564、t_(APS-H)=10.542、t_(APS-H+miR-NC)=9.945,均P=0.000),SMAD2 mRNA表达水平低于MG组(t_(APS-L)=4.147,P=0.004;t_(APS-H)=6.464、t_(APS-H+miR-NC)=6.586,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组miR-148a-3p表达水平低于APS-H+miRNC组(t=7.558,P=0.000),SMAD2 mRNA表达高于APS-H+miR-NC组(t=4.513,P=0.001),差异均有统计学意义。(2)细胞活力和凋亡率:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组细胞活力高于MG组(t_(APS-L)=8.105、t_(APS-H)=11.509、t_(APS-H+miR-NC)=11.996,均P=0.000),细胞凋亡率低于MG组(t_(APS-L)=8.729、t_(APS-H)=15.690、t_(APS-H+miR-NC)=14.709,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组细胞活力低于APS-H+miR-NC组(t=10.212,P=0.000),细胞凋亡率高于APS-H+miR-NC组(t=12.247,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)氧化应激:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)均低于MG组(LDH:t_(APS-L)=11.257、t_(APS-H)=18.770、t_(APS-H+miR-NC)=18.364,均P=0.000;MDA:t_(APS-L)=11.121、t_(APS-H)=17.139、t_(APS-H+miR-NC)=17.768,均P=0.000),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均高于MG组(SOD:t_(APS-L)=9.408、t_(APS-H)=14.833、t_(APS-H+miR-NC)=13.240,均P=0.000;GSH:t_(APS-L)=5.616、t_(APS-H)=12.080、t_(APS-H+miR-NC)=12.642,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组LDH和MDA均高于APS-H+miR-NC组(t_(LDH)=15.121、t_(MDA)=14.613,均P=0.000),SOD和GSH均低于APS-H+miR-NC组(tSOD=12.278、tGSH=8.912,均P=0.000),差异均有统计学意义。。(4)凋亡蛋白:APS-L组、APS-H组和APS-H+miR-NC组SMAD2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达低于MG组(SMAD2:t_(APS-L)=4.565、t_(APS-H)=8.042、t_(APS-H+miR-NC)=7.390,均P=0.000;Bax:t_(APS-L)=4.916、t_(APS-H)=8.763、t_(APS-H+miR-NC)=8.336,均P=0.000;Caspase-3:t_(APS-L)=4.214、t_(APS-H)=10.201、t_(APS-H+miR-NC)=9.536,均P=0.000),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达高于MG组(t_(APS-L)=3.713,P=0.001;t_(APS-H)=10.108、t_(APS-H+miR-NC)=10.314,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组SMAD2、Bax、Caspase-3表达均高于APS-H+miR-NC组(t_(SMAD2)=5.651、t_(Bax)=6.840、t_(Caspase-3)=8.205,均P=0.000),Bcl-2表达低于APS-H+miR-NC组(t=9.283,P=0.000),差异均有统计学意义。(5)靶向关系:miR-148a-3p与SMAD2的3'非翻译区存在结合位点。miR-148a-3p mimics和野生型SMAD2共转染组荧光素酶活性低于mimics-NC和野生型SMAD2共转染组,差异有统计学意义(t=12.781,P=0.000)。结论当归多糖可能通过上调miR-148a-3p、下调SMAD2,改善高糖诱导的RGC凋亡和氧化应激损伤。 展开更多
关键词 当归多糖 视网膜神经节细胞 微小RNa-148a-3p SMAD家族成员2
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丙戊酸钠通过激活miR-148a-3p/Mcl-1通路促进SH-SY5Y细胞凋亡 被引量:1
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作者 戴旭芳 闫小晶 +1 位作者 谢鹏 连继勤 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1195-1200,共6页
目的探讨抗癫痫药丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对神经细胞的凋亡诱导作用及相关机制。方法将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)用不同剂量VPA处理,流式分析细胞凋亡水平变化,Western blot检测Mcl-1蛋白水平变化,定量PCR分析Mcl-1 mRNA与mi... 目的探讨抗癫痫药丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对神经细胞的凋亡诱导作用及相关机制。方法将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)用不同剂量VPA处理,流式分析细胞凋亡水平变化,Western blot检测Mcl-1蛋白水平变化,定量PCR分析Mcl-1 mRNA与miR-148a-3p水平变化,报告基因实验检测Mcl-1启动子活性变化。用miR-148a-3p抑制剂联合VPA处理细胞,观察miR-184a-3p在VPA下调Mcl-1表达中的作用及对VPA促SH-SY5Y细胞凋亡效果的影响。结果VPA可促进SH-SY5Y细胞凋亡,并抑制SH-SY5Y细胞中Mcl-1的蛋白和mRNA水平(P<0.05)。VPA处理不影响SH-SY5Y细胞中Mcl-1的启动子活性(P>0.05)。VPA可显著增强SH-SY5Y细胞中miR-148a-3p的表达(P<0.05),使用miR-148a-3p抑制剂可减轻VPA对Mcl-1表达的抑制作用,并减弱VPA的促细胞凋亡效果。结论VPA可能通过激活miR-148a-3p/Mcl-1信号通路促进SH-SY5Y细胞凋亡。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 MCL-1 miR-148a-3p 凋亡
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MicroRNA-200a-3p通过靶点蛋白ZEB2和e钙粘蛋白对膀胱癌细胞的生物学影响 被引量:1
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作者 卢毅 俞凌 +3 位作者 俞鹏奎 林建喜 张晓 孟宏舟 《浙江创伤外科》 2021年第6期1013-1016,共4页
目的分析miR-200a-3p在膀胱癌中的生物学作用。方法选取于2018年3月至2020年3月在本院行膀胱部分切除术或根治性膀胱切除术的9例膀胱癌患者,采用qPCR检测膀胱癌组织中miR-200a-3p水平、组织学分析肿瘤形态、WB法测定蛋白表达情况。结果m... 目的分析miR-200a-3p在膀胱癌中的生物学作用。方法选取于2018年3月至2020年3月在本院行膀胱部分切除术或根治性膀胱切除术的9例膀胱癌患者,采用qPCR检测膀胱癌组织中miR-200a-3p水平、组织学分析肿瘤形态、WB法测定蛋白表达情况。结果miR-200a-3p在膀胱癌组织中显著下调。组织学分析结果显示膀胱癌黏膜坏死与肉芽组织增生、多核巨噬细胞聚集和浸润性尿路上皮癌有关。蛋白表达结果显示E-钙粘蛋白显著上调、ZEB2蛋白显著下调。推测miR-200a-3p可与E-cadherin和ZEB2相关调控膀胱癌的侵袭和迁移。结论miR-200a-3p可以作为靶向ZEB2的生物标志物,负调控ZEB2的表达,这些发现将有助于寻找新的膀胱癌治疗靶点。 展开更多
关键词 microrna-200a-3p E-钙粘蛋白 ZEB2 膀胱癌
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MicroRNA-34a-5p在肝纤维化中的表达及作用 被引量:2
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作者 朱海东 胡东坡 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2019年第5期859-865,共7页
目的:探讨大鼠肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平及其在肝纤维化中的作用。方法:建立肝纤维化大鼠模型,转化生长因子-β1(TGF-β1)活化肝星状细胞,采用HE染色观察肝脏组织形态学变化,采用RT-PCR测定大鼠肝组织和活化... 目的:探讨大鼠肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平及其在肝纤维化中的作用。方法:建立肝纤维化大鼠模型,转化生长因子-β1(TGF-β1)活化肝星状细胞,采用HE染色观察肝脏组织形态学变化,采用RT-PCR测定大鼠肝组织和活化肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和MicroRNA-34a-5p水平。将肝纤维化模型大鼠根据随机数字表法分为空白对照组、阴性转染对照组和MicroRNA-34a-5p组;将TGF-β1活化的HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性转染对照组和MicroRNA-34a-5p组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法测定3组大鼠肝组织和肝星状细胞中α-SMA、I型胶原蛋白(collagenI)、沉默调节蛋白1(SIRT1)、分泌型糖蛋白-3α(Wnt-3α)、分泌型糖蛋白-5α(Wnt-5α)和β-波链蛋白(β-catenin)的水平。结果:与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝组织和活化肝星状细胞中α-SMA水平升高(P<0.05),MicroRNA-34a-5p水平降低(P<0.05)。与空白对照组和阴性转染对照组比较,MicroRNA-34a-5p转染组大鼠肝组织和活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平升高(P<0.05),而α-SMA、collagenI、SIRT1、Wnt-3α、Wnt-5α和β-catenin的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05),空白对照组和阴性转染对照组间大鼠肝组织和活化肝星状细胞中各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平降低,可能通过靶向SIRT1而抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而发挥抗肝纤维化的作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 microrna-34a-5p Ⅰ型胶原蛋白 沉默调节蛋白1 分泌型糖蛋白-3α 分泌型糖蛋白-5α β-波链蛋白 大鼠
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非小细胞肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者预后的相关性分析 被引量:1
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作者 张伟萍 应海峰 +2 位作者 周灵芳 龚柳阳 徐有祖 《中国卫生检验杂志》 CAS 2022年第18期2190-2194,共5页
目的检测非小细胞肺癌组织中微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并分析其与患者预后的关系。方法选取2014年6月—2016年10月于浙江省台州医院就诊的86例非小细胞肺癌患者,术... 目的检测非小细胞肺癌组织中微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并分析其与患者预后的关系。方法选取2014年6月—2016年10月于浙江省台州医院就诊的86例非小细胞肺癌患者,术中收集患者肺癌组织和配对的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测所有组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平,分析肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系及二者之间的相关性,Kaplan-Meier法分析肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者5年总生存率的关系;多因素logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者预后的危险因素。结果肺癌组织miR-148a-3p表达水平高于癌旁组织(P<0.05),Hint1 mRNA表达水平低于癌旁组织(P<0.05);无淋巴结转移患者肺癌组织miR-148a-3p表达水平低于有淋巴结转移患者,Hint1 mRNA表达水平高于有淋巴结转移患者(P<0.05);I期~Ⅱ期患者肺癌组织miR-148a-3p表达水平低于Ⅲ期患者,Hint1 mRNA表达水平高于Ⅲ期患者(P<0.05);肺癌组织miR-148a-3p与Hint1 mRNA表达水平成负相关(P<0.05);肺癌组织miR-148a-3p高表达、Hint1 mRNA低表达是非小细胞肺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p表达上调、Hint1 mRNA表达下调,与患者临床病理特征和预后密切相关,可能成为新的肺癌治疗靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌组织 微小RNa-148a-3p 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 临床病理特征 预后
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MicroRNA-450a-3p通过抑制Bub1基因的表达调控小鼠细胞增殖和胚胎发育
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作者 刘晨 杨丹丹 +5 位作者 蒋凤兵 白慧丽 李宝林 罗敏 湛晓琴 施琼 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1651-1657,共7页
目的:探讨microRNA-450a-3p(miR-450a-3p)对小鼠细胞增殖和胚胎发育的调控是否通过抑制Bub1基因的表达实现。方法:用萤光素酶报告基因实验检测miR-450a-3p能否特异性结合于Bub1基因的3’-非翻译区(untranslated region,UTR);用Western b... 目的:探讨microRNA-450a-3p(miR-450a-3p)对小鼠细胞增殖和胚胎发育的调控是否通过抑制Bub1基因的表达实现。方法:用萤光素酶报告基因实验检测miR-450a-3p能否特异性结合于Bub1基因的3’-非翻译区(untranslated region,UTR);用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测miR-450a-3p对Bub1蛋白和mRNA表达;分别通过MTT、Hoechst染色、流式细胞术等分析miR-450a-3p对小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的调控;利用染色体核型分析技术检测miR-450a-3p对MEFs染色体数目的影响。结果:miR-450a-3p能与靶基因Bub1的3’-UTR结合,在翻译水平抑制MEFs中Bub1的表达,然而其转录水平的表达却不受影响。miR-450a-3p通过下调靶基因Bub1的表达,抑制MEFs的增殖,促进细胞的凋亡;而且miR-450a-3p还能使大多数细胞停滞在G1/G0期,使细胞分裂受阻,导致细胞染色体数目异常。结论:miR-450a-3p能够调控靶基因Bub1的表达,抑制MEFs增殖,并最终影响小鼠胚胎的发育。 展开更多
关键词 microrna-450a-3p 小鼠胚胎成纤维细胞 基因 Bub1 胚胎
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慢病毒载体对MDA-MB-231细胞中microRNA-18a-3P表达的影响
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作者 王立斌 王丹妮 +5 位作者 马荣 张旭 田进海 李晓菡 冯惠敏 马芳 《中国现代医学杂志》 CAS 2020年第2期14-21,共8页
目的构建人microRNA-18a-3P(miR-18a-3P)过表达及干扰慢病毒载体,研究病毒感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的步骤和方法。方法 PCR技术扩增相应目的基因片段并进行酶切,回收后与目的基因连接,产物转化细菌感受态细胞,对阳性克隆测序行对... 目的构建人microRNA-18a-3P(miR-18a-3P)过表达及干扰慢病毒载体,研究病毒感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的步骤和方法。方法 PCR技术扩增相应目的基因片段并进行酶切,回收后与目的基因连接,产物转化细菌感受态细胞,对阳性克隆测序行对比分析,构建miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒载体,荧光法测定病毒滴定;倒置荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MDA-MB-231转染及筛选过程的转染效率,筛选最佳MOI值;qRT-PCR检测慢病毒转染后MDA-MB-231细胞内miR-18a-3P的表达。结果测序分析证实重组慢病毒构建正确;过表达及干扰慢病毒滴度分别为2×10~9和1×10~9 TU/ml;加Polybrene较未加Polybrene转染效率升高,当感染复数为10 TU/ml,Polybrene浓度为1μg/ml时,转染效率最佳;miR-18a-3P转染组过表达miR-18a-3P的相对表达量较空白对照组、阴性对照组高(P<0.05),miR-18a-3P转染组干扰表达miR-18a-3P的相对表达量较空白对照组、阴性对照组低(P<0.05)。结论成功构建了miR-18a-3P过表达及干扰慢病毒表达载体,对人乳腺癌细胞MDA-MB-231进行转染和筛选后,可快速高效率获得所需目的细胞。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 microrna-18a-3p/微RNAs 慢病毒感染
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