目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)标本各76例,采用实时荧...目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469 mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.71±0.03、5.49±0.04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织( P <0.05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关( P <0.05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性( P >0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者( P <0.05)。miR-1469在LO2、HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1.01±0.02、0.45±0.01、0.05±0.01、0.61±0.02、0.14±0.01、0.29±0.02;miR-1469在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞( P <0.05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4.47±0.15、0.05±0.01,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0.20±0.11、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17.00±1.73、65.67±2.33,miR-1469 mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93.00±2.08、27.67±1.45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469 control mimics组比较,miR-1469 mimics组G 1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少( P <0.05),但2组G 2期细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G 1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多( P <0.05);但2组G 2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59.00±2.08、29.00±2.08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35.00±1.53、20.33±1.45;miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26.00±1.16、17.33±0.88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56.33±3.18、44.67±1.45;miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、1.00±0.00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3.90±0.17、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关;miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。展开更多
文摘目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469 mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.71±0.03、5.49±0.04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织( P <0.05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关( P <0.05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性( P >0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者( P <0.05)。miR-1469在LO2、HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1.01±0.02、0.45±0.01、0.05±0.01、0.61±0.02、0.14±0.01、0.29±0.02;miR-1469在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞( P <0.05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4.47±0.15、0.05±0.01,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0.20±0.11、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17.00±1.73、65.67±2.33,miR-1469 mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93.00±2.08、27.67±1.45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469 control mimics组比较,miR-1469 mimics组G 1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少( P <0.05),但2组G 2期细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G 1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多( P <0.05);但2组G 2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59.00±2.08、29.00±2.08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35.00±1.53、20.33±1.45;miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26.00±1.16、17.33±0.88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56.33±3.18、44.67±1.45;miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、1.00±0.00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3.90±0.17、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关;miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。
