目的:基于miR-451a靶向磷酸甘油酸变位酶(PGAM5)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)轴调控线粒体动力学,探讨温肺降浊方对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导HT22模型的效应机制。方法:建立OGD/R诱导HT22细胞模型,设立正常对照组、OGD/R组、miR-451a过...目的:基于miR-451a靶向磷酸甘油酸变位酶(PGAM5)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)轴调控线粒体动力学,探讨温肺降浊方对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导HT22模型的效应机制。方法:建立OGD/R诱导HT22细胞模型,设立正常对照组、OGD/R组、miR-451a过表达组、miR-451a敲低组、温肺降浊方含药血清(WFJZF)组、miR-451a过表达+WFJZF组、miR-451a敲低+WFJZF组和miR-451a空载体组,双荧光素酶确定miR-451a和PGAM5的转录关系,免疫蛋白共沉淀确定PGAM5和Drp1的调控作用,慢病毒转染miR-451a于HT22细胞中,qRT-PCR确定转染效率,CCK-8测定缺糖缺氧状态下细胞活性的最佳时间点,qRT-PCR和Westem Blot检测HT22模型细胞内DGAM5-Drp1轴蛋白及mRNA的表达水平。结果:OGD/R诱导HT22细胞持续2 h为最佳时间点,miR-451a可以靶向调控PGAM5基因,PGAM5和Drp1具有相互调控作用。与正常对照组比较,OGD/R组细胞内PGAM5、Drp1和Fis1蛋白及mRNA表达上升,p-Drp1 Ser 616磷酸化表达上升(P<0.05),OPA1蛋白及mRNA表达下降,p-Drp1 Ser 637去磷酸化表达下降(P<0.05);与OGD/R组比较,miR-451a过表达+WFJZF组细胞内PGAM5、Drp1和Fis1蛋白及mRNA表达下降,p-Drp1 Ser 616磷酸化表达下降(P<0.05),OPA1蛋白及mRNA表达上升,p-Drp1 Ser 637去磷酸化表达上升(P<0.05)。结论:miR-451a可以靶向调控PGAM5-Drp1轴,miR-451a过表达+WFJZF组可以改善线粒体失衡状态,减少神经元过度损伤,发挥脑保护效应。展开更多
文摘目的:基于miR-451a靶向磷酸甘油酸变位酶(PGAM5)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)轴调控线粒体动力学,探讨温肺降浊方对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导HT22模型的效应机制。方法:建立OGD/R诱导HT22细胞模型,设立正常对照组、OGD/R组、miR-451a过表达组、miR-451a敲低组、温肺降浊方含药血清(WFJZF)组、miR-451a过表达+WFJZF组、miR-451a敲低+WFJZF组和miR-451a空载体组,双荧光素酶确定miR-451a和PGAM5的转录关系,免疫蛋白共沉淀确定PGAM5和Drp1的调控作用,慢病毒转染miR-451a于HT22细胞中,qRT-PCR确定转染效率,CCK-8测定缺糖缺氧状态下细胞活性的最佳时间点,qRT-PCR和Westem Blot检测HT22模型细胞内DGAM5-Drp1轴蛋白及mRNA的表达水平。结果:OGD/R诱导HT22细胞持续2 h为最佳时间点,miR-451a可以靶向调控PGAM5基因,PGAM5和Drp1具有相互调控作用。与正常对照组比较,OGD/R组细胞内PGAM5、Drp1和Fis1蛋白及mRNA表达上升,p-Drp1 Ser 616磷酸化表达上升(P<0.05),OPA1蛋白及mRNA表达下降,p-Drp1 Ser 637去磷酸化表达下降(P<0.05);与OGD/R组比较,miR-451a过表达+WFJZF组细胞内PGAM5、Drp1和Fis1蛋白及mRNA表达下降,p-Drp1 Ser 616磷酸化表达下降(P<0.05),OPA1蛋白及mRNA表达上升,p-Drp1 Ser 637去磷酸化表达上升(P<0.05)。结论:miR-451a可以靶向调控PGAM5-Drp1轴,miR-451a过表达+WFJZF组可以改善线粒体失衡状态,减少神经元过度损伤,发挥脑保护效应。
