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基于肥大细胞外泌体miR-34c对肠屏障功能的影响探讨清毒汤治疗慢加急性肝衰竭分子机制 被引量：1
1
作者 杨佳璇 陈月 +1 位作者 师娟 高连印 《中国中医药信息杂志》 2025年第6期128-134,共7页
目的观察清毒汤调控人肥大细胞源外泌体miR-34c介导的信号通路对肠屏障功能的影响,探讨其治疗慢加急性肝衰竭的分子机制。方法采用1μg/mL脂多糖处理人肥大细胞建立炎症模型,慢病毒转染法使肥大细胞过表达miR-34c,将肥大细胞分为正常组... 目的观察清毒汤调控人肥大细胞源外泌体miR-34c介导的信号通路对肠屏障功能的影响,探讨其治疗慢加急性肝衰竭的分子机制。方法采用1μg/mL脂多糖处理人肥大细胞建立炎症模型,慢病毒转染法使肥大细胞过表达miR-34c,将肥大细胞分为正常组、模型组和miR-34c过表达组,提取各组肥大细胞外泌体。将人肠上皮细胞分为正常组、正常外泌体组、模型外泌体组、miR-34c过表达外泌体组和清毒汤组(miR-34c过表达外泌体+清毒汤),并予相应处理。双荧光素酶基因报告确定miR-34c与骨髓细胞瘤癌基因相关锌指蛋白(MAZ)的靶向关系,RT-qPCR检测肥大细胞及肠上皮细胞miR-34c表达,Western blot检测MAZ、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白(ZO-1)表达。结果与正常组比较,脂多糖处理和慢病毒转染的肥大细胞miR-34c表达均明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-34c可靶向抑制MAZ表达。RT-qPCR结果表明,与正常组比较,模型外泌体组和miR-34c过表达外泌体组肠上皮细胞miR-34c表达明显升高(P<0.05,P<0.01),清毒汤组miR-34c表达较miR-34c过表达外泌体组明显降低(P<0.01)。Western blot结果表明,与正常组比较,模型外泌体组和miR-34c过表达外泌体组MAZ、Occludin、ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),清毒汤组MAZ、Occludin、ZO-1蛋白表达较miR-34c过表达外泌体组明显回升(P<0.05)。结论清毒汤治疗慢加急性肝衰竭可能与调控肥大细胞源外泌体miR-34c介导的信号通路,上调肠上皮紧密连接蛋白表达相关。 展开更多
关键词 慢加急性肝衰竭 清毒汤 外泌体 mir-34c 肠上皮细胞 紧密连接蛋白
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上调miR-34c抑制胶质瘤细胞的迁移及侵袭 被引量：1
2
作者 武震东 任洪波 +3 位作者 孙志强 刘斌 牛国栋 焦保华 《河北医药》 CAS 2015年第19期2888-2891,共4页
目的研究miR-34c对人脑胶质瘤细胞株U251和U87的迁移和侵袭的影响。方法应用脂质体将miR-34c导入胶质瘤细胞株U251和U87后,应用定量PCR验证转染效果,应用Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力变化。结果在U87和U251细胞系中,miR-34c-3p... 目的研究miR-34c对人脑胶质瘤细胞株U251和U87的迁移和侵袭的影响。方法应用脂质体将miR-34c导入胶质瘤细胞株U251和U87后,应用定量PCR验证转染效果,应用Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力变化。结果在U87和U251细胞系中,miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达量要明显小于正常胶质细胞系HEB。而转染了miR-34c-3p的U87和U251细胞,其miR-34c-3p的表达量明显高于未转染组的细胞(Normal组,P<0.05)和NC组细胞(P<0.05),miR-34c-5p也呈同样的变化。利用Transwell小室,U251细胞转染miR-34c-3p或miR-34c-5p后,其迁移至下室的细胞数量与Normal组和NC组比较显著减少,在U87细胞中的情况相同。结论转染上调miR-34c在胶质瘤中的表达能够抑制其迁移和侵袭能力,为脑胶质瘤靶向治疗提供可靠的依据。 展开更多
关键词 胶质瘤 mir-34c-3p mir-34c-5p 迁移 侵袭
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UVB诱导下早衰人皮肤成纤维细胞中miR-34c及SIRT1表达的研究 被引量：6
3
作者 郭娴菲 周炳荣 +2 位作者 李巍 黄秋红 骆丹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1289-1293,共5页
目的:运用反复亚毒性剂量紫外线B(ultraviolet B,UVB)辐射人皮肤成纤维细胞,构建应激诱导早衰(stress-inducedpremature senescence,SIPS)模型,观察衰老相关生物学标志、衰老相关基因信号分子p53、p21、p16、沉默信息调节因子2相关酶1(s... 目的:运用反复亚毒性剂量紫外线B(ultraviolet B,UVB)辐射人皮肤成纤维细胞,构建应激诱导早衰(stress-inducedpremature senescence,SIPS)模型,观察衰老相关生物学标志、衰老相关基因信号分子p53、p21、p16、沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin1,SIRT1)以及miR-34c的表达情况。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞,予连续5次、每次剂量10 mJ/cm2的UVB辐射,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞,流式细胞术检测细胞周期阻滞情况,实时荧光定量PCR检测miR-34c及衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA表达水平变化,Western blot检测p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达。结果:与对照组相比,SIPS组细胞SA-β-Gal染色呈强阳性[对照组(8.13±1.92)%,SIPS组(94.72±2.08)%,P<0.05];多数细胞阻滞于G1期[对照组(52.96±1.76)%,SIPS组(77.31±2.05)%,P<0.05];另外,实时荧光定量PCR显示miR-34c mRNA的表达升高(miR-34c-3p、miR-34c-5p分别为对照组0.93±0.09、1.03±0.03,SIPS组2.08±0.19、12.28±1.64,P<0.05);衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA的表达亦升高(对照组分别为0.74±0.23、1.06±0.23、0.86±0.13、0.74±0.25;SIPS组分别为1.84±0.55、20.25±2.34、16.7±3.94、2.15±0.22,P<0.05);Western bolt表明p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-34c在反复多次亚毒性剂量UVB辐射人皮肤成纤维细胞后表达升高,对p53起正反馈调节作用,而SIRT1并未受miR-34c的抑制。 展开更多
关键词 衰老 紫外线 成纤维细胞 SIRT1 mir-34c
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miR-34c在急性脑梗死患者血清中的表达 被引量：6
4
作者 骆嵩 屈洪党 +6 位作者 刘晓林 许娟娟 马博 李理 刘东亮 郝佳妮 刘楚楚 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期1136-1138,共3页
目的研究miR-34c在急性脑梗死患者外周血中表达水平,评估及对急性脑梗死患者炎症反应和神经功能缺损程度的价值。方法以20例急性脑梗死患者作为梗死组,同时选取20例健康体检者作为正常组,通过对两组研究对象外周血miR-34c表达水平及与尿... 目的研究miR-34c在急性脑梗死患者外周血中表达水平,评估及对急性脑梗死患者炎症反应和神经功能缺损程度的价值。方法以20例急性脑梗死患者作为梗死组,同时选取20例健康体检者作为正常组,通过对两组研究对象外周血miR-34c表达水平及与尿酸,LDL-C,C反应蛋白和入院时神经功能缺损程度进行比较,评价miR-34c的临床意义。结果和正常组对比,梗死组外周血炎症反应指标尿酸、LDL-C、C反应蛋白具有统计学差异(P<0.05),此外,miR-34c在梗死组外周血表达水平较正常组显著下降(P<0.05);而且miR-34c与尿酸,LDL-C,C反应蛋白,入院时神经功能缺损程度均为负相关关系(P<0.05)。结论急性脑梗死患者外周血miR-34c表达水平变化可以作为评估炎症反应和神经功能缺损程度的重要指标。 展开更多
关键词 脑梗死 mir-34c 神经功能 炎症反应
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miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达及临床意义 被引量：11
5
作者 李晖 蒋毅 刘颖 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2018年第12期1095-1098,共4页
目的研究miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达水平,分析其对老年痴呆的诊断价值。方法以本院接收诊治的73例老年痴呆患者为研究对象,同时选取70例将健康体检者作为正常组,采用RTq PCR检测所有研究者血清中miR-9和miR-34c的水平,... 目的研究miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达水平,分析其对老年痴呆的诊断价值。方法以本院接收诊治的73例老年痴呆患者为研究对象,同时选取70例将健康体检者作为正常组,采用RTq PCR检测所有研究者血清中miR-9和miR-34c的水平,采用临床痴呆评定量表(CDR)对老年痴呆患者进行认知能力评分,观察其诊断老年痴呆的灵敏度与特异度。结果与正常组相比,老年痴呆患者血清HDL-C、LDL-C、Hcy、ANP水平以及MMSE评分方面均差异显著(P <0. 05),miR-9表达水平明显下降(P <0. 01),miR-34c表达水平明显上升(P <0. 01)。依据CDR评分,痴呆程度越严重,miR-9水平越低,miR-34c水平越高。老年痴呆患者血清中miR-9与LDL-C和Hcy水平均呈负相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈正相关; miR-34c与血清LDL-C和Hcy水平均呈正相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈负相关。ROC分析表明,miR-9和miR-34c的AUC面积分别为0. 811、0. 819;敏感度分别为89. 58%、91. 67%;特异度分别为80. 00%、71. 11%;截断值分别为0. 87、1. 14。结论老年痴呆患者血清miR-9表达下调,而miR-34c表达上调,二者异常表达均与老年呆发生及发展过程有关,可作为临床诊断和病情监测的重要指标。 展开更多
关键词 老年痴呆 血清 mir-9 mir-34c 诊断价值
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MiR-34c在奶山羊雄性生殖干细胞增殖分化中的作用 被引量：3
6
作者 刘超 武思宇 华进联 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期569-577,共9页
microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PC... microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PCR技术筛选分析miRNAs。结果发现,miR-34c与Stra8的表达规律基本一致。在无精症奶山羊的睾丸组织中,发现miR-34c在无精症奶山羊睾丸组织中表达缺失。利用miR-34c模拟物及抑制剂转染奶山羊雄性生殖干细胞,体外转染miR-34c模拟物及其抑制剂,发现miR-34c能够下调Rarg、Stra8与c-Myc基因的表达,减缓奶山羊雄性生殖干细胞的增殖。结果提示,miR-34c可能具有调控奶山羊雄性生殖干细胞的减数分裂的作用,同时抑制其增殖。 展开更多
关键词 视黄酸效应基因8(Stra8) MIRNA miRNA前体与成熟体mir-34c 雄性生殖干细胞 奶山羊
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miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响 被引量：3
7
作者 李甫钥 薛纪森 +2 位作者 黄亦波 陈慧君 郑飞云 《温州医学院学报》 CAS 2014年第2期86-90,共5页
目的:研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法:用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实... 目的:研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法:用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果:细胞转染率为81.16%。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加(P<0.05)。结论:miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。 展开更多
关键词 mir-34c Ⅱ型子宫内膜肿瘤 细胞 增殖 凋亡
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miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉上皮纤毛细胞分化的影响 被引量：2
8
作者 矫健 李景云 +1 位作者 李颖 张罗 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2020年第1期30-33,共4页
目的探讨miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)鼻上皮纤毛细胞分化的影响及其调控机制。方法获取正常对照及CRSwNP患者的鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c的表达,免疫细胞化学检测纤... 目的探讨miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)鼻上皮纤毛细胞分化的影响及其调控机制。方法获取正常对照及CRSwNP患者的鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c的表达,免疫细胞化学检测纤毛细胞数量。建立鼻上皮细胞气液界面培养体系,敲低表达miR-34c后免疫荧光检测纤毛标记物β-tubulinⅣ的表达。采用IL-13刺激鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c和纤毛发生转录因子FOXJ1的表达。结果与正常对照鼻上皮细胞相比,CRSwNP鼻上皮中miR-34c表达量降低(正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56,P<0.05),纤毛细胞百分比也有明显下调(正常对照18.20%±2.52%vs CRSwNP 12.58%±2.06%,P<0.05)。在鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量明显降低。IL-13刺激可以明显降低miR-34c(刺激前5.85±4.54 vs刺激后0.43±0.40,P<0.05)和FOXJ1(刺激前1.41±1.09 vs刺激后0.15±0.19,P<0.05)的表达量。结论IL-13可以通过调控miR-34c表达进而调控纤毛细胞分化,从而参与CRSwNP黏液纤毛功能障碍。 展开更多
关键词 鼻窦炎 鼻息肉 微RNAS 纤毛 白细胞介素13 mir-34c
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miR-34c逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX耐药性的研究 被引量：4
9
作者 刘浩 贺智敏 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第2期229-235,共7页
miR-34在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用,然而,mi R-34在肿瘤耐药中的作用研究不多。该研究将合成的mi R-34c成熟序列转染乳腺癌阿霉素(doxorubicin,DOX)耐药细胞MCF-7/DOX,探讨mi R-34c体外逆转MCF-7/DOX细胞耐药性作用及其可能的... miR-34在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用,然而,mi R-34在肿瘤耐药中的作用研究不多。该研究将合成的mi R-34c成熟序列转染乳腺癌阿霉素(doxorubicin,DOX)耐药细胞MCF-7/DOX,探讨mi R-34c体外逆转MCF-7/DOX细胞耐药性作用及其可能的机制。采用Real-time RT-PCR检测mi R-34c在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX中的表达,MTS法检测miR-34c对MCF-7/DOX细胞阿霉素耐药性的影响,流式细胞术检测miR-34c对MCF-7/DOX细胞周期和凋亡的影响,Real-time RT-PCR和Western blot法检测多药耐药相关蛋白MDR、MRP以及细胞周期与凋亡相关蛋白Bcl-2、E2F3的表达。结果显示,mi R-34c在乳腺癌MCF-7/DOX耐药细胞中低表达,转染mi R-34c可明显增加耐药细胞对阿霉素的敏感性;流式分析发现,miR-34c可以促进耐药细胞G2期细胞周期阻滞和凋亡;与对照组相比较,miR-34c转染组细胞MDR、MRP蛋白表达无明显变化,而Bcl-2、E2F3 mRNA和蛋白表达均明显下调。研究表明,miR-34c直接靶向抑制Bcl-2和E2F3的表达,诱导细胞周期G2期阻滞和凋亡,进而增强MCF-7/DOX耐药细胞对阿霉素的敏感性。 展开更多
关键词 mir-34c 乳腺癌 耐药 细胞周期阻滞和凋亡
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感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义 被引量：1
10
作者 李瀛 罗颜 +1 位作者 李文全 罗蔚锋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第15期2105-2109,共5页
目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63... 目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。 展开更多
关键词 mir-34c mir-29b 感音神经性耳聋 相关性
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膀胱移行细胞癌中miR-34c的表达及其临床意义 被引量：1
11
作者 毕玉彪 王伟 李辉 《武警医学院学报》 CAS 2012年第3期171-174,共4页
【目的】探讨MicroRNA-34c(miR-34c)在膀胱移行细胞癌中的表达及其在膀胱癌发生、发展中的意义。【方法】运用荧光定量real-time PCR检测miR-34c在膀胱癌组织中及癌周非瘤组织的表达水平,采用2-△△Ct算法计算膀胱癌组织与癌周非瘤组织... 【目的】探讨MicroRNA-34c(miR-34c)在膀胱移行细胞癌中的表达及其在膀胱癌发生、发展中的意义。【方法】运用荧光定量real-time PCR检测miR-34c在膀胱癌组织中及癌周非瘤组织的表达水平,采用2-△△Ct算法计算膀胱癌组织与癌周非瘤组织中miR-34c表达量的比值,结合术后病理参数,运用统计学方法分析miR-34c与临床病理资料之间的相关性。【结果】在人膀胱癌组织中发现miR-34c较其相应周围非瘤组织明显低表达。在26例膀胱癌组织中,16例(61.9%)miR-34c显著低表达。miR-34c的低表达与肿瘤大小和恶性程度显著相关。肿瘤越大、恶性程度越高,miR-34c的表达量越低。【结论】低表达miR-34c可能是膀胱移行细胞癌组织的重要特征,并参与膀胱癌的生物学进程,可能对膀胱癌的诊断及防治提供新的思路。 展开更多
关键词 mir-34c 肿瘤 膀胱 增殖 凋亡
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丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬 被引量：1
12
作者 戴旭芳 闫小晶 +1 位作者 谢鹏 连继勤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1415-1420,共6页
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG... 目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B m RNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果 VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论 VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 ATG4B mir-34c-5p 自噬
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Mmu-miR-34c慢病毒表达载体构建及在奶山羊雄性生殖干细胞的表达
13
作者 刘超 于萌 +2 位作者 朱海鲸 李明昭 华进联 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期3414-3421,共8页
【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后... 【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后或U6启动子后,构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3.7-U6-34c。将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,测定病毒滴度。感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞,用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率,用定量PCR方法测定miR-34c的表达效率。【结果】重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序,证明插入序列正确,qPCR检测显示:miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调。【结论】用pLL3.7慢病毒载体中的CMV和U6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达,且由U6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞。 展开更多
关键词 mir-34c 慢病毒载体 雄性生殖干细胞 奶山羊
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miR-34c在哺乳动物生殖发育过程中的功能探讨 被引量：1
14
作者 李东伟 屈长青 刘洪瑜 《阜阳师范学院学报（自然科学版）》 2014年第4期58-61,共4页
miRNA是对基因转录后调控有重要作用的非编码RNA,其中miR-34c被证实在哺乳动物精卵都有表达,且在精子成熟及合子卵裂中有重要作用,其已有报道的作用靶点如Bcl-2、Fox O3a、Myc、TGIF2和Notch2多与细胞凋亡或与哺乳动物繁殖性状相关。本... miRNA是对基因转录后调控有重要作用的非编码RNA,其中miR-34c被证实在哺乳动物精卵都有表达,且在精子成熟及合子卵裂中有重要作用,其已有报道的作用靶点如Bcl-2、Fox O3a、Myc、TGIF2和Notch2多与细胞凋亡或与哺乳动物繁殖性状相关。本文拟就miR-34c在哺乳动物生殖发育中可能的生物学功能进行探讨。 展开更多
关键词 mir-34c 生殖 功能 哺乳动物
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miR-34c的表达及其基因启动子甲基化与肾癌的关系
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作者 郁全胜 王增军 +3 位作者 陈志永 崔勇 陈猛 范建华 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第23期2840-2842,共3页
目的探讨miR-34c的表达及其基因启动子甲基化与肾癌的关系。方法采用实时定量-PCR检测41例肾癌组织及癌旁组织中miR-34c的表达,同时采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测miR-34c基因启动子甲基化情况。结果 miR-34c在肾癌组织的相对表达量... 目的探讨miR-34c的表达及其基因启动子甲基化与肾癌的关系。方法采用实时定量-PCR检测41例肾癌组织及癌旁组织中miR-34c的表达,同时采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测miR-34c基因启动子甲基化情况。结果 miR-34c在肾癌组织的相对表达量低于癌旁组织(1.21±0.06vs.1.42±0.08)(P<0.05);miR-34c基因启动子甲基化在癌组织及癌旁组织的检测率差异无统计学意义(65.9%vs.51.2%)(P>0.05)。在31例Ⅰ期肾癌组织中,23例(74.2%)检测到miR-34c基因启动子的甲基化,明显多于癌旁组织的15例(48.4%)(P<0.05)。结论 miR-34c基因启动子甲基化是早期肾癌中miR-34c基因发生失活的原因之一,可能与肾癌的发生发展有关。 展开更多
关键词 肾癌 mir-34c DNA甲基化
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miR-34c-5p靶向poFUT1对胎盘血管形成的影响
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作者 刘月华 杨照远 +10 位作者 鲁继聪 谢梦霞 郭婧 王媛媛 杨敬敬 田赟 赵明 陈冬笋 朱双慧 李珠银 丁文珺 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期320-325,共6页
目的:探讨miR-34c-5p与poFUT1的靶向关系及对胎盘血管形成的影响。方法:利用ENCORI数据库预测miR-34c-5p与poFUT1的结合位点,采用双荧光素酶报告实验验证。随机选取2023年4至10月在郑州大学第三附属医院住院的胎儿生长受限(FGR)孕妇20例... 目的:探讨miR-34c-5p与poFUT1的靶向关系及对胎盘血管形成的影响。方法:利用ENCORI数据库预测miR-34c-5p与poFUT1的结合位点,采用双荧光素酶报告实验验证。随机选取2023年4至10月在郑州大学第三附属医院住院的胎儿生长受限(FGR)孕妇20例(FGR组),选择同期正常孕妇20例为对照。采用实时荧光定量PCR法检测两组胎盘组织中miR-34c-5p和poFUT1 mRNA的表达。取脐静脉内皮细胞,分组转染miR-34c-5p模拟物及其对照(NC)、miR-34c-5p抑制物及其NC、si-poFUT1 NC、si-poFUT1、si-poFUT1+miR-34c-5p抑制物,采用CCK-8法、Transwell实验以及成管实验检测细胞转染24、48、72、96 h后的增殖能力,转染48 h后的侵袭能力和成管能力。结果:FGR组和对照组胎盘组织中miR-34c-5p表达水平分别为(1.57±0.39)、(1.09±0.18),poFUT1 mRNA表达水平分别为(0.51±0.17)、(1.06±0.13),FGR组胎盘组织中miR-34c-5p表达水平高于对照组,poFUT1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。与miR-34c-5p模拟物NC组比较,模拟物组侵袭细胞数和管腔节点数减少,细胞增殖活性降低(P<0.05)。与miR-34c-5p抑制物NC组比较,抑制物组侵袭细胞数和管腔节点数增加,细胞增殖活性升高(P<0.05)。与si-poFUT1 NC组相比,si-poFUT1组侵袭细胞数和管腔节点数减少,细胞增殖活性降低(P<0.05),而si-poFUT1+miR-34c-5p抑制物组上述变化较si-poFUT1组部分逆转(P<0.05)。结论:miR-34c-5p可能通过调控poFUT1影响血管内皮细胞功能,从而影响胎盘的血管形成,参与FGR的发生。 展开更多
关键词 mir-34c-5p 胎儿生长受限 poFUT1 血管形成
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癌相关成纤维细胞外泌体miR-34c-5p对胃癌细胞干细胞样表型的影响
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作者 徐秀连 谢平 +3 位作者 印隆宽 袁华燕 刘建军 王攀 《医学分子生物学杂志》 CAS 2023年第5期432-438,共7页
目的探讨癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)来源的外泌体miR-34c-5p是否有助于促进胃癌(gastric carcinoma,GC)细胞的干细胞样特性。方法收集并鉴定初代培养的CAFs和配对的正常成纤维细胞(normol fibroblasts,NFs)... 目的探讨癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)来源的外泌体miR-34c-5p是否有助于促进胃癌(gastric carcinoma,GC)细胞的干细胞样特性。方法收集并鉴定初代培养的CAFs和配对的正常成纤维细胞(normol fibroblasts,NFs)的外泌体,检测CAFs和NFs之间外泌体中miR-34c-5p的差异表达。CCK8实验检测GC细胞活力;克隆形成实验检测GC细胞增殖能力;Transwell实验检测GC细胞侵袭能力;细胞成球形成实验评估GC细胞成球能力;蛋白质印迹法检测细胞干细胞特性相关蛋白的表达。结果miR-34c-5p在CAFs衍生的外泌体中的表达显著降低。与CAFs-exo组比较,CAFs-exo中miR-34c-5p抑制GC细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05);抑制GC细胞成球,并降低SOX2、OCT4和NANOG蛋白的表达水平,有显著性差异(P<0.05)。结论CAFs来源的外泌体miR-34c-5p抑制GC细胞的干细胞样表型。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 外泌体 胃癌 mir-34c-5p 干细胞特性
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miR-34c抑制NLRP3炎性小体诱导的小胶质细胞焦亡机制研究
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作者 骆嵩 李理 +1 位作者 刘东亮 屈洪党 《蚌埠医学院学报》 CAS 2023年第5期561-564,共4页
目的:探索miR-34c在调控NLRP3炎性小体激活caspase-1信号通路诱导小胶质细胞焦亡中的作用。方法:观察脂多糖(LPS)联合ATP激活小胶质细胞后,通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测LDH的释放,以判断小胶质细胞细胞膜的完整性;再对miR... 目的:探索miR-34c在调控NLRP3炎性小体激活caspase-1信号通路诱导小胶质细胞焦亡中的作用。方法:观察脂多糖(LPS)联合ATP激活小胶质细胞后,通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测LDH的释放,以判断小胶质细胞细胞膜的完整性;再对miR-34c转染后的小胶质细胞在LPS和ATP激活下,观察小胶质细胞细胞膜变化。采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)分别检测miR-34c转染后的小胶质细胞和未转染的小胶质细胞在LPS和ATP刺激下活力变化情况。采用蛋白免疫印迹分别检测LPS+ATP诱导的小胶质细胞(对照组)中和miR-34c转染后小胶质细胞(观察组)中的蛋白表达情况,如NLRP3炎性小体、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18。结果:LPS+ATP联合诱导下的小胶质细胞较正常的小胶质细胞,miR-34c表达减少(P<0.01);观察组小胶质细胞LDH释放水平较对照组下降(P<0.01);CCK-8测试细胞活力中,2组小胶质细胞除第1天活力差异无统计学意义(P>0.05)外,其他时间观察组均明显高于对照组(P<0.01);观察组中小胶质细胞中NLRP3炎性小体、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18生成较之对照组小胶质细胞中炎性小体相关因子减少(P<0.01)。结论:miR-34c可以抑制LPS+ATP诱导的小胶质细胞焦亡,可能通过降低NLRP3炎性小体活化及下游caspase-1依赖细胞焦亡信号通路关键蛋白表达有关。 展开更多
关键词 细胞焦亡 mir-34c NLRP3炎性小体 小胶质细胞
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敲低miR-34c-5p抑制低氧诱导的大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡
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作者 董扬 张芬 +2 位作者 李幸幸 吴杰 徐忠诚 《基础医学与临床》 2022年第11期1690-1696,共7页
目的探讨敲低miR-34c-5p对提高骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)存活率的作用。方法将大鼠BM-MSCs分为常氧组(normoxia组)、低氧组(hypoxia组)、常氧抑制剂阴性对照组(normoxia inhibitor NC组)、低氧抑制剂阴性对照组(hypoxia inhibitor NC组... 目的探讨敲低miR-34c-5p对提高骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)存活率的作用。方法将大鼠BM-MSCs分为常氧组(normoxia组)、低氧组(hypoxia组)、常氧抑制剂阴性对照组(normoxia inhibitor NC组)、低氧抑制剂阴性对照组(hypoxia inhibitor NC组)、常氧微RNA(miR)抑制剂组(normoxia miR inhibitor组)和低氧miR抑制剂组(hypoxia inhibitor miR组);Lipofectamine2000将miR-34c-5p inhibitor转染至BM-MSCs细胞;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA检测miR-34c-5p、IGF、HGF、bFGF和VEGF表达;流式细胞测量术和TUNEL检测细胞凋亡,Western blot检测cleaved caspase-3,-9,Bcl-2和Bax蛋白水平;生化试剂盒检测ATP/ADP。流式细胞测量术检测细胞摄取葡萄糖能力。结果与hypoxia inhibitor NC组相比,敲低miR-34c-5p可明显抑制MSCs凋亡(P<0.01),显著降低cleaved caspase-3,-9和Bax蛋白表达,提高Bcl-2蛋白表达(P<0.01);IGF、HGF、bFGF和VEGF表达显著升高(P<0.05,P<0.01);ATP/ADP比率和细胞摄取葡萄糖的能力显著提高(P<0.05,P<0.01)。结论敲低miR-34c-5p可抑制低氧诱导的大鼠BM-MSCs的凋亡。 展开更多
关键词 敲低mir-34c-5p 骨髓间充质干细胞 低氧 细胞凋亡
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针刺介导miR-34c-5p调控脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞自噬的研究 被引量：21
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作者 卢小叶 何灏龙 +4 位作者 吕倩忆 李棋龙 许明 田浩梅 张泓 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期415-421,共7页
目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CI/RI)大鼠缺血侧海马组织miR-34c-5p、自噬相关蛋白表达及凋亡率的影响,探讨针刺通过miR-34c-5p调控CI/RI大鼠海马神经细胞自噬的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组及针刺组,每组20... 目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CI/RI)大鼠缺血侧海马组织miR-34c-5p、自噬相关蛋白表达及凋亡率的影响,探讨针刺通过miR-34c-5p调控CI/RI大鼠海马神经细胞自噬的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组及针刺组,每组20只。采用线栓法制作大脑中动脉阻塞再灌注大鼠模型。假手术组只剥离血管,不插入线栓。针刺组针刺“大椎”“百会”“水沟”,每15 min行针1次,留针30 min;药物组腹腔注射依达拉奉(5 mg/kg);均1次/12 h,共7次。用改良Garcia评分法评估神经功能损伤程度,TTC法测定脑梗死面积百分比,透射电镜观察缺血侧海马区神经细胞超微结构,实时荧光定量PCR法检测海马miR-34c-5p的表达量,Western blot法检测海马Beclin-1、LC3B、p62的表达,TUNEL法检测缺血侧脑组织细胞凋亡率。结果:与假手术组比较,模型组Garcia评分明显降低(P<0.01),脑梗死面积百分比、细胞凋亡率明显升高(P<0.01),海马miR-34c-5p、Beclin-1、p62表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,针刺组、药物组Garcia评分明显升高(P<0.01),脑梗死面积百分比、细胞凋亡率明显降低(P<0.01),海马miR-34c-5p、Beclin-1、p62表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高(P<0.01,P<0.05)。与药物组比较,针刺组海马miR-34c-5p表达水平明显升高(P<0.01)。电镜结果显示,假手术组大鼠海马神经细胞结构正常;模型组大鼠神经细胞有明显病理变化;针刺组、药物组较模型组神经细胞损伤减轻,细胞呈轻度水肿,结构较完整,可见部分正常细胞器,仍可观察到自噬小体、自噬溶酶体及其包裹的细胞器。结论:针刺可改善CI/RI大鼠神经功能,减少脑梗死面积,可能与其上调miR-34c-5p进而调控细胞自噬抗凋亡有关。 展开更多
关键词 针刺 mir-34c-5p 脑缺血再灌注损伤 自噬
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