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题名木薯HOS15基因克隆、表达模式分析及原核表达
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作者
王萌媛
程科
赵惠萍
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机构
海南大学热带农林学院/三亚南繁研究院/海南省耐盐作物生物技术重点实验室
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出处
《南方农业学报》
北大核心
2026年第1期54-65,共12页
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基金
海南省自然科学基金项目(325CXTD604)
海南省高等学校科学研究项目(Hnky2024-10)。
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文摘
【目的】对木薯高表达渗透反应因子基因(MeHOS15)进行克隆、表达分析及原核表达,为探究其在木薯生长发育和免疫应答中的调控功能提供理论参考。【方法】以木薯品种SC124为材料,通过PCR克隆MeHOS15基因,对其进行生物信息学分析,并结合拟南芥和水稻的HOS蛋白序列构建系统发育树。采用实时荧光定量PCR检测MeHOS15基因在不同胁迫处理下的表达模式。通过构建pEGAD-MeHOS15-GFP融合表达载体对MeHOS15蛋白进行亚细胞定位。通过原核表达系统诱导MeHOS15蛋白表达,同时采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测其表达情况。【结果】从木薯叶片中成功克隆获得MeHOS15基因,编码区(CDS)序列为1725 bp,编码574个氨基酸,与Phytozome数据库中的参考序列(登录号:Manes.12G109000)相似性达99.65%,蛋白相对分子质量为64.67 kD,理论等电点为5.41,属于稳定的非分泌型亲水性蛋白,含有WD40蛋白家族的典型保守结构域WD40。系统发育分析结果显示,MeHOS15蛋白与拟南芥HOS15蛋白亲缘关系最近,具有相似的结构域。实时荧光定量PCR检测结果显示,在地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis,Xam)、盐(NaCl,200μmol/L)、过氧化氢(5%H2O2)、水杨酸(SA,50μmol/L)、脱落酸(ABA,50μmol/L)胁迫处理下,MeHOS15基因相对表达量呈先升高后降低的变化趋势。亚细胞定位结果显示,MeHOS15蛋白定位于细胞核和细胞膜。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,MeHOS15蛋白在28℃的条件下成功表达。【结论】MeHOS15属于WD40基因家族成员,NaCl、ABA、H2O2、SA和Xam胁迫可诱导其高表达,推测MeHOS15基因参与木薯对生物与非生物胁迫的响应调控。
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关键词
木薯
mehos15
基因克隆
表达分析
胁迫
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Keywords
cassava
mehos15
gene cloning
expression analysis
stress
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分类号
S533.035.3
[农业科学—作物学]
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