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人参皂苷Rh2通过调节MagT1表达对环磷酰胺诱导的免疫抑制大鼠免疫功能低下的影响
1
作者 李喆 李欣蔚 +1 位作者 马晓东 袁洪超 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第12期2919-2924,共6页
目的:探究人参皂苷Rh2对环磷酰胺诱导的免疫抑制大鼠的影响和机制。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为空白组、环磷酰胺组及低、中、高剂量人参皂苷Rh2组(20、50、100 mg/kg),每组6只。空白组正常饲喂,其余4组使用环磷酰胺50 mg/kg诱导... 目的:探究人参皂苷Rh2对环磷酰胺诱导的免疫抑制大鼠的影响和机制。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为空白组、环磷酰胺组及低、中、高剂量人参皂苷Rh2组(20、50、100 mg/kg),每组6只。空白组正常饲喂,其余4组使用环磷酰胺50 mg/kg诱导免疫抑制。免疫抑制模型构建成功后,人参皂苷Rh2组大鼠按分组浓度灌胃人参皂苷Rh2,环磷酰胺组大鼠持续灌胃等量生理盐水,1次/d,连续7 d。灌胃结束后,采集大鼠脾脏和胸腺,计算脾脏指数和胸腺指数。采集各组大鼠外周血分离得到外周血单个核细胞(PBMCs),全自动生化分析仪检测大鼠外周血中白细胞和淋巴细胞数量,流式细胞术检测各组大鼠PBMCs中CD8^(+)T细胞表面PD-1和自然杀伤细胞受体2D(NKG2D)表达,Western blot检测各组大鼠PBMCs中Mg^(2+)转运蛋白1(MagT1)表达,qRT-PCR检测各组大鼠PBMCs中MagT1 mRNA表达,全自动生化分析仪检测各组大鼠外周血和PBMCs中Mg^(2+)水平。Western blot和细胞免疫荧光检测各组大鼠PBMCs内Notch1受体活化片段(Notch1 ICD)表达和JAK2/STAT3通路蛋白磷酸化水平。结果:环磷酰胺成功诱导大鼠免疫抑制。与环磷酰胺组相比,人参皂苷Rh2组大鼠脾脏指数和胸腺指数均显著增加,外周血中白细胞和淋巴细胞数量显著增加,CD8^(+)T细胞PD-1和NKG2D表达均显著升高,PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达均显著增加,外周血中Mg^(2+)水平降低,PBMCs中Mg^(2+)水平升高,PBMCs内Notch1 ICD、p-JAK2和p-STAT3表达均显著增加。结论:人参皂苷Rh2可通过促进PBMCs中MagT1表达,增加外周血中Mg2+内流进入PBMCs,增强CD8+T细胞免疫功能,升高外周血中白细胞和淋巴细胞数量,缓解环磷酰胺诱导的大鼠免疫抑制,可能与Notch1/JAK2/STAT3通路激活相关。 展开更多
关键词 人参皂苷RH2 magt1 环磷酰胺 免疫抑制 CD8+T细胞
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沉默MagT1诱发大鼠心肌细胞凋亡的机制及高Mg^(2+)对凋亡拯救的探究 被引量：1
2
作者 滕飞翔 赵洪侠 杨留才 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期4775-4781,共7页
使用siRNA沉默大鼠心肌细胞的MagT1,检测细胞凋亡情况及机制、高浓度Mg^(2+)对于细胞凋亡的拯救情况。将MagT1 siRNA转入原代培养大鼠心肌细胞沉默MagT1,随后使用RT-PCR和Western blotting法检测MagT1 mRNA和蛋白质表达情况,荧光显微镜... 使用siRNA沉默大鼠心肌细胞的MagT1,检测细胞凋亡情况及机制、高浓度Mg^(2+)对于细胞凋亡的拯救情况。将MagT1 siRNA转入原代培养大鼠心肌细胞沉默MagT1,随后使用RT-PCR和Western blotting法检测MagT1 mRNA和蛋白质表达情况,荧光显微镜检测细胞内线粒体膜电位变化情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和Caspase-9情况。相比阴性siRNA组MagT1 siRNA转染大鼠心肌细胞48 h后,MagT1 mRNA的沉默效率为52.06%(p<0.05),MagT1蛋白质的沉默效率为57.15%(p<0.05),细胞凋亡率为31.26%(p<0.01),高Mg^(2+)拯救组凋亡率为22.78%(p<0.01),线粒体膜电位水平降低22.03%(p<0.05) caspase-9表达水平升高7.93%(p>0.05);MagT1 siRNA转染大鼠心肌细胞60 h后,MagT1 mRNA的沉默效率为87.24%(p<0.01),MagT1蛋白质的沉默效率为84.45%(p<0.01),细胞凋亡率为40.64%(p<0.01),高Mg^(2+)拯救组凋亡率为26.62%(p<0.01)线粒体膜电位水平降低34.24%(p<0.01),caspase-9表达水平升高19.15%(p<0.05)。本研究发现MagT1被显著沉默后大鼠心肌细胞内Mg^(2+)浓度下降通过线粒体途径诱发了细胞凋亡,提升大鼠心肌细胞内Mg^(2+)浓度可以一定程度拯救凋亡。 展开更多
关键词 magt1 SIRNA 细胞凋亡机制 高Mg^(2+)拯救
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镁离子激活自噬促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的体外实验观察 被引量：2
3
作者 王桂芳 吕凯歌 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2021年第4期212-220,共9页
目的:探讨镁离子对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响及其相关的机制。方法:以成骨诱导培养液(含镁离子0.8 mmol/L)为对照组,在此培养液中依次添加100、200、400μmol/L镁离子作为实验组(Mg 100、20... 目的:探讨镁离子对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响及其相关的机制。方法:以成骨诱导培养液(含镁离子0.8 mmol/L)为对照组,在此培养液中依次添加100、200、400μmol/L镁离子作为实验组(Mg 100、200、400μmol/L组)。培养大鼠BMSCs,应用MTT法检测镁离子对细胞代谢活性的影响,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和对-硝基苯磷酸盐法检测细胞ALP蛋白的表达,茜素红染色和半定量分析检测细胞外基质钙盐的沉积情况,实时荧光定量分析检测ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥素(osteopontin,OPN)、BMP-2及镁转运蛋白1(MagT1)基因的相对表达量,激光共聚焦观察OCN、LC3蛋白的表达水平,Western Blot检测OCN蛋白、自噬相关蛋白的表达水平,自噬双标腺病毒转染观察细胞自噬流情况,荧光素酶法检测细胞内ATP浓度。结果:1、4、7 d时,实验组Mg 100、200、400μmol/L对大鼠BMSCs的增殖活性无显著影响(P>0.05);实验组Mg 100、200、400μmol/L ALP染色和茜素红染色较对照组深染,ALP蛋白分泌和ARS基质矿化均较对照组增加,其中Mg 100μmol/L组较对照组有显著性差异(P<0.01);7 d时,实验组Mg 100、200、400μmol/L的ALP、OCN、OPN、BMP-2和MagT1基因相对表达均较对照组上调,其中Mg 200μmol/L组表达量最高(P<0.01);4 d时,实验组Mg 100、200、400μmol/L OCN蛋白免疫荧光染色较对照组均有一定程度增强,其中Mg 200μmol/L组OCN蛋白荧光染色最强;Mg 200μmol/L组LC3蛋白荧光染色增强,呈斑点状分布;4 d时,实验组Mg 100、200、400μmol/L OCN和LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达提高,Mg 200μmol/L组的蛋白条带染色最深、灰度值比最高。1 d时,AdPlus-mCherry-GFP-LC3B转染后Mg 200μmol/L组双荧光共表达成斑点状分布;3、6 d时,实验组Mg 100、200、400μmol/L细胞内ATP浓度较对照组均下降,且差异具有统计学意义(P<0.01),其中Mg 400μmol/L组的细胞内ATP水平最低。结论:生理范围内镁离子浓度增加对BMSCs增殖活性无显著影响,可以提高BMSCs成骨分化、矿化性能,其作用可能与MagT1的表达上调、细胞内ATP水平下降和自噬激活相关。 展开更多
关键词 镁离子 骨髓间充质干细胞 成骨分化 自噬 镁转运蛋白1
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