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胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究 被引量：1
1
作者 刘琛 李兴航 +8 位作者 孟子延 夏志武 年悬悬 龚铮 韩天 闫璐瑶 张家友 刘雄 杨晓明 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第3期158-162,共5页
目的考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞消化效果的影响,并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用。方法选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞,消化5 min后... 目的考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞消化效果的影响,并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用。方法选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞,消化5 min后弃去胰蛋白酶为弃去组,不弃去为保留组。观察消化过程,记录细胞达到不同状态所需的时间。完全消化后,检测细胞的活率、结团率、直径。以不同浓度的胰蛋白酶消化MDCK细胞,按培养基是否添加胎牛血清分为含血清和无血清组,检测细胞活性。结果重组胰蛋白酶消化时间长于动物源胰蛋白酶。保留和弃去组细胞活率均值都大于94.77%,结团率均值均大于34.56%,直径均值分别为17.33和16.97μm且差异有统计学意义(t=4.632,P<0.001)。细胞活性随胰蛋白酶添加量呈现梯度变化。含血清和无血清组的细胞活性差异有统计学意义(t=12.545,P<0.001)。结论5种胰蛋白酶均可完全解离贴壁MDCK细胞,其中重组胰蛋白酶消化时间较长,作用温和,比较适合生产。弃去胰蛋白酶再继续消化的做法可行且有益,胰蛋白酶浓度对细胞活性有影响,胎牛血清可以减轻胰蛋白酶的潜在毒性。 展开更多
关键词 madin-Darby犬肾细胞 传代培养 细胞消化 胰蛋白酶
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稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞的建立及其对凋亡和细胞周期的影响
2
作者 杨迪 黄玲巍 +2 位作者 杨雅雯 乔自林 王家敏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期223-230,共8页
表皮生长因子受体(EGFR)在许多实体肿瘤中过度表达,建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株,有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体,与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞... 表皮生长因子受体(EGFR)在许多实体肿瘤中过度表达,建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株,有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体,与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞中,48 h后提取上清液经纯化获得EGFR基因过表达慢病毒液。将其转染至MDCK细胞中,经嘌呤霉素筛选和单细胞克隆后观察感染效率,RT-qPCR和Western Blot、间接免疫荧光分别检测基因及蛋白的表达,建立EGFR蛋白过表达MDCK细胞株。使用流式细胞仪分别检测过表达及对照细胞株的细胞凋亡和细胞周期。犬EGFR基因位于18号染色体,由编码跨膜糖蛋白的30个外显子组成。经反应体系,PCR产物交换入线性化表达载体,获得了阳性转化子8个,大小为738 bp。所获EGFR基因过表达慢病毒滴度为3.5×10^(8 )TU/mL。转染MDCK细胞后在荧光显微镜下观察荧光效果显著,经检测EGFR基因及其蛋白在细胞中的表达量显著升高。间接免疫荧光试验显示,EGFR在细胞中表达明显增强。过表达细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率显著上升,且在G2/M期发生阻滞。成功建立一株稳定的犬EGFR过表达MDCK细胞株,犬EGFR的过表达催化了细胞分裂,使DNA复制加快,同时刺激了细胞凋亡。 展开更多
关键词 犬肾细胞系 表皮生长因子受体 慢病毒载体
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牛蒡苷元体外抗流感病毒活性 被引量：66
3
作者 高阳 董雪 +3 位作者 康廷国 赵长智 黄智 张效禹 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期724-726,共3页
目的　体外观察牛蒡苷元 (arctigenin,ACT)抗甲 1流感病毒作用 ,为进一步确认 ACT是牛蒡子 Fructusarctii解表功能有效成分提供实验依据。方法　采用 MDCK细胞培养法 ,通过红细胞凝集实验 ,以流感病毒血凝滴度为指标 ,观察 ACT对流感病... 目的　体外观察牛蒡苷元 (arctigenin,ACT)抗甲 1流感病毒作用 ,为进一步确认 ACT是牛蒡子 Fructusarctii解表功能有效成分提供实验依据。方法　采用 MDCK细胞培养法 ,通过红细胞凝集实验 ,以流感病毒血凝滴度为指标 ,观察 ACT对流感病毒复制的抑制作用。结果　 ACT浓度 (m mol/ L )为 6 .7,13.4 ,2 6 .8和 5 3.6的血凝滴度抑制率 (% )分别为 0 .75 ,87.5和 10 0。结论　 ACT在体外有直接抑制流感病毒复制的作用 ,是牛蒡子解表功能的有效成分 ,对其进行含量测定作为牛蒡子质量标准的定量指标是适宜和可行的。 展开更多
关键词 牛蒡苷元 甲1流感病毒 MDCK细胞 血凝滴度 体外观察
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微载体规模化培养MDCK细胞增殖H9N2亚型禽流感病毒的研究 被引量：24
4
作者 李春艳 肖晶 +1 位作者 李曦 刘娣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1149-1153,共5页
目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓... 目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓度TPCK-胰酶、在不同pH值的培养液中培养,接毒后不同时间的病毒血凝素滴度(HA)。根据最佳增殖条件将病毒接种至生长在微载体上的MDCK细胞中,利用250 mL和5L转瓶逐级进行大规模增殖。结果最佳病毒增殖条件为TPCK-胰酶终浓度为10μg/mL,接毒剂量为MOI=0.025,培养液pH值为7.4,在此条件下,H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)适应在250 mL和5L转瓶中微载体培养的MDCK细胞内大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到9log2(1∶512)。结论本研究为以哺乳动物细胞为基质规模化生产禽流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 关键词:微载体 H9N2亚型禽流感病毒 MDCK细胞 规模化培养
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麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代细胞凋亡的影响 被引量：24
5
作者 卢芳国 何迎春 +5 位作者 肖子曾 伍参荣 张薇 申可佳 周兴 周意香 《医学研究生学报》 CAS 2009年第2期185-188,共4页
目的:探讨麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代(MDCK)细胞凋亡的影响。方法:运用原位末端标记技术和流式细胞术分别检测最大无毒限量的麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞凋亡百分率与细胞周期变化的影响。结果:麻杏石甘汤能显... 目的:探讨麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代(MDCK)细胞凋亡的影响。方法:运用原位末端标记技术和流式细胞术分别检测最大无毒限量的麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞凋亡百分率与细胞周期变化的影响。结果:麻杏石甘汤能显著降低A型流感病毒感染的MDCK细胞的凋亡百分率,下调其G1/G0期细胞比例,上调其S期、G2/M期细胞比例以及细胞增殖指数(PI)值。结论:麻杏石甘汤通过调整流感病毒感染的MDCK细胞的细胞周期,降低细胞凋亡百分率而发挥抗流感病毒作用。 展开更多
关键词 麻杏石甘汤 流感病毒 犬肾传代细胞 细胞凋亡 细胞周期
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重组H5N3禽流感疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖条件研究 被引量：14
6
作者 杨涛 刘明 +3 位作者 张云 刘春国 王洪峰 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期199-203,共5页
为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的... 为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的增殖情况。结果表明,在确定的最佳病毒增殖条件下,该重组rH5N3疫苗株在500mL转瓶和10L转瓶中可获得大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到1∶1024。rH5N3疫苗株可以在MDCK细胞中大规模增殖,操作方法简便,成本低廉,该方法为禽流感细胞培养型疫苗的大规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感 细胞培养 MDCK细胞
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松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用研究 被引量：7
7
作者 郑光耀 何玲 +3 位作者 李娇 薄采颖 李海涛 周涛涛 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-643,共3页
目的观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用。方法接种甲型流感病毒于狗肾传代细胞(MD-CK),评价松针叶绿素-胡萝卜素软膏的细胞毒性及体外抗病毒作用。结果松针叶绿素-胡萝卜素软膏对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)为56μ... 目的观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用。方法接种甲型流感病毒于狗肾传代细胞(MD-CK),评价松针叶绿素-胡萝卜素软膏的细胞毒性及体外抗病毒作用。结果松针叶绿素-胡萝卜素软膏对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)为56μg·mL-1,治疗和预防给药方式均有抗甲型流感病毒作用,半数抑制浓度(IC50)分别为30、29μg·mL-1,治疗指数(TI)均为1.9。结论松针叶绿素-胡萝卜素软膏具有明显的抗流感病毒作用,且在安全浓度范围内呈现一定的量效关系,浓度越高抗病毒作用增强。 展开更多
关键词 松针 提取物 甲型流感病毒 MDCK细胞 抗病毒作用
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银黄清肺胶囊含药血清体外抗流感病毒实验研究 被引量：9
8
作者 李湘兰 卢芳国 +4 位作者 易登峰 李玲 范伏元 葛资宇 彭志 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第5期1107-1109,共3页
目的:检测银黄清肺胶囊含药血清体外对A型流感病毒的抑制作用。方法:通过体外培养技术进行MDCK细胞培养,以A型流感病毒株感染狗肾细胞(MDCK细胞),采用中药血清学药理方法[1]及MTT[2-3]法,分预防给药(先加药物)、治疗给药(先加病毒)、及... 目的:检测银黄清肺胶囊含药血清体外对A型流感病毒的抑制作用。方法:通过体外培养技术进行MDCK细胞培养,以A型流感病毒株感染狗肾细胞(MDCK细胞),采用中药血清学药理方法[1]及MTT[2-3]法,分预防给药(先加药物)、治疗给药(先加病毒)、及直接抑制给药(药物病毒同时加入)3种方式测定银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞病变的作用。结果:与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清与利巴韦林片含药血清组,预防、治疗、直接抑制3种给药方式中,A型流感病毒感染MDCK细胞OD值均明显增高(P<0.05);与相应浓度利巴韦林片含药血清组比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞OD值无明显差别(P>0.05)。结论:银黄清肺胶囊含药血清体外可以抑制流感病毒在细胞内增殖。 展开更多
关键词 流感病毒 银黄清肺胶囊 含药血清 MDCK细胞 MTT法
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一叶抗流感胶囊抑制甲型H1N1流感病毒感染的体内外研究 被引量：16
9
作者 郭姗姗 高英杰 +4 位作者 马雪萍 潘昕 金亚宏 崔晓兰 顾正一 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2014年第18期123-127,共5页
目的:研究一叶抗流感胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒的作用。方法:ICR小鼠随机分为对照组、利巴韦林组(0.07 g·kg-1)、抗病毒颗粒组(4.24 g·kg-1)、一叶抗流感胶囊(1.5,0.75,0.38 g·kg-1),采用甲型H1N1流感病毒(FM1,PR8)... 目的:研究一叶抗流感胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒的作用。方法:ICR小鼠随机分为对照组、利巴韦林组(0.07 g·kg-1)、抗病毒颗粒组(4.24 g·kg-1)、一叶抗流感胶囊(1.5,0.75,0.38 g·kg-1),采用甲型H1N1流感病毒(FM1,PR8)滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,治疗给药于感染后连续ig 4 d,预防给药4 d后再感染病毒,计算肺指数、死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率;体外Cytopathic effect(CPE)法观察一叶抗流感胶囊抗流感病毒的作用,犬肾上皮细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞密度为1×105个/mL,药物质量浓度为2.5,1.25,0.62,0.31 g·L-1,作用时间为48 h,每组4个样本。结果:与正常组比较,采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8病毒株感染小鼠后,治疗给药和预防给药下,病毒组肺指数均明显增高,治疗给药组的死亡率分别为90%和90%、预防给药组的死亡率为85%和55%,治疗给药组的平均存活天数分别为9.20 d和9.25 d、预防给药组的平均存活天数分别为9.35,11.60 d;一叶抗流感胶囊高、中剂量组治疗性给药后能明显降低流感病毒FM1株和PR8株感染后小鼠的肺指数(高剂量组1.03±0.28,0.88±0.13;中剂量组1.08±0.14,0.92±0.10);延长平均存活天数[高剂量组(11.05±2.86),(11.20±2.86)d,中剂量组(10.95±2.78)d,(10.90±2.86)d,一叶抗流感胶囊高、中剂量组预防性给药明显延长平均存活天数(11.15±2.30),(11.75±2.24)d。一叶抗流感胶囊在体外对FM1毒株的IC50为0.89 g·L-1,治疗指数为6.75。结论:一叶抗流感胶囊对甲型H1N1流感亚型FM1株体内、体外均有明显的治疗作用;对PR8株仅体内治疗给药有效。 展开更多
关键词 一叶抗流感胶囊 流感病毒 病毒性肺炎 犬肾上皮细胞
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P-糖蛋白高表达马丁达比狗肾上皮细胞系的建立 被引量：8
10
作者 刘瑶 俞春娜 曾苏 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第21期1608-1613,共6页
目的为建立能稳定表达人P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞系,并鉴定其是否适用于药物转运实验。方法将质粒pcDNA3.1(+)/MDR1通过LipofectamineTM2000转染试剂转染犬肾... 目的为建立能稳定表达人P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞系,并鉴定其是否适用于药物转运实验。方法将质粒pcDNA3.1(+)/MDR1通过LipofectamineTM2000转染试剂转染犬肾上皮细胞MDCK,经G418筛选获得抗性克隆。通过P-gp的荧光底物罗丹明(Rhodamine123,Rho123)在各单克隆细胞内的积聚量以及维拉帕米存在时细胞内积聚量检测P-gp的活性。反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)检测人源多药耐药基因1(multidrug resistance1,MDR1)的mRNA和P-gp表达量。应用筛选出的MDCK-MDR1单克隆细胞株,研究了Rho123在MDCK和MDCK-MDR1(Madin-Darby canine kidney/multidrug resistance1)细胞中的转运及4种经典抑制剂(维拉帕米、环孢素、酮康唑和奎宁)对Rho123转运的抑制特性。结果RT-PCR和Western blot检测表明,所建立的MDCK-MDR1细胞与MDCK细胞相比,经转染后MDCK细胞内的MDR1的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和P-gp表达发生从无到有的变化。Rho123在MDCK和MDCK-MDR1中的外排系数分别是5.94和15.45,抑制剂能显著地抑制细胞外排作用。结论转染后的细胞高表达P-gp,适用于研究药物的肠道和血脑屏障转运实验。 展开更多
关键词 马丁达比狗肾上皮细胞 多药耐药基因1 P-糖蛋白 转运 外排
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薄荷-荆芥不同配伍组分体外抗流感病毒作用研究 被引量：10
11
作者 束雅春 王海丹 +3 位作者 朱萱萱 孙其然 李伟东 陆兔林 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2021年第10期16-20,I0014,I0015,共7页
目的检测薄荷-荆芥不同配伍组分含药血清体外对甲型流感病毒的抑制作用。方法通过含药血清对MDCK细胞毒性的测定,计算含药血清的最大无毒剂量;通过CPE法测定甲型流感病毒TCID_(50),采用Reed-Muench氏法计算甲型流感病毒的TCID_(50),对... 目的检测薄荷-荆芥不同配伍组分含药血清体外对甲型流感病毒的抑制作用。方法通过含药血清对MDCK细胞毒性的测定,计算含药血清的最大无毒剂量;通过CPE法测定甲型流感病毒TCID_(50),采用Reed-Muench氏法计算甲型流感病毒的TCID_(50),对流感病毒感染性进行测定;再运用MTT法观察薄荷-荆芥不同组分配伍组合含药血清对甲型流感病毒增殖的抑制作用。结果以薄荷挥发油-薄荷黄酮-荆芥黄酮、荆芥挥发油-薄荷黄酮-荆芥黄酮、薄荷挥发油-荆芥挥发油-荆芥黄酮不同比例配伍组分对病毒增殖的抑制作用最为明显。结论薄荷-荆芥不同配伍组分含药血清体外可以抑制流感病毒在细胞内增殖,由此可证实薄荷-荆芥作为核心药对,其不同组分配伍具有确切的抗流感病毒作用。 展开更多
关键词 薄荷 荆芥 流感病毒 含药血清 MDCK细胞 MTT法
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犬肾细胞MDCK无血清贴壁及单细胞悬浮培养 被引量：16
12
作者 黄锭 赵亮 谭文松 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期645-652,共8页
近年来,因病毒侵害人类每年都要蒙受巨大的经济损失和社会损失。犬肾细胞MDCK以其具有的培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点,成为适用于流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。以MDCK细胞为研究对象,在自制无血清培养基中成功实现... 近年来,因病毒侵害人类每年都要蒙受巨大的经济损失和社会损失。犬肾细胞MDCK以其具有的培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点,成为适用于流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。以MDCK细胞为研究对象,在自制无血清培养基中成功实现了MDCK细胞从有血清培养到无血清培养的驯化;并通过单细胞悬浮培养驯化过程实现了MDCK细胞的无血清单细胞悬浮培养,获得了适于无血清单细胞悬浮生长的ssf-MDCK细胞株,无血清单细胞悬浮批培养最大活细胞密度可达3.81×106 cells/mL,最大比生长速率可达0.056 h?1,分别较有血清贴壁培养提高了3.6和1.6倍。此外,通过比较有血清贴壁培养、无血清贴壁培养和无血清单细胞悬浮培养三种体系中MDCK细胞的生长和基本代谢情况发现:无血清培养过程细胞生长快,代谢副产物产率低,尤其是单细胞悬浮培养方式能获得较高的细胞密度,更有利于大规模生产。该结果为MDCK细胞培养过程的优化和放大奠定了基础,也为其他动物细胞培养过程和疫苗等生物制品的工业化生产提供了借鉴。 展开更多
关键词 MDCK细胞 无血清培养基 单细胞悬浮培养
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2种不同方法制备六味地黄丸的对比研究 被引量：7
13
作者 詹冬华 郑捷 +2 位作者 陈佳 罗佩霞 许韩翰 《中南药学》 CAS 2009年第7期515-518,共4页
目的比较制丸机-微波干燥法与泛丸法-烘箱法制备六味地黄丸的质量。方法以丸的重量差异、崩解时限、马钱苷的含量及溶出度为指标,比较2种方法制备六味地黄丸的质量。结果制丸机-微波干燥法制备的六味地黄丸含量高、崩解时限短、重量差... 目的比较制丸机-微波干燥法与泛丸法-烘箱法制备六味地黄丸的质量。方法以丸的重量差异、崩解时限、马钱苷的含量及溶出度为指标,比较2种方法制备六味地黄丸的质量。结果制丸机-微波干燥法制备的六味地黄丸含量高、崩解时限短、重量差异更易于控制。结论采用制丸机-微波干燥法制的六味地黄丸的质量优于泛丸法-烘箱法制备六味地黄丸的质量,过程简单可控。 展开更多
关键词 六味地黄丸 制丸机-微波干燥法(Z法) 泛丸法-烘箱法(F法) 崩解时限 马钱苷 溶出度 重量差异
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番茄红素对赭曲霉毒素A诱导犬肾小管上皮细胞毒性损伤的缓解作用 被引量：3
14
作者 赵杰 周天红 +5 位作者 刘选辉 冯士彬 辜丽川 李玉 吴金节 王希春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期587-596,共10页
[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell,MDCK)为模型,研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene,LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol... [目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell,MDCK)为模型,研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene,LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L^(-1) OTA)、LYC组(55μmol·L^(-1) LYC)、O+L组(15μmol·L^(-1) OTA+55μmol·L^(-1) LYC),处理36 h,研究OTA对MDCK细胞结构、细胞凋亡、肾功能相关指标、氧化与抗氧化、炎性因子等指标的影响,并探讨LYC在OTA致MDCK损伤中的缓解作用。[结果]OTA作用导致细胞发生明显皱缩,细胞数量骤减;电镜结果显示OTA能够导致细胞膜破裂、细胞器出现不同程度损伤,MDCK中乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)水平与丙二醛(MDA)含量极显著增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);细胞中肾功能相关指标N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾损伤分子1(KIM-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)均极显著升高(P<0.01);同时极显著增加了MDCK的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素6(IL-6)、干扰素18(IL-18)及干扰素1β(IL-1β)的水平(P<0.01);OTA可诱导MDCK凋亡率极显著升高(P<0.01);而LYC能够有效减缓OTA造成的损伤,LYC组与OTA处理组相比形态较饱满,细胞间衔接紧密,细胞凋亡率显著下降;LDH、ROS、MDA水平(含量)降低,SOD、CAT、GSH-Px活性升高,并降低炎性细胞因子的表达。[结论]OTA能够抑制MDCK活性,改变细胞形态,导致肾功能指标、氧化与抗氧化功能与细胞炎性因子异常,加快细胞凋亡;LYC能够显著缓解OTA对MDCK的损伤。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 番茄红素 犬肾小管上皮细胞 细胞损伤
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抗微小隐孢子虫单克隆抗体免疫保护作用的研究 被引量：2
15
作者 宗海红 李为明 +2 位作者 张雪 俞树荣 白班俊 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期101-105,共5页
目的：探讨抗隐孢子虫单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫保护作用。方法：在细胞培养的基础上进行体外中和试验，筛选具有保护作用的ＭｃＡｂ，并通过大鼠及ＭＤＣＫ细胞接种隐孢子虫子孢子（ＣＰＳ）进行动物实验和受染ＭＤＣＫ细胞透射电... 目的：探讨抗隐孢子虫单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫保护作用。方法：在细胞培养的基础上进行体外中和试验，筛选具有保护作用的ＭｃＡｂ，并通过大鼠及ＭＤＣＫ细胞接种隐孢子虫子孢子（ＣＰＳ）进行动物实验和受染ＭＤＣＫ细胞透射电镜观察证实。结果：Ｚ３Ｄ２可显著降低ＣＰＳ在大鼠肠粘膜表面定植的隐孢子虫虫体及卵囊数。可使隐孢子虫各发育期的虫体减少，使ＭＤＣＫ细胞的超微结构受损减轻。结论∶ＭｃＡｂＺ３Ｄ２具有良好的保护作用。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 MDCK细胞 单克隆抗体 免疫预防
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鹿茸中促肾上皮细胞增殖蛋白的分离纯化与表征 被引量：2
16
作者 谢云 张晨 +1 位作者 郭春腾 饶平凡 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期137-141,共5页
采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,M... 采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,MDCK细胞的增殖效果最佳,达73.02%. 展开更多
关键词 鹿茸 蛋白 肾上皮细胞 纯化 表征
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不同代次MDCK细胞对流感病毒的敏感性比较 被引量：7
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作者 杨慧萍 刘李 +2 位作者 马小珍 潘明 李天舒 《预防医学情报杂志》 CAS 2012年第11期890-892,共3页
目的比较不同代次的狗肾传代(MDCK)细胞对流感病毒的敏感性差异。方法选择生长状态及形态良好的、不同代次的MDCK细胞,在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本,观察细胞病变,细胞收获后采用血凝试验测定病毒血凝效价和分离率;以... 目的比较不同代次的狗肾传代(MDCK)细胞对流感病毒的敏感性差异。方法选择生长状态及形态良好的、不同代次的MDCK细胞,在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本,观察细胞病变,细胞收获后采用血凝试验测定病毒血凝效价和分离率;以参考流感病毒株测定TCID50值,比较不同代次MDCK细胞对流感病毒的敏感性。结果 3个不同代次的MDCK细胞对流感样病例标本的分离阳性率、血凝效价相比差异无统计学意义,且3者TCID50值相比,相差不超出1个Lg。结论在相同实验条件以及细胞生长状态和形态良好的情况下,不同代次的MDCK细胞对流感病毒的敏感性无差异。 展开更多
关键词 MDCK细胞 细胞代次 流感病毒 敏感性
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羌银解热汤治疗流行性感冒的基础研究 被引量：2
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作者 林棉 张奉学 +3 位作者 柯昌文 缪英年 吴志光 李亮 《中华中医药学刊》 CAS 2009年第7期1400-1402,共3页
目的:研究羌银解热汤对小鼠感染甲1型流感病毒FM1株的抑制作用和对小鼠的保护作用;观察羌银解热汤对感染H3N2型人流感病毒的狗肾传代细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)的保护作用以及该汤药对H3N2型人流感病毒的直接灭活作用。方法... 目的:研究羌银解热汤对小鼠感染甲1型流感病毒FM1株的抑制作用和对小鼠的保护作用;观察羌银解热汤对感染H3N2型人流感病毒的狗肾传代细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)的保护作用以及该汤药对H3N2型人流感病毒的直接灭活作用。方法:利用甲1型流感病毒FM1株感染小鼠为动物模型,观察羌银解热汤在小鼠体内的抗流感病毒作用,并与银翘散汤剂、荆防败毒散汤剂作以对比。用H3N2型人流感病毒感染体外培养成单层生长的MDCK细胞,观察羌银解热汤体外抗流感病毒的作用。结果:羌银解热汤可以有效抑制病毒引起的小鼠肺部病变、降低肺指数(P<0.05),改善小鼠组织病理变化,提高对感染流感病毒小鼠的死亡保护率(P<0.05),降低流感病毒诱导的血清干扰素IFN-α水平,其效果优于银翘散汤剂、荆防败毒散汤剂。体外实验显示羌银解热汤对H3N2型人流感病毒并无直接灭活作用,对MDCK细胞的保护作用并不明显。结论:实验结果表明羌银解热汤具有良好的体内抗流感病毒感染作用,其作用机理不能用该汤药的直接灭活流感病毒来解释。 展开更多
关键词 流感病毒 中药治疗 实验研究 狗肾传代细胞(MDCK细胞)
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稳定表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建 被引量：2
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作者 涂美娟 陈忠坚 +4 位作者 孙思源 石爱琴 李丽萍 曾苏 蒋惠娣 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第20期1546-1551,共6页
目的建立能稳定表达人有机阳离子转运体1(human organic cation transporter1,hOCT1)野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞模型。方法从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1P341L,... 目的建立能稳定表达人有机阳离子转运体1(human organic cation transporter1,hOCT1)野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞模型。方法从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1P341L,hOCT1M420del两个突变型基因,构建表达质粒pcDNA3.1(+)-hOCT1,pcDNA3.1(+)-hOCT1P341L,pcDNA3.1(+)-hOCT1M420del。将质粒转染MDCK细胞,通过G418筛选获得抗性克隆,并通过hOCT1的荧光底物(4-二甲氨基苯乙烯基)-N-甲基吡啶(ASP+)筛选得到具有较高活性的MDCK-hOCT1细胞。经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及经典底物N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的摄取实验,鉴定筛选得到的单克隆细胞株hOCT1 mRNA的表达及功能。结果本实验获得的hOCT1野生型及2个突变体细胞模型与转染空载体的MDCK细胞相比,其hOCT1 mRNA表达量显著增高,对经典底物MPP+的摄取为转染空载体细胞的12.5,13.7,12.0倍,hOCT1抑制剂可显著抑制细胞对MPP+的摄取。结论建立的细胞模型可用于hOCT1抑制剂及底物的筛选。 展开更多
关键词 人有机阳离子转运体1 马丁达比狗肾上皮细胞 基因多态性 细胞模型
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伪狂犬病病毒Ea株诱导牛肾细胞凋亡及核基质蛋白的变化 被引量：2
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作者 李祥敏 钱平 +3 位作者 陈焕春 郭东春 徐卓菲 金梅林 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期163-167,共5页
目的　研究伪狂犬病病毒(PrV)是否具有诱导组织培养细胞发生细胞凋亡的功能及探讨凋亡细胞核 基质蛋白表达的变化。　方法　利用锥虫蓝(台盼蓝)染色绘制PrV在不同细胞上的增殖曲线;荧光染色观察凋亡 细胞核的形态特征;琼脂糖凝胶电... 目的　研究伪狂犬病病毒(PrV)是否具有诱导组织培养细胞发生细胞凋亡的功能及探讨凋亡细胞核 基质蛋白表达的变化。　方法　利用锥虫蓝(台盼蓝)染色绘制PrV在不同细胞上的增殖曲线;荧光染色观察凋亡 细胞核的形态特征;琼脂糖凝胶电泳分析细胞染色体DNA的片段化;高分辨率双向电泳分析细胞凋亡前后核基质 蛋白的表达差异。　结果　膜通透性的DNA特异性结合染料Hoechst33342染色显示,PrV感染后36h,牛肾 (MDBK)细胞核染色质开始固缩、凝聚,细胞核碎裂;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析表明,细胞染色体DNA发生 片段化,形成“DNA梯状”条带(DNAladder);尽管PrV可以诱导MDBK细胞发生细胞凋亡,但不能诱导IBRS 2,BHK 21及PK 15细胞发生凋亡。MDBK细胞发生凋亡前后核基质蛋白的表达发生改变,存在表达上调、下调、诱导表达 及表达遏制等情况。　结论　PrV诱导细胞发生细胞凋亡是其致细胞死亡的形式之一,间接反映了PrV与宿主细 胞间复杂的相互作用。细胞凋亡前后核基质蛋白表达存在的差异说明PrV致MDBK细胞发生凋亡是自身基因产 物或诱导或抑制宿主细胞基因表达的结果。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 牛肾细胞 细胞凋亡 核基质蛋白 双向电泳
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