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题名茎瘤芥(榨菜叶)中硫苷酶基因的酶活性研究
被引量：4
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作者
张燕
李瑶
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机构
长江师范学院生命科学与技术学院
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出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2017年第4期744-749,共6页
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基金
重庆市教委项目"茎瘤芥(榨菜)中硫苷生成异硫氰酸酯酶解条件优化及抗肿瘤的体外试验研究"(KJ1601223)
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文摘
【目的】异硫代氰酸盐(Isothiocyanates,ITCs)具有抗癌和植物杀虫剂的作用,为解决天然硫苷酶提取复杂、费用昂贵等问题,【方法】本研究采用RT-PCR法扩增硫苷酶的关键基因MYR1,通过构建硫苷酶表达载体,并在毕赤酵母中进行体外诱导表达,以获得外源硫苷酶。将从榨菜叶中提取的总RNA,通过Sal I酶切,插入p PIC9K-S表达载体构建重组子。在YPD培养基中菌体悬浮培养至OD600为1左右,更换BMMY培养基进行诱导表达72 h。【结果】提取菌液进行SDS-PAGE电泳检测分析,发现表达蛋白的分子量为90 KDa左右,经诱导表达,Ni柱纯化后,得到纯度为85%的硫苷酶融合蛋白,产率约850 U/L。硫苷酶融合蛋白以sinigrin为底物,运用HPLC测得蛋白的比活力约等于0.003 U/μl。【结论】采用在毕赤酵母中进行体外诱导表达,以获得外源硫苷酶,对硫苷酶活性最佳条件进行筛选和确认,为扩增和签定硫苷酶活性等技术提供重要参考。
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关键词
myr1
硫苷酶
质粒构建
表达
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Keywords
myr1
Myrosinase
Plasmid build
Expression
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分类号
S637.3
[农业科学—蔬菜学]
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