背景:鼻黏膜纤毛上皮细胞受损后导致鼻黏膜生物功能严重创伤。相对于其他成体干细胞,人脐血干细胞具有更好的诱导分化潜能。目的:观察人脐血干细胞通过体外培养、诱导分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的可行性。方法:收集正常健康人脐血,分离...背景:鼻黏膜纤毛上皮细胞受损后导致鼻黏膜生物功能严重创伤。相对于其他成体干细胞,人脐血干细胞具有更好的诱导分化潜能。目的:观察人脐血干细胞通过体外培养、诱导分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的可行性。方法:收集正常健康人脐血,分离人脐血干细胞,通过体外培养,鉴定干细胞表面标记物后进行传代培养;取第3代脐血干细胞,用携带增强型绿色荧光蛋白重组腺相关病毒进行感染,采用气液界面培养法,分别于诱导感染1,2周后对干细胞进行MUC8基因PCR检测。在脐血干细胞培养3周后进行FOXJ1免疫荧光染色。结果与结论:(1)培养鉴定结果:原代人脐血干细胞传代至第3代时,细胞形态较均一,折光性良好,可表达干细胞表面标记物;(2)转染鉴定结果:细胞转染3 h后,可见第3代干细胞呈现出绿色荧光,培养48 h后,流式细胞仪检测细胞阳性率达96.2%,说明干细胞转染效果很好;(3)RT-PCR检测:人脐血干细胞MUC8 m RNA无表达,而鼻黏膜上皮细胞MUC8 m RNA呈现出强表达,培养1周时MUC8mRNA呈现弱表达,培养2周后有一定的增强;(4)免疫荧光染色:在转染的绿色荧光蛋白背景下可观测到FOXJ1红色荧光呈现阳性表达结果;(5)结果说明:人脐血干细胞在适宜培养条件下可分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞。展开更多
文摘背景:鼻黏膜纤毛上皮细胞受损后导致鼻黏膜生物功能严重创伤。相对于其他成体干细胞,人脐血干细胞具有更好的诱导分化潜能。目的:观察人脐血干细胞通过体外培养、诱导分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的可行性。方法:收集正常健康人脐血,分离人脐血干细胞,通过体外培养,鉴定干细胞表面标记物后进行传代培养;取第3代脐血干细胞,用携带增强型绿色荧光蛋白重组腺相关病毒进行感染,采用气液界面培养法,分别于诱导感染1,2周后对干细胞进行MUC8基因PCR检测。在脐血干细胞培养3周后进行FOXJ1免疫荧光染色。结果与结论:(1)培养鉴定结果:原代人脐血干细胞传代至第3代时,细胞形态较均一,折光性良好,可表达干细胞表面标记物;(2)转染鉴定结果:细胞转染3 h后,可见第3代干细胞呈现出绿色荧光,培养48 h后,流式细胞仪检测细胞阳性率达96.2%,说明干细胞转染效果很好;(3)RT-PCR检测:人脐血干细胞MUC8 m RNA无表达,而鼻黏膜上皮细胞MUC8 m RNA呈现出强表达,培养1周时MUC8mRNA呈现弱表达,培养2周后有一定的增强;(4)免疫荧光染色:在转染的绿色荧光蛋白背景下可观测到FOXJ1红色荧光呈现阳性表达结果;(5)结果说明:人脐血干细胞在适宜培养条件下可分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞。
