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MT1DP通过调控Cav1.3促进镉诱发的细胞死亡效应
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作者 李长英 黄小莉 丛敏 《临床和实验医学杂志》 2019年第13期1345-1349,共5页
目的检测重金属镉暴露下长链非编码RNA MT1DP对钙内流和胞内镉摄入的影响,并探讨其分子机制。方法首先采用特异性钙通道抑制剂维拉帕米(VER)处理HepG2细胞,然后采用钙离子荧光探针Fluo-3AM检测镉对细胞钙流的影响,并使用电感耦合等离子... 目的检测重金属镉暴露下长链非编码RNA MT1DP对钙内流和胞内镉摄入的影响,并探讨其分子机制。方法首先采用特异性钙通道抑制剂维拉帕米(VER)处理HepG2细胞,然后采用钙离子荧光探针Fluo-3AM检测镉对细胞钙流的影响,并使用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定胞内镉的含量;采用Real-timeqPCR检测镉对细胞内MT1DP表达水平的影响;采用shRNA敲低胞内MT1DP含量后检测其对镉暴露下胞内镉摄入量的影响;采用qPCR和Western blotting检测镉暴露下MT1DP对钙通道蛋白Cav1.3mRNA和蛋白表达水平的影响;采用siRNA敲低Cav1.3含量后检测镉暴露下其对细胞钙流、胞内镉的摄入量和细胞死亡效应的影响;最后采用AKT通路抑制剂检测镉暴露下AKT对Cav1.3表达水平的影响,并且过表达AKT后检测其对Cav1.3表达水平和胞内镉摄入量的影响。结果钙通道被抑制后细胞镉的摄入明显减少,在镉的暴露下肝癌细胞内MT1DP的表达显著增加,而当抑制MT1DP的表达水平后,镉诱发的胞内镉的摄入也显著降低;同时,抑制MT1DP可以降低镉暴露后细胞内Cav1.3基因和蛋白表达水平。当抑制Cav1.3的蛋白表达水平时,镉诱发的钙内流、胞内镉的摄入和细胞死亡效应也都显著降低。此外,抑制AKT的表达可以抑制Cav1.3的表达水平,而当细胞内过表达AKT后,镉暴露下Cav1.3的诱导表达水平和镉诱发的胞内镉摄入也显著增加。结论MT1DP可以通过活化AKT/Cav1.3信号通路促进钙内流和胞内镉摄入,最终诱发细胞死亡。 展开更多
关键词 镉 mt1dp Cav1.3 细胞死亡
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