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Virucidal Efficacy of Chlorine Dioxide Interventions on MS2 Phage Bioaerosol in a Laboratory Chamber
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作者 Shawn Jones George Lukasik +1 位作者 Jeffrey Driver Raymond Harbison 《Occupational Diseases and Environmental Medicine》 2022年第3期206-216,共11页
The ongoing SARS-CoV-2 outbreak has rapidly increased the desire to manage bioaerosol exposures in indoor settings. Studies using chlorine dioxide gas (ClO<sub>2</sub>) at low concentrations have shown thi... The ongoing SARS-CoV-2 outbreak has rapidly increased the desire to manage bioaerosol exposures in indoor settings. Studies using chlorine dioxide gas (ClO<sub>2</sub>) at low concentrations have shown this intervention to be an effective mitigation strategy against viral, bacterial, and fungal elements in ambient air. There is an array of available products for generating ClO<sub>2</sub> gas however most involve the use of expensive or sophisticated technology that makes their applicability limited to specialized consumers. The purpose of this study was to determine the virucidal efficacy of three pragmatic and affordable, ClO<sub>2</sub> generating products using an aerosolized MS2 surrogate in a sealed chamber room under five different scenarios. The products tested included: Ultrashock—a ClO<sub>2</sub> releasing pod (30 ppmv), Filter Media—a ClO<sub>2</sub> impregnated zeolite media made to fit into an air blower housing (<0.01 ppmv) and Flow Stick—a smaller ClO<sub>2</sub> impregnated media filled air reactor tube (<0.01 ppmv). Testing scenarios included product deployment post MS2 bioaerosol introduction (Ultrashock and Filter Media), during MS2 bioaerosol introduction (Filter Media and Flow Stick) and prior to MS2 bioaerosol introduction (Filter Media). MS2 surface samples were collected using sterile petri-dishes and MS2 and ClO<sub>2</sub> air samples were collected from sampling ports on the outer chamber wall at 0, 90 and 180 minutes. The Ultrashock and Filter Media with air flow in the rapid sweep scenario showed the greatest reduction in air MS2 (T<sub>180</sub> = 99.992% and T<sub>180</sub> = 99.996% respectively) compared to the control (T<sub>180 </sub>= 99.6%). When compared to the control results, the filter media with air flow engaged prior to the introduction of MS2 yielded reductions of 99.87% and 99.93% in air and on surfaces respectively at T<sub>0</sub>, demonstrating the protective effect residual ClO2 has against air and surface contamination. These product formats have potential uses as remedial and preventative interventions against viral constituents in air and should undergo further evaluation to determine efficacy and human health risk. 展开更多
关键词 Virucidal Activity Chlorine Dioxide ms2 phage BIOAEROSOLS
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基于MS2噬菌体的小反刍兽疫装甲RNA质控品的研制
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作者 刘丹 李慧彤 +8 位作者 张博源 高建帅 蒋卉 范学政 张广智 郜卫华 丁家波 熊涛 沈青春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期43-51,共9页
为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装... 为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装甲RNA质控品,并对其进行电子显微镜观察、定量、耐核酸酶检验、均匀性和稳定性检验,以评估其作为标准物质的可能性。结果显示,p ET-CPA-PPR经诱导表达和纯化后形成直径为23~28 nm、大小均一、已包封PPRV检测靶标基因N的装甲RNA颗粒,浓度为2.24×10^(9)copies/μL,可以有效抵抗核酸酶降解作用,均匀性良好且在(37±1)℃条件下可稳定保存至少30 d。结果表明,基于MS2噬菌体制备的PPRV装甲RNA拷贝数高,均匀性和稳定性良好,能够为PPRV核酸检测提供安全可靠的标准化参考物质。 展开更多
关键词 小反刍兽疫(PPR) ms2噬菌体 装甲RNA 病毒样颗粒
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基于MS2噬菌体病毒样颗粒的新型冠状病毒变异株质控品的制备
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作者 赵冉 陈颖玮 +3 位作者 储呈祥 黄中强 丁玮洁 王雪亮 《临床检验杂志》 2025年第10期773-779,共7页
目的基于MS2噬菌体病毒样颗粒(VLP)技术,通过优化其生产纯化工艺制备多种新型冠状病毒变异株检测质控品并对其性能进行评价,以作为实验室检测变异株时常规新型冠状病毒核酸检测质控品的补充。方法根据病毒变异株基因组信息分别设计并合... 目的基于MS2噬菌体病毒样颗粒(VLP)技术,通过优化其生产纯化工艺制备多种新型冠状病毒变异株检测质控品并对其性能进行评价,以作为实验室检测变异株时常规新型冠状病毒核酸检测质控品的补充。方法根据病毒变异株基因组信息分别设计并合成各典型突变序列片段或S基因全长,插入至MS2噬菌体成熟酶基因、外壳蛋白及包装位点下游,构建系列重组表达载体。经原核表达系统诱导表达后,产物通过聚乙烯亚胺沉淀、超滤、核酸酶消化、凝胶过滤层析等方式纯化。通过核酸电泳、蛋白质电泳、蛋白质浓度检测、荧光PCR等技术对制备的VLP进行验证以及核酸残留、稳定性等性能评价。结果制备得到10种含有待测基因靶序列的VLP,其包裹的外源序列长度为297 bp至3822 bp,可组合成多种新型冠状病毒变异株突变检测质控品。制备的VLP质控品在不进行常规核酸检测过程中核酸提取或未反转录步骤时不能有效扩增;模拟质控品样本多次反复冻融后稳定,在25℃条件下可稳定保存2个月,37℃条件下稳定保存4周。结论建立的VLP质控品制备及组合纯化工艺可将多种不同长度外源核酸序列包裹进病毒蛋白外壳形成VLP,生产效率高;通过该工艺制备的VLP质控品几乎无外源核酸残留,性能稳定,能够有效满足临床使用需求,保障实验室检测质量。 展开更多
关键词 新型冠状病毒变异株 ms2噬菌体 病毒样颗粒 质控品 蛋白质纯化
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MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究 被引量:8
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作者 董艳美 张国广 +2 位作者 汪卫 范红军 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期237-243,共7页
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli... 研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景. 展开更多
关键词 口蹄疫 ms2噬菌体 抗原决定簇 类病毒颗粒
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基于MS2噬菌体病毒样颗粒的RT-PCR检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)质控品制备 被引量:9
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作者 王国强 于茵茵 +8 位作者 曾华辉 王旭东 吴玉彬 尚立芝 李玉林 张怡青 张西西 张振强 王云龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期31-40,共10页
目的:制备热稳定性好、耐RNase攻击及可全程监控操作的核酸检测新型冠状病毒阳性质控品。方法:分别扩增MS2噬菌体外壳蛋白CP(含PAC位点)基因以及成熟酶蛋白A基因序列(含核糖体结合位点),先后插入质粒pET28a多克隆位点不同位置,构建通用... 目的:制备热稳定性好、耐RNase攻击及可全程监控操作的核酸检测新型冠状病毒阳性质控品。方法:分别扩增MS2噬菌体外壳蛋白CP(含PAC位点)基因以及成熟酶蛋白A基因序列(含核糖体结合位点),先后插入质粒pET28a多克隆位点不同位置,构建通用重组载体pET28a/CP-A。合成包含ORF1ab基因、N基因和E基因三个靶标的特定核酸序列,插入到重组载体pET28a/CP-A中PAC位点的下游,构建包含靶序列的重组载体pET28a/CP-A/S。通过原核表达系统表达目的蛋白,采用硫酸铵和凝胶过滤层析进行纯化,利用透射电镜和动态光散射对蛋白质进行物理表征。全能核酸酶消化形成的盔甲RNA,通过RT-PCR检测其残余核酸和热稳定性。结果:成功构建包含MS2噬菌体外壳蛋白CP基因、成熟酶蛋白A基因和外源靶核酸的重组载体,目的蛋白在25℃、IPTG 0.3mmol/L、诱导14h时以可溶性形式得到高效表达,纯化后,得到了大小均一、直径为23~28nm的病毒样颗粒,经核酸酶消化后RT-PCR检测,颗粒溶液中几乎无核酸残余且形成了包封靶基因的盔甲RNA。加速破坏试验表明该盔甲RNA无菌过滤后可在37℃稳定保持10天。结论:在体外,利用MS2噬菌体外壳蛋白和成熟酶蛋白自组装包封外源靶序列制备的盔甲RNA,其热稳定性好,可全程监控整个检测过程,可作为核酸检测SARS-CoV-2的定性或定量质控品。 展开更多
关键词 新型冠状病毒(2019) ms2噬菌体 盔甲RNA 病毒样颗粒
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7种不同成分消毒剂对MS2噬菌体杀灭效果的比较 被引量:2
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作者 李宇 葛振鸣 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期161-167,共7页
以MS2噬菌体为指示微生物,检验了7种不同成分的消毒剂(双氧水、乙醇、发酵乳酸消毒剂、络合碘消毒剂、复合季铵盐消毒剂、含氯消毒剂和过氧乙酸消毒剂)对噬菌体的杀灭效果.结果表明,被广泛使用的消毒剂对病毒杀灭的效果差异较大.络合碘... 以MS2噬菌体为指示微生物,检验了7种不同成分的消毒剂(双氧水、乙醇、发酵乳酸消毒剂、络合碘消毒剂、复合季铵盐消毒剂、含氯消毒剂和过氧乙酸消毒剂)对噬菌体的杀灭效果.结果表明,被广泛使用的消毒剂对病毒杀灭的效果差异较大.络合碘消毒剂具有最强的杀灭作用,其次为复合季铵盐消毒剂和过氧乙酸消毒剂,而双氧水、乙醇和发酵乳酸消毒剂的杀灭效果较差.该试验结果可为合理配置消杀环境中有害微生物的消毒剂提供参考依据. 展开更多
关键词 消毒剂 ms2噬菌体 杀灭率 灭活对数值
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紫外活化过硫酸钠灭活水中噬菌体MS2的特性及机制 被引量:1
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作者 张崇淼 杨昊明 王真 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第10期4807-4814,共8页
水环境中的病毒对常见的消毒技术有较强的抵抗力.为了开发水中病毒的高效灭活技术,以噬菌体MS2为对象,研究紫外活化过硫酸钠(UV/PS)体系灭活病毒的特性和机制.采用双层平板法对噬菌体MS2进行定量检测,研究UV/PS对水样中噬菌体MS2的灭活... 水环境中的病毒对常见的消毒技术有较强的抵抗力.为了开发水中病毒的高效灭活技术,以噬菌体MS2为对象,研究紫外活化过硫酸钠(UV/PS)体系灭活病毒的特性和机制.采用双层平板法对噬菌体MS2进行定量检测,研究UV/PS对水样中噬菌体MS2的灭活率和动力学特征,并考察PS用量、pH值和噬菌体初始浓度等因素对灭活效果的影响.利用透射扫描电镜观察UV/PS处理前后噬菌体的形貌,利用电子顺磁共振波谱法确认反应体系中存在的自由基种类.在自由基淬灭实验的基础上,分析计算UV/PS体系中各因素对噬菌体灭活的贡献率.结果表明,当紫外辐照强度为160μW·cm^(-2)时,UV/PS处理4min即可去除4.39 lg的噬菌体MS2,较单独使用同样辐照剂量的UV消毒灭活率高1.44 lg.UV/PS体系对噬菌体MS2的灭活动力学过程符合一级反应动力学模型.增加体系中的PS初始浓度能明显提高对噬菌体的灭活率和灭活速率,而pH和噬菌体初始浓度对UV/PS灭活噬菌体的影响较小.UV/PS处理可导致噬菌体的衣壳破损,促进了噬菌体颗粒团聚.UV/PS体系中存在SO_(4)^(-)·和·OH,是噬菌体MS2灭活的重要因素.·OH比SO_(4)^(-)·对噬菌体MS2灭活的贡献更大. 展开更多
关键词 紫外活化 过硫酸钠 噬菌体ms2 灭活 自由基
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MS2噬菌体介导展示猪繁殖与呼吸综合征病毒线性表位的嵌合纳米颗粒制备及免疫原性
8
作者 王国强 李欣欣 +5 位作者 苏运芳 曾华辉 马红芳 刘保光 尚立芝 张振强 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期618-625,共8页
【目的】以MS2噬菌体外壳蛋白为载体,构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白上线性表位的嵌合纳米颗粒,并研究其免疫原性,为猪繁殖与呼吸综合征病毒或其他病毒表位展示提供新的方法和思路。【方法】利用重叠延伸PCR将GP5上优势线性表... 【目的】以MS2噬菌体外壳蛋白为载体,构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白上线性表位的嵌合纳米颗粒,并研究其免疫原性,为猪繁殖与呼吸综合征病毒或其他病毒表位展示提供新的方法和思路。【方法】利用重叠延伸PCR将GP5上优势线性表位基因序列插入到MS2噬菌体外壳蛋白基因上,构建重组载体,通过原核表达系统表达嵌合蛋白,目的蛋白经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析纯化,用动态光散射和电镜对嵌合蛋白进行物理表征,通过蛋白印迹和动物免疫试验研究表位嵌合颗粒的免疫原性。【结果】成功将线性表位基因插入MS2噬菌体外壳蛋白基因,嵌合蛋白在原核表达系统中以水溶性表达,目的蛋白经过纯化,纯度达85%以上。嵌合蛋白在体外自组装形成了均一的、直径为25~31 nm的嵌合表位纳米颗粒,该嵌合颗粒免疫动物后,产生可以和灭活病毒反应的高水平抗体,具有良好的免疫原性。【结论】MS2噬菌体外壳蛋白可以耐受9个外源多肽(猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5上线性表位)的插入,在体外自组装形成嵌合病毒样颗粒。该颗粒将外源多肽高密度展示在表面,免疫动物可产生针对该表位的抗体。该技术可为猪繁殖与呼吸综合征病毒其他表位或更长串联表位的展示奠定基础。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 线性表位 嵌合纳米颗粒 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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蓝紫光对MS2噬菌体和指示菌杀灭效果及影响因素的研究
9
作者 刘雪 董新燕 +1 位作者 张翔凌 王国庆 《中国消毒学杂志》 CAS 2020年第11期801-804,808,共5页
目的研究波长405 nm蓝紫光对MS2噬菌体及相关指示菌的杀灭效果及其影响因素。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对波长为405 nm的蓝紫光灯照射杀灭MS2噬菌体和大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌2种指标菌杀灭效果进行观察。结果在该蓝紫光灯下垂... 目的研究波长405 nm蓝紫光对MS2噬菌体及相关指示菌的杀灭效果及其影响因素。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对波长为405 nm的蓝紫光灯照射杀灭MS2噬菌体和大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌2种指标菌杀灭效果进行观察。结果在该蓝紫光灯下垂直30 cm处照射6 h,对悬液内指标菌杀灭对数值分别为5.47和8.32;照射12 h,对MS2噬菌体的杀灭对数值为3.29。在菌悬液内加入一定浓度亚甲基蓝,可以提高蓝紫光杀灭MS2噬菌体的效果,但亚甲蓝对杀菌效果无明显影响。结论波长405 nm蓝紫光对细菌和MS2噬菌体均有一定杀灭效果,亚甲基蓝能增强蓝紫光对MS2噬菌体的杀灭效果。 展开更多
关键词 405 nm蓝紫光 亚甲基蓝 ms2噬菌体 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 杀灭效果
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城北污水处理厂紫外线消毒等效生物验证剂量测定 被引量:2
10
作者 李东 尹新哲 +1 位作者 陈淑芬 Karl G.Linden 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期5-9,13,共6页
使用准平行紫外光束仪测定了重庆城北污水处理厂终沉池出水中粪大肠菌群的紫外线响应曲线,验证了常用剂量下紫外线辐照强度与时间的互为倒数关系,并对验证微生物和商业UV消毒反应器紫外线剂量分布模式的选择进行了讨论。结果显示,当进... 使用准平行紫外光束仪测定了重庆城北污水处理厂终沉池出水中粪大肠菌群的紫外线响应曲线,验证了常用剂量下紫外线辐照强度与时间的互为倒数关系,并对验证微生物和商业UV消毒反应器紫外线剂量分布模式的选择进行了讨论。结果显示,当进水粪大肠菌群的浓度取3.0×106MPN/L时,与104MPN/L和103MPN/L两个排放标准对应的目标紫外线剂量分别为11.3mJ/cm2和15.8 mJ/cm2,对应的REDMS2分别为28.2 mJ/cm2和40 mJ/cm2。分析发现,当使用等效生物验证剂量(RED)方法确定紫外线消毒系统的处理能力时,进水粪大肠菌群浓度为107MPN/L的取值过于保守,会造成设备处理能力过度富余。 展开更多
关键词 污水处理厂 紫外线消毒 等效生物验证剂量 粪大肠菌群 ms2噬菌体
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阿尼昂尼昂热病毒样颗粒的构建和评价 被引量:1
11
作者 汪海波 赵俊华 +4 位作者 陈新彬 苏影 莫秋华 涂承宁 杨泽 《热带医学杂志》 CAS 2019年第9期1078-1081,共4页
目的构建用于阿尼昂尼昂热核酸检测的病毒样颗粒质控品,并对其进行评价。方法体外合成MS2噬菌体和阿尼昂尼昂病毒相关基因,通过酶切连接的方式构建表达载体,IPTG诱导表达并经Co柱纯化获得病毒样颗粒,同基质混合后制成质控品,采用荧光RT-... 目的构建用于阿尼昂尼昂热核酸检测的病毒样颗粒质控品,并对其进行评价。方法体外合成MS2噬菌体和阿尼昂尼昂病毒相关基因,通过酶切连接的方式构建表达载体,IPTG诱导表达并经Co柱纯化获得病毒样颗粒,同基质混合后制成质控品,采用荧光RT-PCR方法对质控品的均匀性、运输稳定性、保存稳定性和冻融稳定性进行系统评价。结果成功构建pET-MS2-ONNV表达载体并获得了纯化的病毒样颗粒。制备的质控品无质粒DNA污染,均匀性测试时变异系数为1.25%,往返运输后Ct值变化不明显,可在4、-20、-70℃条件下保存至少30 d,并可经受8次反复冻融。结论本研究获得了均一、稳定、耐冻融的阿尼昂尼昂热核酸检测病毒样颗粒质控品,对阿尼昂尼昂热的防控具有重要意义,也为其它类似传染病病原体的质控品构建和评价提供了一个可行的方法。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 阿尼昂尼昂热 病毒样颗粒
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基于RT-dd PCR技术的食品中诺如病毒定量检测 被引量:7
12
作者 徐蕾蕊 李丹 +6 位作者 汪琦 马丹 魏咏新 魏海燕 赵晓娟 张西萌 曾静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第20期313-320,共8页
目的:构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)技术的食品中诺如病毒(norovirus,NoV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步... 目的:构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)技术的食品中诺如病毒(norovirus,NoV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步法RT-ddPCR检测体系,确定特异性。利用NoV RNA标准物质和MS2噬菌体RNA确认RT-ddPCR检测体系的定量限、准确度和重复性。制备人工阳性样品,分析MS2噬菌体对定量结果的影响。结果:3个RT-ddPCR检测体系具有良好的特异性、准确度和重复性,NoV RT-ddPCR检测体系的定量限包含10~4~10~0拷贝/μL 5个数量级,MS2噬菌体RT-ddPCR检测体系定量限与NoV相当,添加与不添加MS2噬菌体的人工阳性样品的定量结果无显著差异(P≥0.05)。结论:NoV RT-ddPCR检测体系可准确定量NoV RNA,MS2噬菌体不影响定量结果,可作为过程控制的模式病毒被添加到食品中,指示回收率,计算食品中NoV实际载量。 展开更多
关键词 逆转录微滴式数字聚合酶链式反应 诺如病毒 ms2噬菌体 回收率
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含五种RNA病毒核酸假病毒的制备及特性研究 被引量:4
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作者 程巧珍 陈春 +4 位作者 应婷 伍义行 叶子弘 廖学俊 胡华军 《中国计量大学学报》 2022年第2期281-287,共7页
目的:制备一种应用于细胞制剂中丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒1型和2型(HIV-1/2)、人类T细胞白血病病毒1型和2型(HTLV-1/2)五种RNA病毒核酸检测的阳性质控品,即装载上述五种病毒核酸的假病毒5V(5V)。方法:将上述病毒的部分基因... 目的:制备一种应用于细胞制剂中丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒1型和2型(HIV-1/2)、人类T细胞白血病病毒1型和2型(HTLV-1/2)五种RNA病毒核酸检测的阳性质控品,即装载上述五种病毒核酸的假病毒5V(5V)。方法:将上述病毒的部分基因片段连接成一条基因,与MS2噬菌体部分基因共同插入原核表达载体中构建pACYCDuet-1-MS2/5Virus重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)感受态中表达并鉴定;表达产物纯化浓缩,电镜分析5V形态;对5V进行DNase I、RNase A抗性及保存期的稳定性试验。结果:重组基因有效表达,5V纯度高无杂带;5V成功包装目的基因序列,具有明显的病毒结构特征;5V能抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解,在-20℃稳定保存6个月。结论:制备的5V稳定,达到了作为细胞制剂中RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒 人类T细胞白血病病毒 假病毒 ms2噬菌体
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病毒样颗粒内标在荧光定量RT-PCR检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒方法中的应用
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作者 程帮照 刘华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期85-90,共6页
为建立对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H-PRRSV)快速准确的检测方法,本试验构建兽医临床用病毒样颗粒内标表达载体,制备检测H-PRRSV的病毒样颗粒内标。在H-PRRSV Nsp2基因保守区域设计了1对特异性引物和1个TaqMan荧光探针,通过对反... 为建立对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H-PRRSV)快速准确的检测方法,本试验构建兽医临床用病毒样颗粒内标表达载体,制备检测H-PRRSV的病毒样颗粒内标。在H-PRRSV Nsp2基因保守区域设计了1对特异性引物和1个TaqMan荧光探针,通过对反应体系和扩增条件的优化,建立了检测H-PRRSV的荧光定量RT-PCR检测方法;将MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白基因序列定向插入pET-32a载体的相应位置,在载体下游插入人工合成包含引物和探针的内标基因序列,采用双酶切和PCR鉴定阳性质粒,将阳性质粒转化大肠杆菌BL21工程菌,IPTG诱导表达,制备了病毒样颗粒内标。试验结果表明,所建立的方法特异性强,灵敏度高,对8份已知病毒的检测结果显示特异性为100%,检测滴度为1TCID50/mL病毒液,对42份临床样本的检测结果与农业部备案试剂盒检测结果完全一致,体现了较好的实用性。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 内标 ms2噬菌体 pET-32a载体
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MS2噬菌体在贝类食源性病毒检测中过程质控应用 被引量:6
15
作者 徐蕾蕊 魏海燕 +7 位作者 马丹 汪琦 张西萌 李丹 付溥博 刘莉 魏咏新 曾静 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1584-1590,共7页
目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添... 目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添加量范围;分析M S2噬菌体添加对贝类食源性病毒检测的影响。结果稳定性研究表明-20℃和-80℃28 d MS2噬菌体(悬液的效价浓度为7.13×1011pfu/m L)时RNA含量无明显变化[t=0.464,P=0.653(-20℃);t=0.602,P=0.561(-80℃)]。MS2噬菌体最适添加量范围为7.13×108~7.13×107pfu/m L。在最适添加范围内,试剂盒方法和Trizol裂解结合磁珠纯化方法回收率均>1%。2种阳性样品均被检出,其Ct值比较接近,M S2噬菌体对贝类食源性病毒检测无影响(t=0.170,P=0.873)。结论M S2噬菌体可作为贝类食源性病毒qRT-PCR检测的过程质控品,是监控假阴性结果的一种简便有效的方法。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 过程质控品 食源性病毒 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR) 贝类
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生物防护服穿透性噬菌体指标筛选 被引量:2
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作者 任衍菊 单金洋 +5 位作者 张玉萍 邱志刚 谌志强 陈照立 王新为 金敏 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期699-701,共3页
目的研究PhiX-174、f2、MS2 3种噬菌体的生物学性质,为生物防护服抗微生物悬浮液穿透性能评价选择合适的指示噬菌体。方法从噬菌体形态大小、繁殖能力、耐压性及其所形成噬菌斑的特征等方面,对PhiX-174、f2、MS2 3种噬菌体的生物学性质... 目的研究PhiX-174、f2、MS2 3种噬菌体的生物学性质,为生物防护服抗微生物悬浮液穿透性能评价选择合适的指示噬菌体。方法从噬菌体形态大小、繁殖能力、耐压性及其所形成噬菌斑的特征等方面,对PhiX-174、f2、MS2 3种噬菌体的生物学性质进行观察。结果 PhiX-174形成噬菌斑最大、形成时间最短,培养5 h后,噬菌斑直径可达2.57 mm,繁殖能力最强,4 h即可迅速增殖到1.67×1010 PFU/mL,最终可达1012 PFU/mL以上,3种噬菌体大小相当,直径均为25 nm左右,远小于人类血源性病毒和呼吸道病毒,均有一定耐压力,在1.75、3.5、7、14、20 kPa下作用5 min后,均未见噬菌体滴度明显减少。结论噬菌体PhiX-174最适于作为生物防护服尤其高危生物污染环境作业人员防护服抗病毒效果评价的指示病毒。 展开更多
关键词 指示噬菌体 噬菌体PhiX-174 噬菌体F2 噬菌体ms2 生物防护服
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内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定 被引量:1
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作者 程帮照 杨金兵 +3 位作者 卢运战 诸亚平 赵宏波 刘鹏义 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第6期120-124,共5页
为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合... 为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。 展开更多
关键词 新城疫 耐核糖核酸酶 病毒样颗粒 ms2噬菌体 荧光RT-PCR
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