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基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
1
作者 马莉莉 王琼娴 +5 位作者 王晓丽 马孙婷 吕立新 徐彬 冯志新 欧阳伟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期41-50,共10页
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA... 噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框,将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中,获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态,通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定,获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达,经超速离心纯化,电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA,通过RT-PCR及测序鉴定,结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性研究,通过ELISA测得的抗体效价为1∶819200,表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明,利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA,并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台,为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。 展开更多
关键词 BAC-TO-BAC ms2 vlp 递送系统 mRNA疫苗
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MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究 被引量：8
2
作者 董艳美 张国广 +2 位作者 汪卫 范红军 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期237-243,共7页
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141～160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli... 研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141～160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景. 展开更多
关键词 口蹄疫 ms2噬菌体 抗原决定簇 类病毒颗粒
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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型实时荧光RT-PCR盔甲RNA阳性质控品的构建
3
作者 朱向东 孙伟珊 +5 位作者 曹琪 尹春博 杨丹 李硕 邓钰蓱 李文钢 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第3期1759-1765,共7页
本研究旨在利用MS2噬菌体外壳蛋白自组装并包封外源核酸的特性,制备用于猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型(porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2,PRRSV-2)RT-qPCR检测阳性质控品,并探究其稳定性及耐RNase特性... 本研究旨在利用MS2噬菌体外壳蛋白自组装并包封外源核酸的特性,制备用于猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型(porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2,PRRSV-2)RT-qPCR检测阳性质控品,并探究其稳定性及耐RNase特性。选取PRRSV-2的特异性靶基因(ORF7保守区),插入pET28a(+)/CP-A重组质粒PAC位点下游构建重组载体,经原核表达、硫酸铵沉淀及凝胶过滤层析纯化,获得20~28 nm均一的MS2病毒样颗粒;通过全能核酸酶消化及RT-qPCR,验证其热稳定性和抗RNase能力。结果显示:成功构建含MS2噬菌体外壳蛋白、PAC位点和PRRSV-2靶基因的重组载体,纯化后形成包封靶基因的盔甲RNA,可耐受RNase降解,37℃无菌条件下稳定存在7 d。该盔甲RNA可作为PRRSV-2 RT-qPCR阳性质控品,相比传统合成核酸,优势在于:1)模拟真实病毒核酸状态,监控全检测流程;2)耐RNase能力强;3)3批次批内及批间变异系数均<2%;4)37℃稳定保存7 d,为PRRSV-2检测提供可靠质控工具。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因2型 盔甲RNA 实时荧光RT-PCR 质控品 病毒样颗粒 ms2噬菌体
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