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MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究
被引量:
8
1
作者
董艳美
张国广
+2 位作者
汪卫
范红军
陈亮
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期237-243,共7页
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli...
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景.
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关键词
口蹄疫
ms2
噬菌体
抗原决定簇
类病毒颗粒
在线阅读
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职称材料
基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
2
作者
马莉莉
王琼娴
+5 位作者
王晓丽
马孙婷
吕立新
徐彬
冯志新
欧阳伟
《中国动物传染病学报》
2025年第5期41-50,共10页
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA...
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框,将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中,获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态,通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定,获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达,经超速离心纯化,电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA,通过RT-PCR及测序鉴定,结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性研究,通过ELISA测得的抗体效价为1∶819200,表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明,利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA,并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台,为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。
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关键词
Bac-to-Bac
ms2
vlp
递送系统
mRNA疫苗
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职称材料
题名
MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究
被引量:
8
1
作者
董艳美
张国广
汪卫
范红军
陈亮
机构
厦门大学生命科学学院
漳州师范学院生命科学与技术系
河南师范大学生命科学学院
出处
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期237-243,共7页
基金
福建省科技厅重点项目(2009N0051)
福建省自然科学基金项目(2010J01240)
厦门市科技计划项目(3502Z20103007)
文摘
研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141~160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景.
关键词
口蹄疫
ms2
噬菌体
抗原决定簇
类病毒颗粒
Keywords
foot-and-mouth disease (FMD)
ms2
phage
epitopes
virus-like particles (
vlp
s)
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
2
作者
马莉莉
王琼娴
王晓丽
马孙婷
吕立新
徐彬
冯志新
欧阳伟
机构
南京农业大学动物医学院
出处
《中国动物传染病学报》
2025年第5期41-50,共10页
基金
国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2019YFE0107300)
国家自然科学基金(32072872)
江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(20)3095)。
文摘
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框,将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中,获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态,通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定,获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达,经超速离心纯化,电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA,通过RT-PCR及测序鉴定,结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性研究,通过ELISA测得的抗体效价为1∶819200,表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明,利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA,并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台,为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。
关键词
Bac-to-Bac
ms2
vlp
递送系统
mRNA疫苗
Keywords
Bac-to-Bac
ms2 vlp
delivery system
mRNA vaccine
分类号
S859.797 [农业科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究
董艳美
张国广
汪卫
范红军
陈亮
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
马莉莉
王琼娴
王晓丽
马孙婷
吕立新
徐彬
冯志新
欧阳伟
《中国动物传染病学报》
2025
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职称材料
已选择
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