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胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种mreB基因的功能分析 被引量:2
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作者 邓亚岷 杜硕 +3 位作者 王欢 杨钟灵 刘凤权 范加勤 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期45-52,共8页
为了阐明细菌杆状决定蛋白mreB基因对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc)生物学特性及致病性的影响,采用同源重组的方法成功构建了该基因的缺失突变株、互补菌株及过表达菌株,并进行了相... 为了阐明细菌杆状决定蛋白mreB基因对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc)生物学特性及致病性的影响,采用同源重组的方法成功构建了该基因的缺失突变株、互补菌株及过表达菌株,并进行了相关表型测定。结果表明:与野生型菌株PccS1相比,缺失突变株ΔmreB菌体形态由杆状变为球形;对黄花马蹄莲和大白菜的致病性显著下降;生长能力也受到一定限制;尽管分泌胞外纤维素酶的能力、抗氧化压力和菌体沉降速率无明显变化,但蛋白酶活性、果胶酶活性、生物膜形成能力、游动性及产生碳青霉烯抗生素的能力均有不同程度的下降。互补菌株的表型得到了部分或全部恢复。qRT-PCR结果也显示:ΔmreB中几种相关致病因子的相对表达量均下调。表明:mreB与胡萝卜软腐果胶杆菌的菌体形态、生长能力和致病能力密切相关。这是首次报道mreB与植物病原菌的致病性相关。 展开更多
关键词 胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种 mreb基因 细胞形态 致病性
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MreB在鱼腥蓝细菌PCC 7120细胞分裂过程中的功能 被引量:2
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作者 李东霞 王莉 陈雯莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期672-678,共7页
为研究Anabaena sp. PCC 7120中的细胞形态决定蛋白MreB的亚细胞定位和功能,构建了由mreB自身启动子驱动的mreB-gfp融合载体,通过接合转移的方法将其转化到野生型Anabaena sp. PCC 7120中,获得绿色荧光蛋白标记的MreB的鱼腥蓝细菌菌株,... 为研究Anabaena sp. PCC 7120中的细胞形态决定蛋白MreB的亚细胞定位和功能,构建了由mreB自身启动子驱动的mreB-gfp融合载体,通过接合转移的方法将其转化到野生型Anabaena sp. PCC 7120中,获得绿色荧光蛋白标记的MreB的鱼腥蓝细菌菌株,同时用MreB的抑制剂A22处理菌株。结果显示,MreB的亚细胞定位随着细胞周期的进程而发生变化,A22处理可导致MreB无法正确聚合定位。 展开更多
关键词 鱼腥蓝细菌PCC 7120 mreb A22 细胞分裂
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蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreB的克隆表达及在螺原体二种形态时的表达差异
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作者 周丹霞 危蓉萍 +3 位作者 康昕 钱正宗 纪燕玲 于汉寿 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1771-1778,共8页
【目的】在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreB1?5,并预测所编码蛋白的理化性质,分析这些基因在螺原体螺旋状和非螺旋状时的表达水平,为进一步分析该基因的功能奠定基础。【方法】通过PCR扩增,从Spiroplasma melliferum ... 【目的】在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreB1?5,并预测所编码蛋白的理化性质,分析这些基因在螺原体螺旋状和非螺旋状时的表达水平,为进一步分析该基因的功能奠定基础。【方法】通过PCR扩增,从Spiroplasma melliferum CH-1基因组中获得mreB1?5基因,构建的重组表达载体pETmreB1?5分别在大肠杆菌BL21中诱导表达,利用镍亲和树脂纯化重组蛋白,通过在线工具预测MreB蛋白质的理化性质和功能域。利用Real-Time PCR比较螺原体CH-1在两种不同形态时mreB1?5基因的表达量。【结果】成功克隆到5个mreB基因,并在大肠杆菌BL21中高效表达。MreB蛋白分子量分别为36、23、23、37和25 kD,可能均为疏水性的蛋白,属于MreB/Mbl蛋白质家族。荧光定量PCR结果显示,螺原体在非螺旋状时mreB1?5基因的表达水平均远低于在螺旋状时基因的表达水平。【结论】本文第一次克隆表达了螺原体细胞骨架相关基因mreB1?5,初步表明这些基因在螺原体形态方面可能具有重要作用,为后续研究螺原体mreB基因在其运动和形态方面的功能提供了重要信息。 展开更多
关键词 螺原体 细胞骨架 mreb基因 生物信息学 荧光定量PCR
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肠炎沙门菌mreB基因缺失株的构建及其体外生物学特性研究
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作者 王曼宇 王忠星 +3 位作者 曹俊 许秋 刘思国 于申业 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期356-360,共5页
MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回... MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回补菌株,观察缺失株SM6ΔmreB的形态学变化,分析其对温度缺氧应力、渗透应力以及耐酸性的变化。结果显示,缺失株SM6ΔmreB的菌体变为球状,生长受到抑制;SM6ΔmreB对升温缺氧压力的耐受能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05);在渗透压条件为100mmol/L和200mmol/LNaCl时缺失株的生存能力明显弱于亲本株和回补株(p<0.05);缺失株在强酸环境中的生存能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05),而对中性和弱酸性环境的适应能力与亲本株相似。本研究为进一步探究MreB蛋白在沙门菌的致病机制以及菌蜕形成过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 mreb蛋白 沙门菌 生物学特性 环境压力
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基于重叠延伸PCR构建幽门螺杆菌MreB重组载体
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作者 李芳 高婧 +3 位作者 马金成 范聪聪 付亚娟 侯晓强 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期415-420,共6页
[目的]基于重叠延伸PCR技术,构建串联亲和层析标签(TAP)标记的幽门螺杆菌骨架蛋白Mre B的重组质粒。[方法]将幽门螺杆菌Mre B基因终止密码子TAA前DNA序列(Mre Ba)、TAP和终止密码子TAA后的DNA序列(Mre Bb),通过重叠延伸PCR进行连接,形... [目的]基于重叠延伸PCR技术,构建串联亲和层析标签(TAP)标记的幽门螺杆菌骨架蛋白Mre B的重组质粒。[方法]将幽门螺杆菌Mre B基因终止密码子TAA前DNA序列(Mre Ba)、TAP和终止密码子TAA后的DNA序列(Mre Bb),通过重叠延伸PCR进行连接,形成大小约3.1 kb的融合片段Mre BCF;Mre BCF片段经XhoⅠ酶切、纯化后,克隆到经SmaⅠ和XhoⅠ双酶切的线性载体p K18mob Sac B上。[结果]PCR、酶切及DNA测序的结果表明,重组质粒p K18Mre BCF包含大小约为740 bp、1 400 bp和1 000 bp的三个片段(Mre Ba、TAP和Mre Bb),并且这三个片段的接头连接及核苷酸序列完全正确。[结论]利用重叠延伸PCR可对多个片段进行无缝连接,简便、高效地构建重组质粒;成功构建了重组质粒p K18Mre BCF,为将来幽门螺杆菌Mre B蛋白功能复合体的分离和鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 骨架蛋白 mreb 重叠延伸PCR 重组载体
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E75、R78和D82是影响大肠埃希氏菌FtsZ自身组装及其与MreB相互作用的重要氨基酸 被引量:1
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作者 霍雨佳 卢乔楠 +2 位作者 郑晓伟 马远方 卢锋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期264-274,共11页
【目的】探索大肠埃希氏菌Escherichia coli FtsZ突变体FtsZ^(E75A)、FtsZ^(R78G)和FtsZ^(D82A)对FtsZ自身组装和FtsZ-MreB相互作用的影响。【方法】利用常规分子克隆和定点突变技术,构建FtsZ及其突变体表达载体,亲和纯化得到相应的目... 【目的】探索大肠埃希氏菌Escherichia coli FtsZ突变体FtsZ^(E75A)、FtsZ^(R78G)和FtsZ^(D82A)对FtsZ自身组装和FtsZ-MreB相互作用的影响。【方法】利用常规分子克隆和定点突变技术,构建FtsZ及其突变体表达载体,亲和纯化得到相应的目标蛋白;通过同源重组构建QN6(ftsZ::yfp-cat)、QN7(ftsZ^(E75A)::yfp-cat)、QN8(ftsZ^(R78G)::yfp-cat)和QN9(ftsZ^(D82A)::yfp-cat)菌株;利用活细胞成像技术观察FtsZ及其突变体的胞内定位模式;免疫沉淀和细菌双杂交实验检测FtsZ/FtsZ*-FtsZ*或FtsZ/FtsZ*-MreB间的相互作用;光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响。【结果】FtsZ^(E75A)、FtsZ^(R78G)和FtsZ^(D82A)突变体的功能活性降低、各突变体在E.coli内不能正确的定位和形成功能性Z环;FtsZ/FtsZ*-FtsZ*单体间的相互作用减弱或消失,FtsZ*-MreB相互作用破坏;FtsZ突变体体外聚合效率降低。【结论】FtsZ E75、R78和D82是影响FtsZ正确组装和功能及FtsZ-MreB相互作用的重要氨基酸。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌 FtsZ组装 mreb 细胞内定位
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Metamorphosis of Magnetospirillum magneticum AMB-1 cells 被引量:1
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作者 张风丽 张葵 +3 位作者 赵三军 肖天 Michel DENIS 吴龙飞 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期304-309,共6页
Magnetospirillum magneticum strain AMB-1 belongs to the family of magnetotactic bacteria. It possesses a magnetosome chain aligning, with the assistance of cytoskeleton filaments MamK, along the long axis of the spira... Magnetospirillum magneticum strain AMB-1 belongs to the family of magnetotactic bacteria. It possesses a magnetosome chain aligning, with the assistance of cytoskeleton filaments MamK, along the long axis of the spiral cells. Most fresh M. magneticum AMB-1 cells exhibit spiral morphology. In addition, other cell shapes such as curved and spherical were also observed in this organism. Interestingly, the spherical cell shape increased steadily with prolonged incubation time. As the actin-like cytoskeleton protein MreB is involved in maintenance of cell shapes in rod-shaped bacteria such as Escherichia coli and Bacillus subtilis, the correlation between MreB protein levels and cell shape was investigated in this study. Immunoblotting analysis showed that the quantity of MreB decreased when the cell shape changed along with incubation time. As an internal control, the quantity of MamA was not obviously changed under the same conditions. Cell shape directs cell-wall synthesis during growth and division. MreB is required for maintaining the cell shape. Thus, MreB might play an essential role in maintaining the spiral shape of M. magneticum AMB-1 cells. 展开更多
关键词 Magnetotactic bacteria Magnetospirillum magneticum AMB-1 mreb
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细菌骨架蛋白结构与功能进展
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作者 曹晨慧 陈惠琳 黄宁 《四川生理科学杂志》 2015年第2期82-85,共4页
自20世纪初细胞骨架概念提出之后,细胞骨架一直被认为是真核生物所特有的结构。但近年人们在细菌等原核生物中也发现了原核类似骨架蛋白。存在于细菌中的FtsZ、MreB和CreS分别与真核细胞骨架蛋白中的微管蛋白、微丝蛋白及中间丝类似,是... 自20世纪初细胞骨架概念提出之后,细胞骨架一直被认为是真核生物所特有的结构。但近年人们在细菌等原核生物中也发现了原核类似骨架蛋白。存在于细菌中的FtsZ、MreB和CreS分别与真核细胞骨架蛋白中的微管蛋白、微丝蛋白及中间丝类似,是细菌骨架蛋白研究中最为重要的分子。FtsZ能在细菌分裂位点装配成Z环结构,参与细菌分裂的调控;MreB沿着细胞膜内侧形成螺旋状结构,具有维持细胞形态和调控染色体分离等功能;CreS是发现仅存在于新月柄杆菌中的中间丝类似蛋白,它于细胞凹面的膜下形成弯曲丝状,贯穿整个细菌纵轴呈现长度最短的螺旋丝状结构,对维持新月柄杆菌细胞的形态具有重要作用。 展开更多
关键词 细菌骨架 FTSZ mreb CreS 结构与功能
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探索大肠杆菌细胞膜合成过程中脂肪酸的掺入模式 被引量:1
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作者 谢玲玲 宁婷婷 +2 位作者 卞光凯 高丁 刘天罡 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期769-781,共13页
【目的】探索大肠杆菌生长分裂过程中,脂肪酸作为底物在细胞膜合成过程中的掺入模式。【方法】本研究解析了以乙酰CoA为底物,合成中间产物长链脂酰-ACP,随后合成磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)的途径,并将合成途径中的10个... 【目的】探索大肠杆菌生长分裂过程中,脂肪酸作为底物在细胞膜合成过程中的掺入模式。【方法】本研究解析了以乙酰CoA为底物,合成中间产物长链脂酰-ACP,随后合成磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)的途径,并将合成途径中的10个关键酶与绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)或红色荧光蛋白(monmer Cherry,mCherry)进行融合,在大肠杆菌内表达这些融合蛋白,用激光共聚焦荧光显微镜成像的方式来获得这些融合蛋白的定位信息。【结果】宽场荧光显微镜成像结果显示,磷脂酰乙醇胺合成途径中的10个酶在不同表达水平下出现不同的定位模式。在大肠杆菌中高水平表达融合蛋白EGFP-FabA、EGFP-FabB、EGFP-FabI、EGFP-FabG、EGFP-PlsB和EGFP-PssA时,细胞两极和中部有大量蛋白聚集的现象。EGFP-FabD、EGFP-FabF、EGFP-CdsA、EGFP-PSD在不同表达水平下,均匀分散在细胞质或细胞膜上。缩时影像(Time-lapse)结果显示,合成途径中的一个关键蛋白EGFP-Pls B在细胞分裂前随着细胞膜的内陷聚集到细胞隔膜,随着细胞分裂,母细胞的隔膜成为新细胞的两极。【结论】本研究通过获取磷脂酰乙醇胺合成相关蛋白酶在大肠杆菌中的定位结果,推测脂肪酸分子是在细胞分裂隔膜和两极掺入,被催化合成PE后被运送到细胞膜其他位置。 展开更多
关键词 磷脂酰乙醇胺(PE) 细胞膜合成 融合荧光蛋白 PlsB 脂肪酸 mreb
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