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人胚肺二倍体细胞系MU-L2与MRC-5的生物学特性比较
1
作者 杨雅雯 程玮 +5 位作者 靳莉武 张震宇 杨迪 王家敏 陈建国 乔自林 《中国生物制品学杂志》 2025年第9期1043-1048,1055,共7页
目的 对人胚肺细胞系MU-L2、转染SV40-LT基因的MU-L2细胞系MU-SVL2与国际上已建立的人胚肺细胞系MRC-5的生物学特性进行比较,以期将MU-L2细胞系应用于生物医学研究及疫苗生产。方法 采用含10%NBS的MEM培养基培养MU-L2、MU-SVL2、MRC-5细... 目的 对人胚肺细胞系MU-L2、转染SV40-LT基因的MU-L2细胞系MU-SVL2与国际上已建立的人胚肺细胞系MRC-5的生物学特性进行比较,以期将MU-L2细胞系应用于生物医学研究及疫苗生产。方法 采用含10%NBS的MEM培养基培养MU-L2、MU-SVL2、MRC-5细胞,并按《中国药典》三部(2020版)的要求进行传代。镜下观察3种细胞的生长特性,CCK-8法检测细胞的增殖能力,qPCR法检测相对端粒长度,软琼脂克隆形成试验分析细胞成瘤性,吉姆萨染色核型分析法检测染色体的稳定情况,并进行比较。结果 培养72 h后,3种细胞均长成致密单层,细胞呈现典型的漩涡状排列形态,生长状态良好;MU-L2、MU-SVL2细胞在培养3~6 d时增殖速度显著高于MRC-5细胞(F=1.893,P<0.05);随着代次的增加,相对端粒长度随之缩短,且MU-L2、MU-SVL2细胞相对端粒长度均长于相近代次的MRC-5细胞;3种细胞均未见细胞集落形成,且均属于正常人二倍体核型。结论 MU-L2及MU-SVL2细胞增殖能力强、端粒稳定性更佳、无成瘤性且染色体稳定,有望应用于生物医学研究和疫苗生产。 展开更多
关键词 人胚肺二倍体细胞 MU-L2细胞 MU-SVL2细胞 mrc-5细胞 生物学特性
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康复新液对转化生长因子-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化模型的干预作用 被引量：3
2
作者 徐秋颖 刘伟伟 +2 位作者 王宝家 马秀英 高永翔 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期432-437,共6页
为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测... 为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测得的最高不致死给药浓度(80倍稀释)的康复新液干预TGF-β1诱导的MRC-5细胞模型,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平变化.结果显示:10ng/mL TGF-β1可成功诱导MRC-5细胞发生纤维化,且细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的mRNA表达水平均显著升高;以80倍稀释的康复新液为最高不致死给药浓度,对MRC-5细胞纤维化模型进行干预,上述纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平均出现显著下降,与地塞米松(Dexamethasone,DXM)的干预效果相当.综上,康复新液可改善由TGF-β1诱导MRC-5细胞纤维化的表型,有望被应用于肺纤维化的治疗. 展开更多
关键词 康复新液 肺纤维化 转化生长因子-Β1 mrc-5细胞
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应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养分离寨卡病毒研究 被引量：2
3
作者 李幸乐 李懿 +5 位作者 王若琳 苏佳 康锴 郭大城 许汴利 黄学勇 《疾病监测》 CAS 2018年第9期715-717,共3页
目的应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养并分离鉴定寨卡病毒。方法收集寨卡病毒病确诊病例的精液样本并在MRC-5细胞中进行培养,观察致细胞病变效应(CPE)。采用实时荧光PCR(real-time PCR)方法鉴定培养,同时对培养物进行序列测定和比对分析... 目的应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养并分离鉴定寨卡病毒。方法收集寨卡病毒病确诊病例的精液样本并在MRC-5细胞中进行培养,观察致细胞病变效应(CPE)。采用实时荧光PCR(real-time PCR)方法鉴定培养,同时对培养物进行序列测定和比对分析。结果病例精液样本经MRC-5细胞盲传3代,未观察到明显的特异性致CPE,MRC-5细胞3代培养物寨卡病毒经real-time PCR检测结果呈阳性。毒株命名为Henan/001/2016,GenBank编号为MF593625,属于亚洲基因簇系。Henan/001/2016与Natal RGN株的亲缘关系最为接近,在E基因区段的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.7%和100%。结论 MRC-5细胞适用于寨卡病毒的分离、培养和鉴定。 展开更多
关键词 寨卡病毒 mrc-5细胞 病毒分离 进化分析
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疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5中猪圆环病毒的检测 被引量：3
4
作者 刘欣玉 黄艳秋 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期732-734,共3页
目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结... 目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结果两种细胞上清中最低均可检出1 pg的PCV1和PCV2 DNA,灵敏度较高;两种细胞中PCV检测结果均为阴性。结论在生产用人二倍体细胞2BS和MRC5中,均未检出PCV1和PCV2污染。 展开更多
关键词 人二倍体细胞 2BS细胞 mrc-5细胞 疫苗 猪圆环病毒 聚合酶链反应
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噬菌体展示技术筛选MRC-5细胞上人巨细胞病毒的结合位点
5
作者 王巍 张立 于萍 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-4,共4页
目的以人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为靶细胞,寻找参与HCMV识别并结合细胞的多肽区域,研究HCMV膜蛋白中哪些功能域参与细胞识别以及膜融合过程。方法以HCMV感染阳性的MRC-5细胞为液相筛选物,从随机七肽噬菌体展示... 目的以人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为靶细胞,寻找参与HCMV识别并结合细胞的多肽区域,研究HCMV膜蛋白中哪些功能域参与细胞识别以及膜融合过程。方法以HCMV感染阳性的MRC-5细胞为液相筛选物,从随机七肽噬菌体展示库中筛选出能够与感染阳性MRC-5细胞特异性结合而与正常细胞不结合的噬菌体配体。通过ELISA分析亲和力、DNA测序、序列对比及理化性质分析多肽。结果初步发现EVNMSDS、NVSVFET和GQQPTTV3个肽段可能参与HCMV与宿主细胞的识别过程。同时通过同源比对分析还发现,这3个七肽与HCMVgB和gH蛋白存在共有序列。结论应用PHD7噬菌体随机肽库和生物信息学方法筛选出3个可能参与HCMV识别宿主细胞并进行膜融合的功能域,为进一步研究HCMV感染宿主细胞的具体机制提供新的思路以及为抗HCMV感染提供新的策略。 展开更多
关键词 噬菌体展示 mrc-5 HCMV
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樟脑对MRC-5细胞p53 mRNA表达的影响
6
作者 刘晓燕 段承刚 +6 位作者 唐小军 蔡仕钰 郑波 罗映 赖国超 申淑琬 于海清 《泸州医学院学报》 2013年第2期114-116,共3页
目的:检测樟脑(C10H16O)处理MRC-5细胞对p53基因mRNA表达水平的影响。方法:DMEM培养基培养MRC-5细胞,设试验组和对照组。1×105细胞/孔的细胞密度接种于6孔板,每组设三复孔,180μg.ml-1的樟脑分别作用MRC-5细胞24h和48h。MTT法测定... 目的:检测樟脑(C10H16O)处理MRC-5细胞对p53基因mRNA表达水平的影响。方法:DMEM培养基培养MRC-5细胞,设试验组和对照组。1×105细胞/孔的细胞密度接种于6孔板,每组设三复孔,180μg.ml-1的樟脑分别作用MRC-5细胞24h和48h。MTT法测定细胞相对增殖百分率。提取细胞总RNA,逆转录得cDNA。GAPDH mRNA作为内参,p53/GAPDH mRNA为相对表达量,反转录半定量聚合酶链式反应(SQ-PCR)分析MRC-5细胞中p53表达水平,试验重复三次。结果:180μg.ml-1樟脑作用MRC-5细胞24h和48h后,细胞相对增殖百分率均高于90%。给药24h,对照组和试验组MRC-5细胞p53 mRNA表达水平分别为0.81±0.24和0.56±0.13(P>0.05)。给药48h,对照组和试验组MRC-5细胞p53 mRNA表达水平分别为0.76±0.11和1.08±0.19(P>0.05)。给药24h和48h,试验组MRC-5细胞p53 mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:180μg.ml-1浓度的樟脑对MRC-5为安全给药浓度。给药后MRC-5细胞p53 mRNA表达水平上调有统计学意义,提示樟脑可能间接影响p53基因的表达调控。 展开更多
关键词 樟脑 mrc-5 P53
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MRC-5细胞株支持脐带血和外周血CD_(34)^+细胞增殖分化的研究
7
作者 周昕 梁辉 +1 位作者 应大明 王耀平 《白血病》 1997年第4期199-201,共3页
运用Ｄｅｘｔｅｒ体外细胞长期培养法，对脐带血和外周血造血干细胞进行单独培养，用ＭＲＣ－５细胞株作为基底层与之混合培养，将二者进行对照研究。结果发现外周血和脐带血不含或仅含极少数基质细胞，单独培养时造血干细胞的增殖分化... 运用Ｄｅｘｔｅｒ体外细胞长期培养法，对脐带血和外周血造血干细胞进行单独培养，用ＭＲＣ－５细胞株作为基底层与之混合培养，将二者进行对照研究。结果发现外周血和脐带血不含或仅含极少数基质细胞，单独培养时造血干细胞的增殖分化受到影响；而用ＭＲＣ－５细胞株作为基底层的混合培养中，ＣＤ＋３４可以在５周～６周内持续存活，并得到增殖分化，揭示ＭＲＣ－５细胞株具有基质细胞的支持作用，为脐带血和外周血ＣＤ＋３４在体外的长期培养提供了简便可行的技术方法。 展开更多
关键词 mrc-5细胞株 基底层 造血干细胞 肿瘤 CD34
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狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性 被引量：4
8
作者 张芮铭 高正伦 +5 位作者 方群 左静 刘海文 郑学学 刘翠 郑森元 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第9期1258-1259,1263,共3页
目的 观察狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性。方法 分别将0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10MOI的PM株狂犬病病毒接种至MRC-5细胞中,显微镜观察感染细胞的状态;间接免疫荧光法检测病毒收获液的滴度;小鼠NIH法测定病毒... 目的 观察狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性。方法 分别将0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10MOI的PM株狂犬病病毒接种至MRC-5细胞中,显微镜观察感染细胞的状态;间接免疫荧光法检测病毒收获液的滴度;小鼠NIH法测定病毒灭活液的效价。结果 MOI为0.06～0.07时,病毒收获前细胞出现聚集现象,液体中基本无死细胞;病毒收获液的滴度和病毒灭活液的效价较高。结论 观察了狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性,为疫苗生产工艺的优化提供了实验依据。 展开更多
关键词 狂犬病病毒PM株 mrc-5细胞 感染特性 滴度 效价
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汉防己甲素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Col-I及FN表达的影响 被引量：7
9
作者 席苑 张海静 +4 位作者 高云航 侯红平 李晗 叶祖光 张广平 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期94-99,共6页
目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2.5,5,10,20,40μg·L^-1)作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的... 目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2.5,5,10,20,40μg·L^-1)作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的增殖毒性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MRC-5细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达水平的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MRC-5细胞上清液中I型胶原(Col-I)及纤维黏连蛋白(FN)表达水平的变化,以筛选出TGF-β1活化MRC-5细胞的适宜浓度。结合筛选出的TGF-β1的浓度条件,与不同浓度的Tet(0,2.5,5,10,20,40μmol·L^-1)共同作用于MRC-5细胞,再次应用CCK-8法筛选TGF-β1及Tet共培养对MRC-5细胞的安全浓度,Western blot检测MRC-5细胞中α-SMA及Vimentin表达水平的变化,ELISA检测MRC-5细胞上清液中Col-I及FN表达水平的变化。结果:与空白组比较,给药24 h时,20μg·L^-1及40μg·L^-1的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P<0.05),给药48 h时,10,20,40μg·L^-1的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P<0.05);加入Tet培养24 h时,对MRC-5细胞的半数抑制浓度(IC50)值为14.07μmol·L^-1,培养48 h时,IC50值为7.51μmol·L^-1;与空白组比较,5μg·L^-1的TGF-β1刺激MRC-5细胞时,细胞中α-SMA,FN及Col-I的相对含量明显升高(P<0.05),Vimentin相对含量显著升高(P<0.01),10μg·L^-1组细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量显著升高(P<0.01);10μg·L^-1的TGF-β1与不同浓度的Tet共培养,与TGF-β1组比较,Tet 5μmol·L^-1组,细胞中α-SMA,Vimentin及FN相对含量显著降低(P<0.01),Col-I相对含量明显降低(P<0.05),Tet 10μmol·L^-1组,细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量均显著降低(P<0.01)。结论:TGF-β1能够升高MRC-5细胞中Col-I,FN等细胞外基质的水平,而Tet可以有效抑制这种变化的发生,提示Tet可能对肺纤维化的形成中,成纤维细胞大量分泌细胞外基质的过程有抑制作用。 展开更多
关键词 汉防己甲素 转化生长因子-β1(TGF-β1) mrc-5 I型胶原(Col-I) 纤维黏连蛋白(FN)
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海藻多糖对H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及其机制 被引量：4
10
作者 刘骅漫 刘学 +2 位作者 贾新华 张心月 张伟 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第32期17-20,共4页
目的探讨海藻多糖对H_2O_2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及机制。方法将体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5随机分为空白组、H_2O_2组、海藻多糖组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组。空白组正常培养,H_2O_2组给予H_2O_... 目的探讨海藻多糖对H_2O_2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及机制。方法将体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5随机分为空白组、H_2O_2组、海藻多糖组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组。空白组正常培养,H_2O_2组给予H_2O_2处理,海藻多糖组给予海藻多糖处理,海藻多糖+H_2O_2组先给予海藻多糖干预1 h、再给予H_2O_2处理,H_2O_2+海藻多糖组先给予H_2O_2干预1 h、再给予海藻多糖处理。各组H_2O_2浓度均为600μmol/L,海藻多糖浓度均为0.312 5 mg/m L。各组均于干预0、24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖抑制率;处理24 h时检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)表达,采用免疫荧光法检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2、Kelch样ECH联合蛋白1(Keap1)、NADP(H)醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)、CGLC mRNA表达。结果培养24、48、72 h时,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组细胞增殖抑制率均高于空白组及海藻多糖组,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组均低于H_2O_2组,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组MDA、ROS表达增加,SOD表达降低;与H_2O_2组比较,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组MDA、ROS表达降低,SOD表达增加,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量均降低,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组均较H_2O_2组升高,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均升高,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均降低;与H_2O_2组比较,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均降低,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均升高;组间比较P均<0.05。结论海藻多糖可抑制H_2O_2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的氧化应激损伤,上调Nrf2表达、激活Nrf2/Keap1/抗氧化反应序列元件信号通路可能是其作用机制。 展开更多
关键词 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞mrc-5 海藻多糖 过氧化氢 氧化损伤 核转录因子E2相关因子2
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补肺益肾方调控NF-κB通路抑制香烟烟雾提取物诱导的MRC-5细胞炎症反应机制 被引量：2
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作者 刘素晓 王洋 +4 位作者 芦晓帆 刘学芳 冯素香 郑万春 李亚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期5648-5652,共5页
目的:观察补肺益肾方调控核因子-κB(NF-κB)通路对CSE诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症反应的抑制作用。方法:正常培养和NF-κB p65 siRNA转染的MRC-5细胞经正常血清、5%CSE、5%CSE+补肺益肾方血清、5%CSE+氨茶碱血清处理24 h后,分... 目的:观察补肺益肾方调控核因子-κB(NF-κB)通路对CSE诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症反应的抑制作用。方法:正常培养和NF-κB p65 siRNA转染的MRC-5细胞经正常血清、5%CSE、5%CSE+补肺益肾方血清、5%CSE+氨茶碱血清处理24 h后,分别采用流式细胞术测细胞增殖、凋亡情况,ELISA方法测细胞因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,qRT-PCR检测IL-1β、TNF-α、NF-κB p65和IκBαmRNA表达水平,Western Blot检测p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平。结果:CSE诱导可以显著降低正常和siRNA转染MRC-5细胞增殖率,增加凋亡率,提高IL-1β和TNF-α分泌及mRNA表达水平,以及NF-κB p65和IκBα基因及蛋白磷酸化水平(P<0.01);补肺益肾方处理可显著改善上述指标(P<0.01),且与NF-κB p65 siRNA有良好的协同作用。结论:补肺益肾方可以显著抑制CSE诱导的MRC-5细胞炎症反应,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 补肺益肾方 核因子-κB通路 香烟烟雾提取物 mrc-5细胞 炎症
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TGF-β1致MRC-5细胞转分化的差异microRNAs表达分析 被引量：3
12
作者 杨培琰 赵阿会 +6 位作者 金路恒 赵有亮 于兴浩 张建会 翟若南 郝长付 姚武 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2019年第5期551-558,共8页
目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞株MRC-5细胞基因表达微阵列芯片的差异表达微小RNA(miRNA),筛选成纤维细胞转分化的关键基因和信号通路。方法从美国国立信息中心的高通量基因表达数据库下载TGF-β1刺激MRC-5... 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞株MRC-5细胞基因表达微阵列芯片的差异表达微小RNA(miRNA),筛选成纤维细胞转分化的关键基因和信号通路。方法从美国国立信息中心的高通量基因表达数据库下载TGF-β1刺激MRC-5细胞的miRNA表达芯片数据集GSE43992,采用R语言Limma包进行差异表达miRNAs的筛选,通过miRWalk数据库预测其对应的靶基因,对差异表达的miRNAs和靶基因进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析,构建蛋白质相互作用(PPI)网络。结果共筛选出5条差异表达的miRNAs,包括4个上调的miRNAs和1个下调的miRNA,并预测出42个对应的差异表达靶基因。GO富集分析结果显示,靶基因主要参与胶原蛋白分解代谢、胞外基质组织、膜组织、胶原纤维组织和细胞对氨基酸刺激的反应等生物学过程;KEGG信号通路分析结果显示,miRNAs和相应靶基因所对应的信号通路主要集中在18条信号通路上,主要与miRNAs在肿瘤方面、糖尿病并发症中的年龄-种族信号通路和蛋白质消化与吸收有关。PPI网络筛选出的3个成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化核心基因分别为苏氨酸激酶1、雌激素受体1和β-连环蛋白。结论共筛选出与TGF-β1致MRC-5细胞转分化相关的5个差异表达的miRNAs、42个靶基因、18条信号通路和3个核心基因,可为包括尘肺病及肺纤维化在内的多种疾病的治疗和研究提供新的参考。 展开更多
关键词 成纤维细胞 转化生长因子-Β1 mrc-5细胞 转分化 生物信息学 肺纤维化 尘肺病
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国产与进口MEM培养基培养MRC-5细胞效果的比较 被引量：1
13
作者 陈嘉雯 王佳凤 +3 位作者 徐俊峰 周欣 曲成 陈维金 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期639-641,共3页
目的对国产及进口MEM培养基培养MRC-5细胞的效果进行比较。方法用国产及进口MEM培养基培养37代MRC-5细胞,于显微镜下观察培养24、48、72 h后的细胞的生长情况,并对细胞在33~37代传代过程中的细胞活性进行检测;以0.008 MOI的Oka株水痘-... 目的对国产及进口MEM培养基培养MRC-5细胞的效果进行比较。方法用国产及进口MEM培养基培养37代MRC-5细胞,于显微镜下观察培养24、48、72 h后的细胞的生长情况,并对细胞在33~37代传代过程中的细胞活性进行检测;以0.008 MOI的Oka株水痘-带状疱疹病毒感染37代MRC-5细胞,观察细胞病变情况。结果国产及进口MEM培养基培养的37代MRC-5细胞,细胞形态、贴壁、伸展、牵手、成网、单层等生长情况均相似,细胞数量也无明显差异,均可使细胞保持较高的活力,两组间细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;细胞病变均比较典型、广泛,病变程度均在70%以上,且细胞完整,未见明显撕裂现象。结论国产及进口MEM培养基均可满足MRC-5细胞的生长和病毒培养的宿主条件。 展开更多
关键词 MEM培养基 mrc-5细胞 细胞培养
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羊栖菜硫酸多糖通过PI3K/AKT通路抑制H2O2诱导的MRC-5细胞氧化损伤 被引量：2
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作者 茹珂烨 阳东昊 +5 位作者 张雨哲 刘涛瑜 虞程翔 屠玉槿 丁浩淼 汪财生 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2023年第6期21-28,共8页
目的阐明羊栖菜硫酸多糖(SFPSⅢ)对过氧化氢(H2O2)诱导的正常人胚肺细胞(MRC-5)氧化应激损伤的保护作用及潜在分子机制。方法通过噻唑蓝(MTT)法检测MRC-5细胞暴露于H2O2或SFPSⅢ后的活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态,流式细胞仪测定... 目的阐明羊栖菜硫酸多糖(SFPSⅢ)对过氧化氢(H2O2)诱导的正常人胚肺细胞(MRC-5)氧化应激损伤的保护作用及潜在分子机制。方法通过噻唑蓝(MTT)法检测MRC-5细胞暴露于H2O2或SFPSⅢ后的活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态,流式细胞仪测定细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验测定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量。通过免疫印迹Western bloting检测相关蛋白水平。结果H2O2处理使MRC-5细胞活力显著降低(P<0.05),而SFPSⅢ(200~600μg/mL)干预可明显增强MRC-5细胞活力。酶联免疫法结果表明,SFPSⅢ干预抑制H2O2诱导的细胞内NO和MDA的过度分泌,并增加了H2O2诱导的细胞内SOD和GSH-Px的活力。免疫印迹结果表明,120μmol/L H2O2处理的细胞中p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平下调,而p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平在SFPSⅢ处理的MRC-5细胞中被逆转。结论SFPSⅢ对H2O2诱导的MRC-5细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能是激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥其抗凋亡作用。研究结果为羊栖菜高附加值产品开发及天然、安全抗氧化功能因子的筛选提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 羊栖菜 硫酸多糖 mrc-5细胞 PI3K/AKT/mTOR信号通路
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干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响 被引量：2
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作者 杨骁 姜承瀚 +8 位作者 孙博 谷铁军 万明明 孙捷 丁雪 王岑嵘 周恩同 姜皓 苏维恒 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期21-25,31,共6页
目的通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平,以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平,并提高VZV疫苗产量。方法通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建IFN受体1(int... 目的通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平,以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平,并提高VZV疫苗产量。方法通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建IFN受体1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的MRC-5细胞系(MRC-5^(IFNAR1-))。采用qRT-PCR法检测MRC-5^(IFNAR1-)细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量,同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量,评价基因沉默效果。通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列。采用qRT-PCR法和空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)试验,对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5^(IFNAR1-)细胞系中的复制情况,评价MRC-5^(IFNAR1-)细胞系对VZV复制的影响。结果MRC-5^(IFNAR1-)细胞系生长状态与MRC-5细胞一致,IFNAR1 mRNA相对表达量降低73%;VZV感染后MRC-5^(IFNAR1-)细胞系中IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量比MRC-5细胞分别降低了61%和90%;VZV感染后168 h,病毒DNA复制水平增加5.7倍,病毒滴度增加4倍。结论成功建立了MRC-5^(IFNAR1-)细胞系,可作为增加基于人二倍体细胞疫苗产量的潜在方案,为扩大VZV疫苗生产提供了参考。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 人二倍体mrc-5细胞 干扰素应答 基因沉默
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黄芪多糖对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用 被引量：11
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作者 陈珏晓 王桂芬 +1 位作者 李丽 张鹏霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1062-1066,共5页
目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养... 目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、不同浓度H2O2组、(200、400、800)mg/L APS处理组。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型,使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率,待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后,用最佳H2O2浓度与不同浓度的APS共同作用于MRC-5细胞,确定APS对氧化损伤MRC-5细胞的最佳作用浓度;采用免疫荧光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)含量反映MRC-5细胞DNA氧化损伤情况;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的水平;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化。结果实验表明,H2O2孵育MRC-5细胞24 h,可诱导细胞损伤,使细胞存活力下降,且具有浓度依赖性。800μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型。与H2O2引起氧化损伤的模型组相比,200 mg/L的APS明显抑制H2O2引起的APE/Ref-1、TRX蛋白表达下调,降低8-OHd G含量,抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤,APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和TRX的表达,APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 黄芪多糖 人胚肺成纤维细胞 无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1 硫氧还蛋白
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MRC-5人二倍体细胞培养OKa株水痘病毒的研究 被引量：4
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作者 殷月娣 徐建军 +5 位作者 王宪明 张英 沈谊清 王亮 程鹏飞 陈志慧 《传染病信息》 2001年第2期71-72,共2页
取自美国菌种保藏中心(ATCC)的MRC-5人二倍体细胞建立工作细胞库。按生物制品《人二倍体细胞建株、检定及制备疫苗规程》要求进行全面检定,证实其不携带外源因子,无致肿瘤源性,染色体正常,在该细胞上连续传代及培养的OKa株水痘病毒,其... 取自美国菌种保藏中心(ATCC)的MRC-5人二倍体细胞建立工作细胞库。按生物制品《人二倍体细胞建株、检定及制备疫苗规程》要求进行全面检定,证实其不携带外源因子,无致肿瘤源性,染色体正常,在该细胞上连续传代及培养的OKa株水痘病毒,其繁殖特性甚佳,细胞病变规律,病毒滴度稳定,是用于制备疫苗的良好细胞基质。 展开更多
关键词 MRC5人二倍体细胞 OKa株水痘病毒 培养 疫苗 病毒滴度
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FOXM1在高糖诱导的MRC-5细胞胶原合成中的作用
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作者 赵盛男 张振旺 +1 位作者 尧青 刘超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1032-1038,共7页
目的探讨转录因子FOXM1在高糖诱导MRC-5细胞胶原合成中的作用。方法①通过CCK8探究MRC-5细胞高糖诱导模型的最适时间和浓度:时间梯度为6、12、24、48、72 h;浓度梯度为5.5、15、30、45 mmol·L^(-1),甘露醇30 mmol·L^(-1)为高... 目的探讨转录因子FOXM1在高糖诱导MRC-5细胞胶原合成中的作用。方法①通过CCK8探究MRC-5细胞高糖诱导模型的最适时间和浓度:时间梯度为6、12、24、48、72 h;浓度梯度为5.5、15、30、45 mmol·L^(-1),甘露醇30 mmol·L^(-1)为高渗对照组。②检测高糖诱导对MRC-5细胞胶原合成的影响:将细胞分为正常对照组、高渗对照组(甘露醇30 mmol·L^(-1))和高糖(30 mmol·L^(-1))组,通过Western blot和qPCR法检测胶原合成相关因子(Fn、COLⅠ、COLⅢ、α-SMA、MMP9、TIMP1)和TGF-β信号通路相关因子(TGF-β1、p-Smad2/Smad2)的表达。③探讨FOXM1在高糖促进胶原合成中的作用:将细胞分为正常对照组、高渗对照组(甘露醇30 mmol·L^(-1))、高糖(30 mmol·L^(-1))组和高糖(30 mmol·L^(-1))+硫链丝菌素(1μmol)组,Western blot和qPCR法检测FOXM1和胶原合成相关因子的表达。结果甘露醇对MRC-5细胞增殖没有明显影响,30 mmol·L^(-1)高糖培养MRC-5细胞24 h时,细胞增殖比对照组明显降低;高糖培养MRC-5细胞促进COLⅠ、COLⅢ和FOXM1等因子的表达;加入硫链丝菌素后,FOXM1的表达明显被抑制,胶原合成相关因子的蛋白表达及mRNA水平较高糖组也均有下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FOXM1是高糖诱导MRC-5细胞胶原合成增加的一个相关因子。 展开更多
关键词 FOXM1 高糖 mrc-5 胶原合成 TGF-Β信号通路 肺纤维化
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山柰酚对博来霉素诱导小鼠肺纤维化、MRC-5细胞胶原蛋白生成的影响 被引量：8
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作者 王远敏 罗敏 +2 位作者 苏穆 李美燕 徐明兴 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3425-3428,共4页
目的探讨山柰酚对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的预防作用和对MRC-5细胞胶原蛋白生成的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮组(100 mg/kg)、山柰酚组(20 mg/kg),每组10只。在假手术组气管内注射生理盐水,模型组气... 目的探讨山柰酚对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的预防作用和对MRC-5细胞胶原蛋白生成的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮组(100 mg/kg)、山柰酚组(20 mg/kg),每组10只。在假手术组气管内注射生理盐水,模型组气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型。术后第2天开始给药,连续28 d,检测小鼠呼吸功能、肺组织羟脯氨酸水平,Massson染色观察肺组织胶原活性,免疫组化法检测肺组织TGF-β1、ɑ-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量。培养MRC-5细胞株,设置空白组、TGF-β1组和山柰酚20、40、80μmol/L组,分别干预48 h后,CCK-8检测山柰酚对MRC-5细胞抑制率,ELISA检测培养基中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原水平。结果与模型组比较,山柰酚能改善博来霉素诱导小鼠肺纤维化后的呼吸功能,减轻肺组织胶原沉积,降低肺组织羟脯氨酸水平和TGF-β1、ɑ-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达(P<005,P<001)。细胞实验表明,山柰酚能抑制TGF-β1对MRC-5细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型胶原生成(P<005,P<001)。结论山柰酚能预防博来霉素诱导小鼠肺纤维化,抑制体外MRC-5细胞株增殖、胶原生成。 展开更多
关键词 山柰酚 肺部纤维化 细胞外基质 胶原沉积 mrc-5细胞
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银染法检测短串联重复序列(STR)位点PCR产物鉴别MRC-5细胞
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作者 丁筱骏 许文婷 何春艳 《微生物学免疫学进展》 2006年第4期34-36,共3页
通过采用银染法鉴别短串联重复序列聚合酶链式反应(STR)位点的PCR产物来鉴别人二倍体细胞MRC-5株主细胞库、工作细胞库及限制代细胞。运用PCR方法对细胞库的9个STR位点(CSF1PO、TPOX、TH01、F13A01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S... 通过采用银染法鉴别短串联重复序列聚合酶链式反应(STR)位点的PCR产物来鉴别人二倍体细胞MRC-5株主细胞库、工作细胞库及限制代细胞。运用PCR方法对细胞库的9个STR位点(CSF1PO、TPOX、TH01、F13A01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317)和性别鉴别位点Am elogen in进行扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染法显影技术,检测MRC-5主细胞库、工作细胞库及限制代细胞的遗传标记。与ATCC公布的MRC-5的荧光STR图谱的8个STR位点和Am elogen in位点相比,MRC-5主细胞库、工作细胞库、限制代细胞的银染STR图谱的9个STR位点和Am elogen in位点,荧光法和银染法重叠的8个位点(CSF1PO、TPOX、TH01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317和Am elogen in)数据完全吻合,说明细胞鉴别试验成立。STR图谱作为细胞鉴别的方法简单、易行、准确。 展开更多
关键词 银染法 STR PCR mrc-5细胞 细胞鉴别
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