高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值 被引量：9

1

作者 赵冰 侯萍 +4 位作者 黄静 贺文从 欧喜超 刘东鑫 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第12期1303-1308,共6页

目的评价以结核分枝杆菌（MTB）分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法（high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA）用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本，分别进... 目的评价以结核分枝杆菌（MTB）分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法（high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA）用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本，分别进行BACTEC MGIT960液体培养（简称“MGIT960培养”）、MTB／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统（Gene Xpert MTB／RIF，简称“Xpert检测”）和HI-ELISA检测，通过与MGIT 960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能。结果本研究97份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36．08％（35／97）、32．99％（32／97）；与MGIT 960培养比较，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88．57％（31／35）、98．39％（61／62）、94．85％（92／97）。在Xpert检测阳性的66份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51．51％（34／66）、48．48％（32／66）；与MGIT 960培养相比，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91．18％（31／34）、96．88％（31／32）、93．93％（62／66）。Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中，仅有1份标本的MGIT960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB，其他30份标本检测结果全部相符，符合率为96．77％（30／31）。结论HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌，对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 分泌蛋白 mpb64 酶联免疫吸附测定 敏感性与特异性 诊断

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直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值 被引量：5

2

作者 孟繁荣 谢贝 +6 位作者 郑小凌 尹小毛 蔡杏珊 许婉华 彭湘明 赖艳榕 刘志辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第23期4267-4269,共3页

目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种... 目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价。结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%;MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%)。结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究。 展开更多

关键词 结核 mpb64 方法学评价

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基因免疫制备牛分枝杆菌MPB64抗原单克隆抗体 被引量：3

3

作者 刘建东 刘思国 +4 位作者 王春来 宫强 王勇 迟磊 赵昆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期870-873,共4页

为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选... 为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选出针对牛分枝杆菌分泌蛋白MPB64的单克隆抗体一株,并制备了腹水,经鉴定腹水效价达到1∶10240,采用硫酸铵沉淀法纯化腹水,纯化抗体效价为1∶8000,为今后研制分枝杆菌鉴定技术奠定基础。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌mpb64蛋白 基因免疫 单克隆抗体

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MPB64抗原检测对分枝杆菌菌型快速鉴别的价值探讨 被引量：6

4

作者 顾欣荣 陈俊林 +2 位作者 顾德林 施军卫 王小平 《江苏预防医学》 CAS 2009年第3期34-35,共2页

关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 mpb64抗原 胶体金法

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MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定 被引量：1

5

作者 徐丹 姜潮 +3 位作者 陈昱 艾君 王晓艳 李校堃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期921-926,共6页

目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB6... 目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 mpb64 杆状病毒表达系统 Sf 9细胞 结核分枝杆菌

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应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的初步研究 被引量：7

6

作者 何霞 谭守勇 +3 位作者 蔡杏姗 樊晖 罗春明 刘志辉 《国际医药卫生导报》 2007年第18期14-15,107,共3页

目的探讨应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用抗酸染色涂片阳性样本进行分枝杆菌培养前处理,接种于BacT/Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统培养基中。在培养监测的同时,每天定时测定培养液中的结核... 目的探讨应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用抗酸染色涂片阳性样本进行分枝杆菌培养前处理,接种于BacT/Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统培养基中。在培养监测的同时,每天定时测定培养液中的结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64,比较它们可指示有结核分枝杆菌生长在时间上的差异。结果在12例涂片阳性样本中,仪器系统对12例样本都指示培养阳性结果,其中10例样本MPB64检测阳性;对12例样本进行分枝杆菌菌鉴定,培养指示阳性、MPB64指示阴性的2例样本为非结核分枝杆菌,培养与MPB64均指示阳性的10例样本为结核分枝杆菌;仪器系统指示培养阳性的平均时间为11.5天,MPB64检测指示有结核分枝杆菌生长的平均时间为6.5天。结论应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64来指示有无结核分枝杆菌生长具有操作简便、报告结果快速的特点,值得更进一步研究。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核分泌 蛋白 mpb64 免疫色谱法 抗体 单克隆

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结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定 被引量：2

7

作者 马荣 陈振 +3 位作者 黑龙 赵志军 徐广贤 戈朝晖 《宁夏医科大学学报》 2015年第9期1013-1016,共4页

目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛... 目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛选确认的阳性细胞株进行亚克隆,杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,通过间接ELISA、Western Blot鉴定该单克隆抗体。结果通过杂交瘤技术获得10株可稳定分泌抗MPB64单克隆抗体的细胞株。以命名的"1A3"单抗细胞株进行腹水制备,经鉴定腹水效价>1∶720000,经纯化抗体效价约为1∶720000,抗体浓度2.15mg·m L-1。结论成功制备和获得了抗MPB64单克隆抗体的细胞株,为MPB64单克隆抗体制备和鉴定奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 mpb64 单克隆抗体 杂交瘤技术

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结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64表达纯化 被引量：2

8

作者 石华 戈朝晖 +4 位作者 贾伟 马小明 牛宁奎 董辉 王自立 《宁夏医科大学学报》 2011年第8期704-707,共4页

目的表达并纯化结核分枝杆菌重组蛋白pET32a-MPB64。方法将构建好的表达载体pET32a-MPB64测序后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)内。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。结果质粒pET32a-MPB6... 目的表达并纯化结核分枝杆菌重组蛋白pET32a-MPB64。方法将构建好的表达载体pET32a-MPB64测序后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)内。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。结果质粒pET32a-MPB64经测序,结果与Geneback中的结核分枝杆菌标准菌株H37RV核苷酸序列基本一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以可溶性的形式表达,其分子质量约为24 kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经MagExtractor-His-tag-磁珠纯化试剂盒纯化后浓度达2.49mg.mL-1;Western-blot结果显示融合蛋白可与抗His-Tag标签的单克隆抗体结合。结论成功得到高纯度的重组目的蛋白pET32a-MPB64,为进一步制备其单克隆抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 mpb64 免疫印迹 蛋白表达纯化

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痰液中MPB64蛋白检测在肺结核诊断中的临床应用及其常见菌对检测影响的研究 被引量：3

9

作者 刘少娟 孟繁荣 +3 位作者 刘志辉 彭湘明 赖艳榕 秦娟 《国际医药卫生导报》 2012年第15期2139-2142,共4页

目的探讨痰液MPB64蛋白检测在临床诊断肺结核的价值及常见菌对MPB64检测的影响。方法以11例涂片抗酸染色阳性且胸片出现肺部阴影的患者的痰标本为实验组，以11例涂片抗酸染色阴性且胸片无肺部阴影的患者的痰标本为对照组，分别进行免疫... 目的探讨痰液MPB64蛋白检测在临床诊断肺结核的价值及常见菌对MPB64检测的影响。方法以11例涂片抗酸染色阳性且胸片出现肺部阴影的患者的痰标本为实验组，以11例涂片抗酸染色阴性且胸片无肺部阴影的患者的痰标本为对照组，分别进行免疫胶体金法检测MPB64蛋白、荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测结核杆菌DNA和涂片抗酸染色，对3种检测方法的检测结果进行比较、分析；对临床送检痰标本中分离的65株常见菌，用蛋白胨水增菌24h，采用免疫胶体金法检测MPB64。结果实验组中，免疫胶体金法检测MPB64蛋白、荧光定量PCR检测结核杆菌DNA的敏感度分别为72．72％、45．45％，免疫胶体金法显著高于荧光定量PCR法，但其特异度（45．45％）和准确度（59．09％）则低于荧光定量PCR（100．00％、72．73％）；MPB64蛋白检测与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率分别为50．00％、59．09％；25株金黄色葡萄球菌增菌液中MPB64检测试验阳性，阳性率100％，其余菌株增菌液阴性。结论痰液中MPB64蛋白检测快速、简便、敏感性高，但特异性低；金黄色葡萄球菌菌株的存在可能造成对痰液MPB64检测的假阳性。 展开更多

关键词 肺结核 mpb64 常见菌 假阳性

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免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液MPB64对肺结核的诊断价值 被引量：1

10

作者 谢贝 方琼 +3 位作者 孟繁荣 郑小凌 高俊文 刘志辉 《现代医院》 2011年第7期76-77,共2页

目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏... 目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏培养基法结核分枝杆菌培养,比较分析3种方法的检测结果。结果 MPB64免疫胶体金法与荧光定量PCR法、改良酸性罗氏培养基法的符合率分别为58.03%和57.51%;以临床诊断结果为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为61.95%、87.50%、72.54%。以荧光定量PCR法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为49.30%、63.11%、58.03%;以改良酸性罗氏培养基法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为48.21%、61.31%、57.51%。结论免疫胶体金法检测MPB64应用于支气管肺泡灌洗液对肺结核的临床诊断有辅助诊断价值,但检测的假阳性、假阴性值得进一步分析研究。 展开更多

关键词 支气管肺泡灌洗液 免疫胶体金法 结核分枝杆菌 mpb64

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牛结核杆菌MPB64蛋白的真核表达 被引量：1

11

作者 宫强 曲宁 刘思国 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期214-216,共3页

利用PCR技术扩增出牛结核杆菌mpb64基因片段,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCM64,将该重组质粒转染SP2/0细胞,间接免疫荧光试验和Western blotting检测目的基因的表达情况。结果表明,在转染了重组质粒pCM64的SP2/0细胞中出... 利用PCR技术扩增出牛结核杆菌mpb64基因片段,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCM64,将该重组质粒转染SP2/0细胞,间接免疫荧光试验和Western blotting检测目的基因的表达情况。结果表明,在转染了重组质粒pCM64的SP2/0细胞中出现绿色荧光,转染的SP2/0细胞泳道23 kDa处出现特异条带,说明mpb64基因在SP2/0细胞中成功进行了瞬时表达。 展开更多

关键词 牛结核杆菌 mpb64基因 表达

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MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用 被引量：1

12

作者 施旭东 张文海 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期376-377,共2页

目的研究MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法用MPB64免疫胶体金快速检测法对7种分枝杆菌标准菌株和分枝杆菌快速荧光培养法培养阳性标本进行菌种鉴定,并同时与传统的PNB改良罗氏(L-J)法鉴定结果进行比较。... 目的研究MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法用MPB64免疫胶体金快速检测法对7种分枝杆菌标准菌株和分枝杆菌快速荧光培养法培养阳性标本进行菌种鉴定,并同时与传统的PNB改良罗氏(L-J)法鉴定结果进行比较。结果结核杆菌标准菌株H37Rv、牛结核杆菌MPB64胶体金法与L-J法均为阳性,其余5种非结核分枝杆菌均为阴性;40株临床分离菌株两法结果符合率为100%。MPB64胶体金法在培养结果报告的当天即可作出鉴定结果,较传统方法提前了28d。结论MPB64免疫胶体金法在分枝杆菌菌种鉴定中能快速有效地区分结核杆菌与非结核分枝杆菌。 展开更多

关键词 免疫胶体金法 分枝杆菌 菌种鉴定 mpb64

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免疫胶体金法检测MPB64抗原在结核病实验室诊断中的价值 被引量：2

13

作者 王剑 《徐州医学院学报》 CAS 2010年第7期444-446,共3页

目的通过与传统的结核病实验室诊断方法(直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养、PCR)的比较,评价免疫胶体金法检测结核杆菌MPB64抗原在结核病快速诊断中的应用价值。方法收集158例确诊为结核病患者的临床标本,分别用直接涂片抗酸染色、改良... 目的通过与传统的结核病实验室诊断方法(直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养、PCR)的比较,评价免疫胶体金法检测结核杆菌MPB64抗原在结核病快速诊断中的应用价值。方法收集158例确诊为结核病患者的临床标本,分别用直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养基培养、PCR、免疫胶体金法检测米氏7H9培养产物中的MPB64抗原检测结核分支杆菌,并对结果进行比较分析。结果涂片阳性率为10.76%,改良罗氏培养阳性率为20.89%,PCR检测阳性率为56.33%,免疫胶体金法检测阳性率为41.14%。结论免疫胶体金法检测米氏7H9液体培养产物中的MPB64抗原可以作为一种较为敏感、快速简便的检测结核分支杆菌感染的方法,有助于结核病临床快速诊断。 展开更多

关键词 mpb64抗原 结核病 快速诊断

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牛分枝杆菌MPB64基因的克隆及序列分析

14

作者 王春芳 姜秀云 +1 位作者 王春凤 何昭阳 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期201-203,207,共4页

以牛分枝杆菌ValleeⅢ染色体DNA为模板,以MPB64成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得了642 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体。经鉴定证实,成功地构建了pGEM-T-64克隆载体。序列分析结果表明:该基因序列与Myc... 以牛分枝杆菌ValleeⅢ染色体DNA为模板,以MPB64成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得了642 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体。经鉴定证实,成功地构建了pGEM-T-64克隆载体。序列分析结果表明:该基因序列与Mycobacterium bovis BCG Tokyo的MPB64成熟蛋白基因序列同源性为100%。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 mpb64基因 克隆 序列分析

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MPB64蛋白检测结核分枝杆菌复合群方法学评价

15

作者 钱雪琴 沈芳 +3 位作者 范小勇 朱文芳 邓桂林 卢水华 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第5期618-619,623,共3页

目的对应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群进行方法学评价。方法取123株来自BACTECMGIT960系统的液体培养和中性罗氏固体培养基的菌株为检测样本，应用抗MPB64单克隆抗体采用胶体金法进行MPB64分泌蛋白检测，而后与传统菌群... 目的对应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群进行方法学评价。方法取123株来自BACTECMGIT960系统的液体培养和中性罗氏固体培养基的菌株为检测样本，应用抗MPB64单克隆抗体采用胶体金法进行MPB64分泌蛋白检测，而后与传统菌群鉴定结果相比较。结果两种鉴定方法相比，成人标本分离株符合率98．8％（81／82），0岁-4岁儿童标本分离株符合率为0。结论应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群具有操作简单、快速，适于各级实验室使用；但对来自儿童的分枝杆菌分离株，最好是选用分子生物学方法或传统生化方法进行菌群鉴定，以免延误儿童卡介苗感染的诊断和治疗。 展开更多

关键词 mpb64分泌蛋白 结核分枝杆菌复合群 菌群鉴定 方法学评价 卡介苗

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结核分枝杆菌MPB64抗原的制备与纯化

16

作者 陈超 《医学信息（医学与计算机应用）》 2014年第7期215-216,共2页

根据GenBank结核分枝杆菌基因序列设计引物扩增出 MPB64基因,连接至原核表达载体 pET32a(+),转化至大肠杆菌 BL21(DE3),经过 IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,克隆的MPB64基因同源率为98.36%,重组蛋白以可溶形式... 根据GenBank结核分枝杆菌基因序列设计引物扩增出 MPB64基因,连接至原核表达载体 pET32a(+),转化至大肠杆菌 BL21(DE3),经过 IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,克隆的MPB64基因同源率为98.36%,重组蛋白以可溶形式在细胞周质中表达,大小为24KDa。采用切胶回收水平电泳洗脱纯化出的MPB64具有反应原性。为进一步研究结核快速诊断试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 mpb64 原核表达 切胶纯化

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MPB64免疫胶体金法在新发肺结核患者中的应用 被引量：4

17

作者 戴小丽 许燕燕 +1 位作者 刘涛 侯彦强 《国际医药卫生导报》 2021年第3期396-399,共4页

目的对免疫胶体金法、痰涂片抗酸染色法以及上海市疾病预防控制中心结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC)菌群鉴定等3种检测结果进行比较,评价MPB64免疫胶体金法在疑似新发肺结核患者中的临床应用价值。方法选取... 目的对免疫胶体金法、痰涂片抗酸染色法以及上海市疾病预防控制中心结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC)菌群鉴定等3种检测结果进行比较,评价MPB64免疫胶体金法在疑似新发肺结核患者中的临床应用价值。方法选取2018年9月至2019年8月经MGIT 960液体分枝杆菌培养仪培养阳性的疑似新发肺结核患者210例,首先进行MPB64免疫胶体金法检测,然后将标本转种至固体中性罗氏培养基中,待菌落在固体培养基中长势良好时,将其送至上海市疾病预防控制中心结核病防治科进行分枝杆菌菌群鉴定(PNB法、TCH法和28℃培养试验)。最后,比较分析胶体金法与传统的痰涂片抗酸染色法在检测抗酸杆菌阳性率方面的差异,并比较胶体金法检测结果与上海市疾病预防控制中心菌群鉴定结果之间的差异,分析胶体金法在菌群鉴定方面的敏感性、特异性以及准确度。结果210例疑似新发患者中,痰涂片抗酸染色阳性率为48.57%(102/210),MPB64免疫胶体金法阳性率为90.00%(189/210)。经上海市疾病预防控制中心菌群鉴定,其中结核分枝杆菌复合群感染187例,阳性率为89.05%(187/210),非结核分枝杆菌复合群23例,占比为10.95%(23/210)。与上海市疾病预防控制中心菌群鉴定结果比较,胶体金法在确诊结核分枝杆菌复合群感染中的敏感性为97.86%(183/187),特异性为73.91%(17/23),准确度为95.24%(200/210)。结论MPB64免疫胶体金法作为一种敏感性、特异性、准确度均较高的结核分枝杆菌快速检测方法,操作简便、快速、无需特殊仪器设备,适合于各基层试验应用于肺结核病的临床诊断。 展开更多

关键词 mpb64 胶体金法 MGIT 960 结核分枝杆菌 快速诊断

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牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达 被引量：3

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作者 张秀华 刘思国 +6 位作者 宫强 王春来 王牟平 彭永刚 沈国顺 郭洋 郭设平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期43-46,共4页

以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠... 以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以 IPTG进行诱导,终浓度为1mmol／L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增 出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白 相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断 及新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 鉴定 SDS-PAGE电泳 重组表达质粒 核苷酸序列测定 PCR方法 基因组DNA 原核表达载体 PCR产物 相对分子量 大肠杆菌 IPTG 融合蛋白 新型疫苗 牛结核病 T载体 亚克隆 正确性 转化 酶切 诱导

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液体MGIT培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌 被引量：3

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作者 孙黎萍 何鑫 《生物技术世界》 2015年第12期12-13,共3页

目的观察液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌的应用价值。方法收集上海市某区级医院2013年4月至2013年10月肺结核门诊抗酸染色涂片阳性痰标本80例,分别用液体MGIT培养法与固体(L—J)培养法进行培养... 目的观察液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌的应用价值。方法收集上海市某区级医院2013年4月至2013年10月肺结核门诊抗酸染色涂片阳性痰标本80例,分别用液体MGIT培养法与固体(L—J)培养法进行培养阳性率和报阳时间比较分析;应用75株液体MGIT培养法与固体罗氏(L—J)培养法双阳菌株进行MPB64胶体金法和传统菌型鉴定比较分析。结果 80例抗酸染色涂片阳性痰标本,液体MGIT培养法阳性率97.5%,固体L-J培养法阳性率93.8.%,符合率96.3%(77/80);液体MGIT培养法平均报阳时间13.2天,固体L-J培养法平均报阳时间26.5天,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。分枝杆菌MPB64抗原胶体金法有较高的特异性和灵敏性,方法简便、快速,是分枝杆菌菌种鉴别的有效方法。结论液体MGIT培养法培养联合MPB64免疫肢体金法可作为较为敏感和特异的检测MTB感染的方法,并可以快速有效地区分MTB和NTM。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 mpb64 胶体金法 快速鉴定

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MPB64抗原检测对非结核分枝杆菌快速鉴别的意义 被引量：5

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作者 张帆 刘守江 +2 位作者 覃林珍 魏巍 王健 《中国热带医学》 CAS 2014年第10期1286-1287,共2页

目的探讨结核分枝杆菌MPB64抗原在快速鉴别非结核分枝杆菌的诊断中的应用价值。方法对89例痰结核分枝杆菌培养阳性标本,进行培养液结核分枝杆菌MPB64抗原免疫胶体金法检测,并对结果进行比较分析。结果25例确诊非结核性标本,抗原检测均阴... 目的探讨结核分枝杆菌MPB64抗原在快速鉴别非结核分枝杆菌的诊断中的应用价值。方法对89例痰结核分枝杆菌培养阳性标本,进行培养液结核分枝杆菌MPB64抗原免疫胶体金法检测,并对结果进行比较分析。结果25例确诊非结核性标本,抗原检测均阴性;64例确诊结核性标本中,62例抗原检测阳性,阳性率为96.9%。用MPB64抗原胶体金法检测非结核分枝杆菌,敏感性为96.9%,特异性为100%,诊断一致率为97.8%。结论分枝杆菌MPB64抗原胶体金法可快速鉴别结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌,具有高度的特异性和敏感性,是早期诊断与鉴别诊断非结核分枝杆菌感染的一种有价值的检测方法。 展开更多

关键词 mpb64抗原 非结核分枝杆菌 结核分枝杆菌 快速诊断

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