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基于APEX2邻近标记技术揭示了DCAF15作为MORF4L1的新型E3泛素连接酶
1
作者 田穗 贾兴隆 +2 位作者 张竞丹 谭敏佳 孙振亮 《中国生物工程杂志》 北大核心 2025年第8期53-65,共13页
MORF4L1作为染色质重塑与基因组稳定的核心调控因子,其蛋白质稳定性受泛素-蛋白酶体系统动态调控,但其特异性E3泛素连接酶尚未完全阐明。整合APEX2邻近标记技术与定量蛋白质组学,系统解析MORF4L1的互作网络,并鉴定其新型E3连接酶。通过... MORF4L1作为染色质重塑与基因组稳定的核心调控因子,其蛋白质稳定性受泛素-蛋白酶体系统动态调控,但其特异性E3泛素连接酶尚未完全阐明。整合APEX2邻近标记技术与定量蛋白质组学,系统解析MORF4L1的互作网络,并鉴定其新型E3连接酶。通过构建稳定表达Flag-APEX2-MORF4L1的HEK-293T细胞株,结合NEDD8激活酶(NAE)抑制剂MLN4924处理,筛选到112个高可信度相互作用蛋白。GO富集分析显示,差异蛋白显著富集于DNA甲基化依赖的异染色质形成及染色体分离调控通路,并首次揭示MORF4L1与mRNA代谢相关蛋白的广泛关联,提示其作为“染色质-RNA界面”调控因子的新功能。进一步的验证发现CRL4泛素连接酶复合体的底物识别亚基DCAF15直接结合并介导MORF4L1的多聚泛素化降解。Co-IP与TUBE牵拉沉淀实验(pull-down experiment)证实,DCAF15通过动态互作调控MORF4L1的蛋白质周转,且该通路可能独立于已报道的SCFFBXL18通路,共同维持其功能稳态。研究表明,APEX2技术凭借其活细胞原位标记与分钟级动态捕获能力,可有效解析低丰度瞬时互作(如E3酶-底物结合事件),为蛋白质泛素化调控研究提供了方法学范式。DCAF15-MORF4L1调控轴的发现,不仅拓展了对MORF4L1在癌症及代谢性疾病中的调控机制认知,更为靶向干预其蛋白质稳定性(如利用DCAF15分子胶药物)提供了新策略。 展开更多
关键词 APEX2 morf4L1 DCAF15 邻近标记 相互作用蛋白 蛋白质组学
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雌、雄驯鹿鹿茸顶端表皮组织Morf4l1基因cDNA克隆与表达分析 被引量：3
2
作者 王强辉 翟健程 +1 位作者 夏彦玲 李和平 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期77-84,共8页
为探索驯鹿(Rangifer tarandus)Morf4l1基因的生物学特性以及雌、雄驯鹿茸顶端表皮组织表达差异,揭示Morf4l1对鹿茸生长的重要生物学意义,采用RT-PCR技术和分子克隆技术成功获得驯鹿Morf4l1基因cDNA,以驯鹿Morf4l1基因cDNA为依据,展开... 为探索驯鹿(Rangifer tarandus)Morf4l1基因的生物学特性以及雌、雄驯鹿茸顶端表皮组织表达差异,揭示Morf4l1对鹿茸生长的重要生物学意义,采用RT-PCR技术和分子克隆技术成功获得驯鹿Morf4l1基因cDNA,以驯鹿Morf4l1基因cDNA为依据,展开生物信息分析和雌、雄驯鹿鹿茸表皮组织中表达差异的研究。结果表明:1)驯鹿Morf4l1基因CDS区全长为972bp,共编码323个氨基酸。2)驯鹿Morf4l1蛋白是一种相对分子量为37.20ku的不具跨膜结构的亲水性蛋白质,其二级结构主要以β转角为主。3)驯鹿Morf4l1编码蛋白氨基酸序列与其他18个物种该蛋白氨基酸序列发现相似度介于85%~100%,其中与白尾鹿相似度最高为100%,与原鸡相似度最低为85%,与其他亲缘关系较近物种(如牛、羊)的相似度能达到99%;结合系统进化树发现驯鹿Morf4l1基因在进化中高度保守,各物种之间的遗传距离不超过0.035。4)荧光定量结果显示雌性驯鹿茸顶端表皮组织Morf4l1基因相对表达量是雄性的2.127±0.032倍。本研究发现驯鹿Morf4l1基因在进化中高度保守,是鹿茸生长发育的关键基因,其在驯鹿鹿茸表皮组织中相对表达量受性别影响较为明显。 展开更多
关键词 驯鹿 morf4l1基因 CDNA克隆 生物信息分析 基因表达
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MORF4基因诱导HeLa细胞衰老
3
作者 蔡哲 石超 +2 位作者 范林洋 李晓阳 杨春蕾 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2544-2546,共3页
目的建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响。方法分别将pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株。SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化... 目的建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响。方法分别将pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株。SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化及细胞的增殖活力,两者共同确定MG-132处理的最适条件。Western印迹检测MORF4、PCNA基因的表达。结果质粒经酶切和测序鉴定,证明pcD-NA3.1(+)/Flag-MORF4质粒中含有目的基因序列;经浓度梯度1.25、2.5、5、10μmol/L MG-132处理转染细胞2、4、24、48 h后,SA-β-Gal染色和MTT检测结果显示10μmol/L MG-132处理24 h的转染细胞明显衰老,细胞活力降低;细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,增殖受到抑制;Western印迹检测结果显示MORF4蛋白在细胞中的含量明显升高,而与增殖相关基因PCNA表达下调。结论构建的pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4质粒在HeLa细胞中表达;并在MG-132作用下,使MORF4基因的表达产物积累,从而影响PCNA蛋白的表达量,抑制HeLa细胞的增殖活性,阻滞细胞周期的进行,导致细胞进入衰老状态。 展开更多
关键词 细胞衰老 morf4基因 PCNA 细胞增殖
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马鹿MORF4L2组织表达、基因克隆及生物信息学分析
4
作者 韩青 高仰 +3 位作者 吴玄烨 索婧媛 金庆梅 刘学东 《野生动物学报》 北大核心 2024年第4期774-780,共7页
MORF4L2是一种转录因子,通过形成NuA4组蛋白乙酰转移酶复合物来参与异染色质组装和组蛋白修饰,对细胞生长、增殖和凋亡起重要作用。为了探究马鹿(Cervus elaphus)鹿茸中MORF4L2所发挥的功能,使用qPCR技术检测鹿茸不同组织中MORF4L2基因... MORF4L2是一种转录因子,通过形成NuA4组蛋白乙酰转移酶复合物来参与异染色质组装和组蛋白修饰,对细胞生长、增殖和凋亡起重要作用。为了探究马鹿(Cervus elaphus)鹿茸中MORF4L2所发挥的功能,使用qPCR技术检测鹿茸不同组织中MORF4L2基因的表达水平,采用PCR克隆马鹿MORF4L2基因的CDS序列,通过多物种比对MORF4L2基因mRNA序列进行相似性分析并构建系统进化树,利用生物信息学方法预测分析MORF4L2编码蛋白的结构与理化性质。结果显示:MORF4L2在马鹿鹿茸的前软骨层中表达量最高;马鹿MORF4L2的mRNA序列较为保守,与加拿大马鹿(C.canadensis)中MORF4L2的相似性最高;马鹿MORF4L2基因CDS区全长为864 bp,编码287个氨基酸,理论等电点为9.73,为碱性蛋白;预测发现马鹿MORF4L2蛋白不存在信号肽,有30个潜在磷酸化位点;蛋白质结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成,主要定位在细胞核中。研究结果可为MORF4L2在马鹿鹿茸生长发育过程中所起的作用提供重要基础数据。 展开更多
关键词 马鹿 morf4L2 组织表达 基因克隆 生物信息学
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兔抗鼠MORF4L1 a多克隆抗体的制备与鉴定
5
作者 李芳 章元 张业 《基础医学与临床》 2022年第5期726-731,共6页
目的制备兔抗鼠MORF4L1 a变体的多克隆抗体以区分MORF4L1的a、b变体。方法根据对小鼠MORF4L1 a、b变体差异序列的抗原性、同源性的分析结果,合成MORF4L1 a的N端第52~66位的序列作为抗原肽(15肽,KSAVRPRRSEKSLKT),偶联KLH载体作为抗原免... 目的制备兔抗鼠MORF4L1 a变体的多克隆抗体以区分MORF4L1的a、b变体。方法根据对小鼠MORF4L1 a、b变体差异序列的抗原性、同源性的分析结果,合成MORF4L1 a的N端第52~66位的序列作为抗原肽(15肽,KSAVRPRRSEKSLKT),偶联KLH载体作为抗原免疫家兔,用Dot blot鉴定抗血清的特异性。对特异性良好的1号家兔抗血清进行抗原亲和层析纯化,用间接ELISA测定抗体效价。此外,构建MORF4L1 a、b变体的原核表达质粒和真核表达质粒。利用原核表达系统表达纯化后和在细胞中表达的MORF4L1 a、b蛋白进行Western blot鉴定抗体的特异性。结果1号免疫兔抗血清能特异性识别多肽;纯化后抗体的效价达到1∶512000;成功构建pGEX-4T-2-M4S、pGEX-4T-2-M4L原核表达质粒和pCMV-3Tag-6-M4S、pCMV-3Tag-6-M4L真核表达质粒,并在原核系统和真核系统中成功表达。该抗体能与MORF4L1 a特异结合。结论成功制备了效价高、特异性较强的兔抗鼠MORF4L1 a抗体,为进一步揭示MORF4L1可变剪接的生物学意义和不同变体的生物学功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 morf4L1 多克隆抗体 变体
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MORF4L1蛋白抗体制备及生物信息学分析
6
作者 丁圆圆 陈泽锋 +5 位作者 邱腾 施雯 任德续 王伟玲 吉敬 刘彬 《生物技术》 CAS 2024年第1期20-26,75,共8页
[目的]构建MORF4L1原核表达载体和纯化表达产物,制备MORF4L1蛋白抗体并进行生物信息学分析。[方法]利用PCR将MORF4L1基因片段酶切、克隆、转化至大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白。利用His-Tag技术纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新... [目的]构建MORF4L1原核表达载体和纯化表达产物,制备MORF4L1蛋白抗体并进行生物信息学分析。[方法]利用PCR将MORF4L1基因片段酶切、克隆、转化至大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白。利用His-Tag技术纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新西兰白兔,采集抗血清后通过硫酸铵沉淀法将多克隆抗体从抗血清中纯化,应用Western Blotting验证多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白的结合特异性。利用在线软件(GEPIA、UALCAN)进行生物信息学分析。[结果]成功构建了重组蛋白,蛋白纯化后在相对分子质量(Mr)43000位置处有单一条带,重组His-MORF4L1蛋白与His抗体发生特异性结合。制备的抗血清与MORF4L1蛋白特异性结合,纯化后仅在相对分子质量(Mr)55000和25000位置处有条带。纯化的多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白发生特异性反应。MORF4L1的表达与肝癌不良预后相关。[结论]成功构建MORF4L1蛋白及抗体,MORF4L1在肝癌中高表达预后差,对进一步研究MORF4L1蛋白的结构和生物学功能具有重要意义。 展开更多
关键词 致死因子4样蛋白1(morf4L1) 载体构建 重组蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 抗体制备 生物信息学分析
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细胞衰老相关基因的研究进展 被引量：2
7
作者 曲丹 蔡东联 《国外医学（卫生学分册）》 2008年第2期75-78,共4页
衰老是自然界一种复杂的、不同器官和系统呈现一系列特定变化的生命现象,是生命运动的自然过程,其机制很复杂。细胞衰老与个体衰老及细胞癌变等重要生理、病理现象密切相关。本文将对参与、影响和调控细胞衰老过程的重要基因,如MORF4、... 衰老是自然界一种复杂的、不同器官和系统呈现一系列特定变化的生命现象,是生命运动的自然过程,其机制很复杂。细胞衰老与个体衰老及细胞癌变等重要生理、病理现象密切相关。本文将对参与、影响和调控细胞衰老过程的重要基因,如MORF4、p21、p16和p53等近年来的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 衰老 基因 morf4 P53 P21 P16
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