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CRISPR-Cas12a及其介导的微同源靶向整合技术综述
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作者 王思佳 《生物化工》 2025年第3期210-215,220,共7页
CRISPR-Cas12a介导的微同源靶向整合(Microhomology-Dependent Targeted Integration,MITI)技术,因具备无须供体模板、精准插入及兼容非分裂细胞的优势,正在成为下一代基因定点整合的核心工具。同时其也存在脱靶与毒性风险、递送效率瓶... CRISPR-Cas12a介导的微同源靶向整合(Microhomology-Dependent Targeted Integration,MITI)技术,因具备无须供体模板、精准插入及兼容非分裂细胞的优势,正在成为下一代基因定点整合的核心工具。同时其也存在脱靶与毒性风险、递送效率瓶颈、前间隔序列邻近基序(Protospacer Adjacent Motif,PAM)依赖性限制的局限。Cas12a-MITI正从基础研究阶段迈向多场景临床与产业化应用,其未来发展需依托跨学科技术协同与伦理规范并进的双驱动。本文对该技术结构设计与开发策略、关键特性、典型应用、技术瓶颈与发展前景进行了综述,希望为相关研究人员提供一定参考。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas12a 微同源靶向整合(MITI) 微同源末端连接(mmej) 基因治疗 递送系统
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基于CRISPR编辑系统的DNA片段删除技术 被引量:8
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作者 谢先荣 曾栋昌 +2 位作者 谭健韬 祝钦泷 刘耀光 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期44-49,共6页
基于CRISPR/Cas9系统的基因组编辑技术已成为基因功能研究和遗传修饰的重要工具。在引导RNA的引导下,Cas9蛋白对基因组靶位点进行精准切割产生DNA双链断裂(DSB),借助细胞内的DSB修复机制,可实现基因组靶位点碱基的缺失、插入或者替换,... 基于CRISPR/Cas9系统的基因组编辑技术已成为基因功能研究和遗传修饰的重要工具。在引导RNA的引导下,Cas9蛋白对基因组靶位点进行精准切割产生DNA双链断裂(DSB),借助细胞内的DSB修复机制,可实现基因组靶位点碱基的缺失、插入或者替换,甚至发生片段删除。该文介绍了基于CRISPR/Cas9基因组编辑系统的DSB微同源末端连接修复方式(MMEJ)提高基因组DNA片段删除效率的方法,主要从靶点设计和突变检测方面展开详细描述。 展开更多
关键词 基因组编辑 CRISPR/Cas9 mmej 微同源 片段删除
原文传递
利用CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的B16细胞株
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作者 刘孟雨 周雅博 +1 位作者 黄波 吕家迪 《基础医学与临床》 2021年第3期318-324,共7页
目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后... 目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后一个外显子上;用流式细胞测量术、PCR、免疫荧光及活细胞成像来检测CSDE1-EGFP是否插入成功,检验EGFP的荧光强弱与CSDE1的表达高低是否一致;用Transwell小室法、小鼠荷瘤模型实验观察低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株之间的功能差异。结果分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,检测出EGFP表达强弱与CSDE1表达高低一致。观察到CSDE1蛋白表达量不同的B16细胞株在功能上有所差异。结论为研究CSDE1在其他肿瘤细胞内的动态定位以及因表达量不同而产生的功能差异,新型CRISPR/PITCH系统提供了快速有效的直观方法。 展开更多
关键词 CRISPR/PITCH系统 CSDE1 微同源末端连接(mmej) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
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DNA polymerase θ (POLQ):A druggable DNA polymerase for homologous recombination-deficient cancer cells
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作者 MERAN KESHAWA EDIRIWEERA 《BIOCELL》 SCIE 2023年第3期441-444,共4页
Irregularities in the DNA repair pathways are frequently observed in cancer.Dysregulated DNA repair pathways support growth advantages to tumor cells.DNA polymerase-theta(POLQ)is an error-prone DNA polymerase involved... Irregularities in the DNA repair pathways are frequently observed in cancer.Dysregulated DNA repair pathways support growth advantages to tumor cells.DNA polymerase-theta(POLQ)is an error-prone DNA polymerase involved in double-strand break repair through microhomology-mediated end joining(MMEJ).POLQ also mediates translesion DNA synthesis and it is largely not expressed in normal cells.POLQ is overexpressed in a range of cancer cells,including homologous recombination(HR)deficient cancer cells.In HR deficient cells,MMEJ is crucial as a backup DNA repair pathway,indicating the indispensable role of POLQ-mediated MMEJ in HR deficient cancer cells.In addition,POLQ is synthetic lethal with a number of oncogenes.This viewpoint highlights the potential role of POLQ as a new target in the treatment of HR-deficient tumors and aims to develop enthusiasm to introduce fundamental aspects of Molecular Biology and Biochemistry to basic research related to Molecular Life Sciences,Cell Biology and Genetics in Sri Lanka as Molecular Biology and Biochemistry fundamentals can still do wonders in modern research. 展开更多
关键词 POLQ CANCER mmej Targeted therapies
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