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急性单核细胞白血病新抗原MLAA-22的生物信息学分析及相关鉴定 被引量:7
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作者 周芙玲 张王刚 +2 位作者 蒙昕 陈刚 王剑利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期466-471,共6页
本研究采用生物信息学方法对SEREX法筛库获得的急性单核细胞白血病抗原新基因MLAA-22进行分析,并进一步做基因表达鉴定。通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索MLAA-22基因的相关信息,分析MLAA-22抗原CTL表位,制备其多克隆抗体... 本研究采用生物信息学方法对SEREX法筛库获得的急性单核细胞白血病抗原新基因MLAA-22进行分析,并进一步做基因表达鉴定。通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索MLAA-22基因的相关信息,分析MLAA-22抗原CTL表位,制备其多克隆抗体;利用荧光定量PCR及免疫印迹鉴定的方法,在转录翻译水平检测该基因的表达。结果表明:肿瘤抗原新基因MLAA-22 cDNA全长为2.0kb,定位于染色体17q11.2,编码631个氨基酸,蛋白分子量约72.4kD,非分泌型,亚细胞定位在胞浆,属于不稳定蛋白,但具有一定的亲水和热稳定性,无信号肽。MLAA-22有多个基序(motif),可能在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中具有重要作用。应用Protean等软件分析选取了序列543-556位作为MLAA-22的抗原表位,采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽,将纯化后的MLAA-22预测抗原多肽通过C末端Cys的-SH与KLH偶联,免疫兔子,制备相应的多抗,ELISA法检测抗体效价1∶8000。Real-time PCR和Western blot检测结果显示MLAA-22在M5患者中有不同程度的表达,且表达量高于正常人,在其他血液肿瘤细胞中低表达,但在胃、肾和前列腺癌等组织中不表达。结论:mlaa-22是一个新的急性单核细胞白血病相关抗原新基因,有进一步研究的价值。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 mlaa-22 SEREX 生物信息学
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MLAA-22在急性单核细胞白血病中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 古流芳 李月 +1 位作者 崔晓光 曹星梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第17期2753-2756,共4页
目的:检测MLAA-22基因及其编码蛋白在不同状态急性单核细胞白血病(M5)中的表达,探讨MLAA-22是否可作为M5特异性标记应用于临床。方法:收集临床初诊、完全缓解及复发的M5患者骨髓血,应用荧光实时定量PCR(QRT-PCR)及Western blot检测各组M... 目的:检测MLAA-22基因及其编码蛋白在不同状态急性单核细胞白血病(M5)中的表达,探讨MLAA-22是否可作为M5特异性标记应用于临床。方法:收集临床初诊、完全缓解及复发的M5患者骨髓血,应用荧光实时定量PCR(QRT-PCR)及Western blot检测各组MLAA-22 m RNA及蛋白质的表达,比较、分析基因及蛋白在各组中的表达变化,分析MLAA-22与M5疗效及转归的关系。结果:MLAA-22 m RNA在初诊的M5中特异性高表达,与完全缓解组表达差异具有统计学意义(P<0.01),与复发组差异无统计学意义(P>0.05)。MLAA-22蛋白在初诊的M5中显著高表达,完全缓解组MLAA-22蛋白表达较初诊患者明显下降。结论:MLAA-22 m RNA及蛋白在急性单核细胞白血病中特异性高表达,有望成为急性单核细胞白血病诊断、临床疗效评估、预后判断及微小残留病监测的特异性指标,值得深入研究。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 mlaa-22 完全缓解 微小残留灶
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急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22全长的克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 古流芳 张鹏宇 +2 位作者 曹星梅 何爱丽 张王刚 《实用癌症杂志》 2018年第12期1920-1923,1927,共5页
目的获得急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22cDNA全长序列,以便进行新基因的生物学功能研究。方法本研究采用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从人急性单核细胞白血病细胞株U937中克隆获得了的cDNA全长... 目的获得急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22cDNA全长序列,以便进行新基因的生物学功能研究。方法本研究采用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从人急性单核细胞白血病细胞株U937中克隆获得了的cDNA全长,并对MLAA-22进行了生物信息学分析及预测。结果 MLAA-22 cDNA全长3067bp,染色体定位于17q11. 2,基因包含12个外显子和11个内含子。生物信息学预测其有完整的ORF框,编码1个含有701个氨基酸残基的蛋白质,蛋白分子量约80. 5 kD,非分泌型,亚细胞定位为胞质蛋白。大多数capase酶均对MLAA-22无剪切作用。新的MLAA-22序列的5'端序列1-349 bp与KIAA0100 mRNA无同源性,但这一段序列与人类基因组序列完全匹配,属于MLAA-22的5'UTR(untranslated regions,UTR)。结论 MLAA-22基因cDNA全长3067 bp,5'UTR可能发生了选择性剪接,推测MLAA-22可能是一个和急性单核细胞白血病相关的新的选择性剪接变体,它参与了急性单核细胞白血病的发生,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 mlaa-22 RACE CDNA全长 生物信息学分析
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白血病相关抗原基因MLAA-22在不同白血病细胞系中的表达 被引量:1
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作者 崔鹤 张王刚 《内蒙古医科大学学报》 2015年第6期557-562,共6页
目的:探讨白血病相关抗原基因MLAA-22在不同白血病细胞系中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测MLAA-22基因在不同白血病中的表达水平。结果:MLAA-22基因在各白血病细胞系均有表达。结论:MLAA-22基因表达升高可能与急性单核细胞... 目的:探讨白血病相关抗原基因MLAA-22在不同白血病细胞系中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测MLAA-22基因在不同白血病中的表达水平。结果:MLAA-22基因在各白血病细胞系均有表达。结论:MLAA-22基因表达升高可能与急性单核细胞白血病、急性粒细胞白血病部分分化型、急性早幼粒细胞白血病、急性T淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病的发生均有关。 展开更多
关键词 mlaa-22 急性单核细胞白血病 实时荧光定量 PCR
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下调MLAA-22基因对U937细胞增殖与分化的影响
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作者 崔鹤 张王刚 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期519-524,共6页
目的研究MLAA-22基因的表达下调对U937细胞增殖及分化的影响。方法采用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关核酸酶9(Cas9)系统下调U937细胞MLAA-22基因的表达;CruiserTM酶切法检测单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)的活性... 目的研究MLAA-22基因的表达下调对U937细胞增殖及分化的影响。方法采用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关核酸酶9(Cas9)系统下调U937细胞MLAA-22基因的表达;CruiserTM酶切法检测单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)的活性;基因突变区PCR产物的TA克隆及测序法检测MLAA-22基因的突变率;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测CD11b的表达。结果CruiserTM酶切结果显示:所采用的CRISPR/Cas9系统的sgRNA序列能够高效地识别基因编辑靶点;TA克隆及测序结果显示:MLAA-22基因的突变率为61.3%;CCK-8检测结果显示:MLAA-22基因下调后,U937细胞的增殖明显受到抑制;流式细胞仪检测结果显示:MLAA-22基因下调后,CD11b阳性细胞率显著升高。结论 MLAA-22基因可能通过调控细胞分化而影响U937细胞增殖,从而促进急性单核细胞白血病的发生与发展。 展开更多
关键词 mlaa-22基因 细胞增殖 细胞分化 急性单核细胞白血病
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MLAA-22基因上游调控区的分离及启动子活性分析
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作者 崔鹤 张王刚 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第4期489-493,共5页
目的:分离MLAA-22基因上游转录调控区序列,进行启动子活性鉴定。方法:人工合成MLAA-22基因上游转录调控区序列MLAA-22(-999^+1)和MLAA-22(-1999^+1)两个区段,将两个区段插入到双荧光素酶报告基因表达载体psi CHECK-2的BglⅡ/Nhe I限制... 目的:分离MLAA-22基因上游转录调控区序列,进行启动子活性鉴定。方法:人工合成MLAA-22基因上游转录调控区序列MLAA-22(-999^+1)和MLAA-22(-1999^+1)两个区段,将两个区段插入到双荧光素酶报告基因表达载体psi CHECK-2的BglⅡ/Nhe I限制性内切酶位点中,构建双荧光素酶报告基因表达质粒,将重组质粒分别命名为psi CHECK-2-MLAA-22(-999^+1)和psi CHECK-2-MLAA-22(-1999^+1);采用双荧光素酶报告基因系统检测所分离区段的启动子活性。结果 :MLAA-22(-999^+1)和MLAA-22(-1999^+1)两个区段均具有较强的相对荧光素酶活性,并且MLAA-22(-999^+1)区段的相对荧光素酶活性明显高于MLAA-22(-1999^+1)区段。结论:MLAA-22基因上游转录调控区(-999^+1)区段将是今后我们进行MLAA-22基因上游转录调控区启动子活性研究的重点区域。 展开更多
关键词 mlaa-22基因 转录调控区 双荧光素酶报告基因 启动子
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