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小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达 被引量：3
1
作者 贾凤岐 王维锋 +4 位作者 江小玲 杨庆 卫立辛 杨广顺 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期494-497,共4页
目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MI... 目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MIP1-α共转化 BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的包装、扩增和纯化后 ,感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6 ,一步法提取细胞总 RNA,RT- PCR检测 m MIP1-α的 m RNA。琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中 m MIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性。 结果 :得到了携带 m MIP1-α的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 1 1 efu/ ml,在感染后的 Hepa1- 6细胞中检测到 m MIP1-α的表达 ,上清中 m MIP1-α的趋化指数为 6 .3。结论 :成功地构建了携带 m MIP1-α的重组腺病毒载体 ,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 mip1-α 腺病毒载体 细菌同源重组系统 基因治疗 动物实验
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大鼠MIP-1α基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其IRF-8结合元件的初步鉴定 被引量：1
2
作者 钱宝梅 王文博 +4 位作者 罗灿 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期10-15,共6页
目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α... 目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α基因启动活性的影响,同时筛选其可能的IRF-8结合元件。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠MIP-1α基因启动子序列,将MIP-1α基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建MIP-1α基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-FL)。将上述p GL3-MIP-1α-FL和本课题组已构建的大鼠IRF-8过表达质粒(pIRES2-IRF-8)共转染HEK-293T细胞,检测细胞内荧光素酶活性,确定IRF-8对MIP-1α基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件,并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-1～3)。将上述MIP-1α基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-8过表达质粒共转染HEK-293T细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定IRF-8的结合元件。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述pGL3-MIP-1α-FL(-1 400～+94 nt)质粒构建成功。将pGL3-MIP-1α-FL和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,过表达IRF-8可显著增加MIP-1α基因启动子活性。应用生物信息学软件预测发现MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件(-1 157～-1 144nt、-740～-734 nt、-683～-670 nt、-365～-359 nt、-249～-236 nt),并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-MIP-1α-1(-453～+94 nt)、p GL3-MIP-1α-2(-352～+94 nt)和pGL3-MIP-1α-3(-3～+94 nt)。将pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1～3和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,p GL3-MIP-1α-3的启动活性显著低于pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1和pGL3-MIP-1α-2。提示IRF-8可能结合在大鼠MIP-1α基因启动子的-352～-3 nt区域的IRF-8结合元件(-249～-236 nt)上。结论:本实验成功构建了大鼠MIP-1α基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-8在MIP-1α基因启动子上的可能结合元件,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎性蛋白-1α(mip-1α) 干扰素调节因子-8(IRF-8) 启动子
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巨噬细胞相关细胞因子在红斑狼疮患者血清中的表达及意义
3
作者 李健 郝飞 《皮肤病与性病》 2015年第2期63-66,共4页
目的研究巨噬细胞相关的细胞因子在不同类型红斑狼疮患者外周血中的表达及其意义。方法采用ELISA测定15例盘状红斑狼疮(DLE)、34例亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、47例系统性红斑狼疮患者(SLE)及17例正常对照者血清中IL-18、MIF、MIP1-α... 目的研究巨噬细胞相关的细胞因子在不同类型红斑狼疮患者外周血中的表达及其意义。方法采用ELISA测定15例盘状红斑狼疮(DLE)、34例亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、47例系统性红斑狼疮患者(SLE)及17例正常对照者血清中IL-18、MIF、MIP1-α水平,比较四组间的差异并分析与临床的相关性。结果 3种类型的红斑狼疮患者血清中IL-18、MIF、MIP1-α的表达水平均与正常相比差异显著(P<0.001),且不同类型间存在显著差异(P<0.05);SLE患者尿蛋白≥500mg/24hr、疾病活动度评分≥8分,ANA滴度≥1:320以及激素治疗前后血清中IL-18水平显著升高(P<0.05),且与SLE患者激素治疗剂量及呈显著负相关(r=-0.465,P=0.002)。结论巨噬细胞相关细胞因子参与红斑狼疮炎症形成过程,其中IL-18可反映SLE病情轻重及对激素治疗的反应。 展开更多
关键词 红斑狼疮 细胞因子 巨噬细胞 生物标记 IL-18 MIF mip1-α
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