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MINDY2过表达慢病毒质粒的构建及其对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响
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作者 张路瑶 李泽艳 +6 位作者 王晓旋 石兴云 罗婉媜 宋良鹏 孙玉玲 李得意 马雪艳 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第7期1187-1194,共8页
目的:构建能表达MINDY2的慢病毒质粒,并获取稳定过表达MINDY2的A549细胞株,探讨过表达MINDY2对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用同源重组法构建pLVX-Flag-MINDY2过表达质粒,并通过菌落PCR和测序对重组质粒进行鉴定;在HEK2... 目的:构建能表达MINDY2的慢病毒质粒,并获取稳定过表达MINDY2的A549细胞株,探讨过表达MINDY2对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用同源重组法构建pLVX-Flag-MINDY2过表达质粒,并通过菌落PCR和测序对重组质粒进行鉴定;在HEK293T细胞中瞬时转染pLVX-Flag-MINDY2质粒,通过Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;重组慢病毒载体包装HEK293T细胞,获取病毒上清液感染A549细胞,嘌呤霉素筛选后利用Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;CCK8实验、Transwell和划痕实验检测过表达MINDY2对A549细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化。结果:测序结果证明成功构建了MINDY2过表达慢病毒载体;在HEK293T细胞中瞬时转染MINDY2重组质粒,能检测到Flag-MINDY2融合蛋白的表达;Western blot结果显示MINDY2在A549细胞中稳定过表达;CCK8实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的增殖;流式细胞术表明过表达MINDY2的A549细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞在G_(0)/G_(1)期;Transwell和划痕实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的迁移。结论:成功构建能高效表达MINDY2的慢病毒质粒和稳定表达MINDY2的A549细胞株;并且MINDY2能够抑制肺癌细胞系A549的增殖和迁移,促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 mindy2 A549细胞 增殖 凋亡 细胞周期 迁移
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