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LncRNA MFI2-AS1靶向miR-331-3p调节LPS诱导的心肌细胞损伤 被引量：1
1
作者 雷肖蠢 张海良 丁鹏 《河北医药》 CAS 2021年第8期1142-1146,共5页
目的探讨长链非编码RNA MFI2-AS1(LncRNA)MFI2-AS1靶向调控微小RNA-331-3p(miR-331-3p)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,使用10μg/ml的LPS处理H9c2细胞24 h建立心肌细胞损伤模型。... 目的探讨长链非编码RNA MFI2-AS1(LncRNA)MFI2-AS1靶向调控微小RNA-331-3p(miR-331-3p)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,使用10μg/ml的LPS处理H9c2细胞24 h建立心肌细胞损伤模型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MFI2-AS1与miR-331-3p的表达水平。利用脂质体转染法分别将si-NC、si-MFI2-AS1、miR-NC、miR-331-3p mimics、si-MFI2-AS1与anti-miR-NC、si-MFI2-AS1与anti-miR-331-3p转染至H9c2细胞,使用LPS处理24 h。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证MFI2-AS1与miR-331-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、细胞周期蛋白1(CyclinD1)蛋白表达量。结果LPS处理后,细胞中MFI2-AS1的表达水平升高(P<0.05),miR-331-3p的表达水平降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);转染si-MFI2-AS1或miR-331-3p mimics后,细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05),CyclinD1蛋白水平升高(P<0.05);miR-331-3p过表达可抑制野生型质粒WT-MFI2-AS1转染细胞的荧光素酶活性(P<0.05);si-MFI2-AS1与anti-miR-331-3p共转染入H9c2细胞,细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05)。结论LncRNA MFI2-AS1通过靶向负调控miR-331-3p表达加重LPS诱导的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 LncRNA mfi2-as1 miR-331-3p LPS 心肌细胞 增殖 凋亡
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桦木酸调控LncRNA MFI2-AS1对骨关节炎软骨细胞损伤的保护作用 被引量：2
2
作者 陶银伟 周华丹 余建 《中国药师》 CAS 2022年第1期49-54,共6页
目的:探讨桦木酸对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对LncRNA MFI2-AS1的调控作用。方法:白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的桦木酸处理细胞,MFI2-AS1小分子干扰RNA(si-MFI2-AS1)及其阴性对照... 目的:探讨桦木酸对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对LncRNA MFI2-AS1的调控作用。方法:白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的桦木酸处理细胞,MFI2-AS1小分子干扰RNA(si-MFI2-AS1)及其阴性对照(si-NC)转染至软骨细胞后加入IL-1β处理细胞,MFI2-AS1过表达载体(pcDNA-MFI2-AS1)及其对照空载体(pcDNA)分别转染至软骨细胞后加入桦木酸与IL-1β共同处理细胞;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、白细胞介素6(IL-6)的水平;CCK-8、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;qRT-PCR检测MFI2-AS1的表达量;Western blot检测活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)蛋白表达量。结果:桦木酸能够降低IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平(P<0.05),可降低凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、MMP-1、MMP-3蛋白水平(P<0.05),并可增强IL-1β诱导的软骨细胞活力(P<0.05),还可抑制IL-1β诱导的软骨细胞中MFI2-AS1的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-MFI2-AS1后IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平降低(P<0.05),细胞活力升高(P<0.05),凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、MMP-1、MMP-3蛋白水平降低(P<0.05);转染pcDNA-MFI2-AS1后软骨细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平升高(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05),凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、MMP-1、MMP-3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:桦木酸可通过抑制MFI2-AS1的表达而促进细胞增殖及抑制炎症反应、凋亡以及软骨基质胶原的破坏进而减轻骨关节炎软骨细胞损伤。 展开更多
关键词 桦木酸 长链非编码RNA mfi2-as1 骨关节炎 软骨细胞 细胞增殖 凋亡
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