目的初步探讨MF59/h BCG复合佐剂增强重组结核分枝杆菌蛋白（TP）免疫反应的机制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分别体外刺激RAW264.7细胞,刺激培养24 h后收集上清,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG...目的初步探讨MF59/h BCG复合佐剂增强重组结核分枝杆菌蛋白（TP）免疫反应的机制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分别体外刺激RAW264.7细胞,刺激培养24 h后收集上清,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG、TP及其配伍分别于小鼠左后腿皮下或肌肉注射,注射后24、48或72 h取注射部位的肌肉组织剪碎、PBS冲洗,采用胶原蛋白水解酶消化法和机械法结合将肌肉组织解离为单个细胞;荧光抗体标记细胞,流式细胞术分析巨噬细胞含量。结果任何免疫原刺激RAW264.7细胞,其培养上清均未检测到IL-1β;MF59和h BCG均能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1,且TNF-α分泌水平呈剂量依赖;而TP却不能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1。1∶100 MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25、50μg/ml h BCG和空白对照（所有P〈0.01）;1∶250MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25μg/ml h BCG和空白对照（P〈0.05）。1∶250 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α水平显著低于1∶100 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）（P〈0.01）。同一免疫原皮下注射和肌肉注射后24 h,其注射部位肌肉组织募集的巨噬细胞含量比较,差异均无统计学差异（P〉0.05）;MF59、50μg h BCG、10μg/ml TP、MF59/50μg h BCG和MF59/10μg TP肌肉注射后24 h,均未见明显的巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织,而它们分别皮下注射（除50μg h BCG外）的注射部位肌肉组织募集到不同数量的巨噬细胞;10μg TP皮下注射及MF59/50μg h BCG/10μg TP皮下注射与肌肉注射后24 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量均显著高于PBS对照（P〈0.05）。50μg h BCG皮下注射后72 h和250μg h BCG皮下注射后24 h,其注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高;但与对照PBS比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。MF59/50μg h BCG皮下注射后48 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高、且显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/250μg h BCG和PBS）（P〈0.05）;MF59/250μg h BCG皮下注射后24~72 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量持续保持较高水平,且72 h时巨噬细胞含量显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/50μg h BCG和PBS）（P〈0.05）。结论 MF59和h BCG体外均能刺激巨噬细胞分化因子MCP-1,两者联合具有协同作用,显著增强巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织。展开更多
文摘目的初步探讨MF59/h BCG复合佐剂增强重组结核分枝杆菌蛋白（TP）免疫反应的机制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分别体外刺激RAW264.7细胞,刺激培养24 h后收集上清,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG、TP及其配伍分别于小鼠左后腿皮下或肌肉注射,注射后24、48或72 h取注射部位的肌肉组织剪碎、PBS冲洗,采用胶原蛋白水解酶消化法和机械法结合将肌肉组织解离为单个细胞;荧光抗体标记细胞,流式细胞术分析巨噬细胞含量。结果任何免疫原刺激RAW264.7细胞,其培养上清均未检测到IL-1β;MF59和h BCG均能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1,且TNF-α分泌水平呈剂量依赖;而TP却不能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1。1∶100 MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25、50μg/ml h BCG和空白对照（所有P〈0.01）;1∶250MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25μg/ml h BCG和空白对照（P〈0.05）。1∶250 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α水平显著低于1∶100 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）（P〈0.01）。同一免疫原皮下注射和肌肉注射后24 h,其注射部位肌肉组织募集的巨噬细胞含量比较,差异均无统计学差异（P〉0.05）;MF59、50μg h BCG、10μg/ml TP、MF59/50μg h BCG和MF59/10μg TP肌肉注射后24 h,均未见明显的巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织,而它们分别皮下注射（除50μg h BCG外）的注射部位肌肉组织募集到不同数量的巨噬细胞;10μg TP皮下注射及MF59/50μg h BCG/10μg TP皮下注射与肌肉注射后24 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量均显著高于PBS对照（P〈0.05）。50μg h BCG皮下注射后72 h和250μg h BCG皮下注射后24 h,其注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高;但与对照PBS比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。MF59/50μg h BCG皮下注射后48 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高、且显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/250μg h BCG和PBS）（P〈0.05）;MF59/250μg h BCG皮下注射后24~72 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量持续保持较高水平,且72 h时巨噬细胞含量显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/50μg h BCG和PBS）（P〈0.05）。结论 MF59和h BCG体外均能刺激巨噬细胞分化因子MCP-1,两者联合具有协同作用,显著增强巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织。
