目的探讨茵陈蒿汤对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠LncMEG3/miR-21-5p/PPARα介导脂肪酸β氧化的影响。方法为探讨MAFLD差异表达的miRNAs,应用PubMed、Web of Science和中国知网3个电子数据库对以中英文发表的研究进行检索,采用随机效...目的探讨茵陈蒿汤对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠LncMEG3/miR-21-5p/PPARα介导脂肪酸β氧化的影响。方法为探讨MAFLD差异表达的miRNAs,应用PubMed、Web of Science和中国知网3个电子数据库对以中英文发表的研究进行检索,采用随机效应模型进行Meta分析。24只C57BL/6J小鼠,SPF级,采用随机数字表法将小鼠随机分为对照组、模型组和茵陈蒿汤组,共3组,每组8只。采用喂饲高脂饲料的方法对模型组和茵陈蒿汤组小鼠建立MAFLD模型。12周后,茵陈蒿汤组给予茵陈蒿汤灌胃,每日1次,连续4周。采用HE染色法和油红O染色法观察各组小鼠肝组织病理形态表现;全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、高密度脂蛋白胆固(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);试剂盒检测小鼠肝脏甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平;RT-qPCR法检测小鼠LncMEG3、miR-21-5p、miR-34a-5p、miR-122-5p、miR-192-5p、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)、肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和三羟酰辅酶A脱氢酶(EHHADH)mRNA水平蛋白表达水平。结果Meta分析结果显示,与健康对照组相比,MAFLD组miR-34a-5p、miR-122-5p、miR-192-5p、miR-21-5p、miR-451-5p水平显著升高。肝脏HE染色结果发现,模型组小鼠出现肝细胞肿胀,体积增大,有明显脂肪变性;与模型组相比,茵陈蒿汤组小鼠肝细胞体积肿胀明显降低,脂肪变性显著减少。肝脏油红O染色结果发现,与对照组相比,模型组肝脏可见大量橘红色脂滴,脂质沉积显著升高;茵陈蒿汤组可见少量脂肪变性,橘红色脂滴分布减少,肝脏脂质沉积情况明显改善。相较于对照组,模型组小鼠血清HDL-C、LDL-C、TG、TC、AST、ALT表达显著升高(P<0.05),肝脏TG和FFA水平均显著升高(P<0.05);相较于模型组,茵陈蒿汤组小鼠肝脏FFA和TG水平显著降低(P<0.05),血清AST、LDL-C、TG、ALT水平显著降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组miR-21-5p、miR-34a-5p、miR-122-5p、miR-192-5p表达水平增高(P<0.05);与模型组相比,茵陈蒿汤组miR-21-5p、miR-34a-5p、miR-122-5p、miR-192-5p表达水平降低(P<0.05),miR-21-5p变化倍数(模型组/茵陈蒿汤组)最大。与对照组相比,模型组Lnc MEG3表达水平降低(P<0.05);与模型组相比,茵陈蒿汤组Lnc MEG3表达水平升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组PPARα、CPT1A、CPT2、MCAD、LCAD、ACOX1、EHHADH mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,茵陈蒿汤组PPARα、CPT1A、CPT2、MCAD、LCAD、ACOX1、EHHADH mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论茵陈蒿汤可能通过调控Lnc MEG3/miR-21-5p/PPARα信号通路促进肝脏脂肪酸β氧化,从而达到防治MAFLD的作用。展开更多
目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG 3)吸附miR-29 a对核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路及糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞焦亡的影响。方法96只大鼠随机分为空白对照(Blank)组、DN组、敲低对照(...目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG 3)吸附miR-29 a对核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路及糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞焦亡的影响。方法96只大鼠随机分为空白对照(Blank)组、DN组、敲低对照(sh-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达(sh-MEG 3)组,过表达对照(miR-NC)组、过表达miR-29 a(miR-29 a)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低对照(sh-MEG3+anti-miR-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低miR-29 a表达(sh-MEG 3+anti-miR-29 a)组,每组各12只。采用高糖、高脂饮食联合注射链脲佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型。sh-NC组、sh-MEG 3组、miR-NC组、miR-29 a组、sh-MEG 3+anti-miR-NC组、sh-MEG 3+anti-miR-29 a组大鼠通过尾静脉注射100μL相应的慢病毒(均为1012 TU/mL)。注射4周后,生化分析仪检测空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿微量白蛋白(UMA)水平;PAS染色观察肾小球损伤;透射电镜观察足细胞损伤;免疫荧光染色、RT-qPCR、Western-blot检测肾组织突触足蛋白(Synaptopodin)、肾病蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、lncRNA MEG 3、miR-29 a、NF-κB p 65、NLRP 3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β、Gasdermin家族蛋白D(GSDMD)mRNA和蛋白水平。结果与Blank组比较,DN组大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平升高,miR-29 a水平降低,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平升高,肾小球肥大,可见足细胞足突丢失和融合,基底膜明显增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平降低,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05);敲低lncRNA MEG 3表达或过表达miR-29 a后,大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平降低,miR-29 a水平升高,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平降低,肾小球结构基本正常,足细胞仅有少量足突丢失和融合,基底膜轻微增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平升高,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);而敲低miR-29 a表达能够逆转敲低lncRNA MEG 3表达对大鼠上述指标的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MEG 3吸附miR-29 a通过NF-κB/NLRP3通路参与DN大鼠足细胞焦亡。展开更多
文摘目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG 3)吸附miR-29 a对核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路及糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞焦亡的影响。方法96只大鼠随机分为空白对照(Blank)组、DN组、敲低对照(sh-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达(sh-MEG 3)组,过表达对照(miR-NC)组、过表达miR-29 a(miR-29 a)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低对照(sh-MEG3+anti-miR-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低miR-29 a表达(sh-MEG 3+anti-miR-29 a)组,每组各12只。采用高糖、高脂饮食联合注射链脲佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型。sh-NC组、sh-MEG 3组、miR-NC组、miR-29 a组、sh-MEG 3+anti-miR-NC组、sh-MEG 3+anti-miR-29 a组大鼠通过尾静脉注射100μL相应的慢病毒(均为1012 TU/mL)。注射4周后,生化分析仪检测空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿微量白蛋白(UMA)水平;PAS染色观察肾小球损伤;透射电镜观察足细胞损伤;免疫荧光染色、RT-qPCR、Western-blot检测肾组织突触足蛋白(Synaptopodin)、肾病蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、lncRNA MEG 3、miR-29 a、NF-κB p 65、NLRP 3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β、Gasdermin家族蛋白D(GSDMD)mRNA和蛋白水平。结果与Blank组比较,DN组大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平升高,miR-29 a水平降低,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平升高,肾小球肥大,可见足细胞足突丢失和融合,基底膜明显增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平降低,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05);敲低lncRNA MEG 3表达或过表达miR-29 a后,大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平降低,miR-29 a水平升高,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平降低,肾小球结构基本正常,足细胞仅有少量足突丢失和融合,基底膜轻微增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平升高,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);而敲低miR-29 a表达能够逆转敲低lncRNA MEG 3表达对大鼠上述指标的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MEG 3吸附miR-29 a通过NF-κB/NLRP3通路参与DN大鼠足细胞焦亡。
