Ⅰ型干扰素敲除MDBK细胞系的构建及其对牛结节性皮肤病病毒增殖的促进作用

1

作者 张金熔 邹艳丽 +8 位作者 王筱真 孙凡琪 余李龙 冯春燕 蒋珽 屈海龙 李金明 王志亮 杨振 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第11期54-61,共8页

旨在提高牛结节性皮肤病病毒(LSDV)毒株在细胞中的增殖水平。通过比对LSDV XJ201901毒株在不同细胞中的增殖情况,发现牛肾细胞(MDBK)是其敏感细胞系。为了进一步优化病毒增殖条件,利用CRISPR/Cas9技术构建了Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)敲除的MDB... 旨在提高牛结节性皮肤病病毒(LSDV)毒株在细胞中的增殖水平。通过比对LSDV XJ201901毒株在不同细胞中的增殖情况,发现牛肾细胞(MDBK)是其敏感细胞系。为了进一步优化病毒增殖条件,利用CRISPR/Cas9技术构建了Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)敲除的MDBK细胞系,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)、半数组织细胞感染量(TCID50)和Western blot试验对野生型与IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系中的病毒含量和蛋白表达量进行了评估。基因测序结果显示,IFN-Ⅰ敲除细胞系中存在碱基缺失导致的移码突变,证实基因敲除成功;q PCR、TCID50和Western blot试验结果显示,IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系可以显著促进LSDV XJ201901毒株的复制。该研究为LSD疫苗的研发和病毒与细胞互作机制的探索奠定了基础。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 Ⅰ型干扰素 mdbk 牛结节性皮肤病病毒

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牛源ISG 15基因过表达载体的构建及在MDBK细胞中的表达

2

作者 肖芳 嵇辛勤 《贵州畜牧兽医》 2024年第5期29-32,共4页

为构建牛源ISG 15基因的过表达载体,以GenBank中牛源ISG 15基因序列作为参考序列设计1对合成引物,通过扩增ISG 15基因,构建pMD-18T-ISG15克隆质粒和pEGFP-N1-ISG15表达质粒,转染MDBK细胞并进行间接免疫荧光(IFA)检测。结果:经PCR扩增、... 为构建牛源ISG 15基因的过表达载体,以GenBank中牛源ISG 15基因序列作为参考序列设计1对合成引物,通过扩增ISG 15基因,构建pMD-18T-ISG15克隆质粒和pEGFP-N1-ISG15表达质粒,转染MDBK细胞并进行间接免疫荧光(IFA)检测。结果:经PCR扩增、测序验证,pEGFP-N1-ISG15重组表达质粒构建成功;IFA检测显示,转染pEGFP-N1-ISG15重组质粒的MDBK细胞中有明显绿色荧光信号。结论:试验成功构建了牛源ISG 15基因的过表达载体,并在MDBK细胞中成功表达。 展开更多

关键词 ISG 15基因 表达载体 mdbk细胞 基因表达

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口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))致牛肾细胞(MDBK)作用的形态学观察 被引量：7

3

作者 郝峰强 丛国正 +4 位作者 高闪电 林彤 独军政 邵军军 常惠芸 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1614-1620,共7页

为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口... 为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞的病变效应。结果显示,MDBK细胞系在诱导表达口蹄疫病毒Lpro24h后,光学显微镜下细胞形态表现为细胞体积缩小、核浓缩、细胞周围出现透明圈等现象;Hoechst33258染色检测呈现典型的细胞核浓缩和梅花状核碎裂;诱导表达Lpro36h后,AO-EB染色显示早期病变细胞核染亮绿色呈致密斑块或碎片状,晚期病变细胞核染橘黄色呈致密斑块;DNA凝胶电泳显示可见的DNALadder"梯状"条带。证明口蹄疫病毒Lpro在体外可诱导MDBK细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 Lpro mdbk 细胞凋亡

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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的miRNA表达谱变化分析 被引量：4

4

作者 李基棕 李文良 +4 位作者 毛立 郝飞 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期896-906,共11页

本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRN... 本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRNA。对靶基因进行GO注释和KEGG富集。结果显示,有37个miRNA显著差异表达(P<0.001),其中18个miRNA在病毒感染中上调,19个miRNA在病毒感染中下调。经RT-qPCR方法验证5个差异表达的候选miRNA,结果与高通量测序分析有很好的一致性。进一步GO功能注释表明:差异表达的miRNA靶基因生物学功能相对集中在免疫调节、细胞生物调控及细胞新陈代谢等生物过程。这些靶基因参与多种细胞的信号通路,包括细胞黏附分子、B细胞受体信号通路、MAPK信号通路、代谢通路、黏合斑、钙离子信号通路和趋化因子信号通路等。本研究为进一步探讨CPIV3致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊副流感病毒3型 MIRNA mdbk细胞 高通量测序

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脂筏在牛呼吸道合胞体病毒感染MDBK细胞中的作用 被引量：4

5

作者 李丽阳 刘洋 +2 位作者 王磊 李艳婷 侯喜林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期643-647,共5页

为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可... 为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可部分恢复;表明细胞膜胆固醇的去除可以抑制BRSV的感染,BRSV的感染与细胞膜脂筏相关。进一步研究发现,胆固醇去除不会影响BRSV结合在靶细胞表面,但会抑制病毒进入靶细胞。在病毒感染后采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞,对于病毒感染力的影响是轻微的。这些发现可有助于理解BRSV的感染机制,为研制安全、高效的疫苗和有效的治疗药物提供理论依据。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 脂筏 MβCD mdbk细胞

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用MDBK传代细胞繁殖BVDV毒株的研究 被引量：13

6

作者 王树成 林建辉 +1 位作者 刘宏 董志珍 《中国动物检疫》 CAS 1995年第4期6-8,共3页

关键词 牛病 病毒性腹泻 病毒 mdbk 传代细胞繁殖

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牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞和家兔前后炎症因子的表达变化 被引量：2

7

作者 任志军 康茜 +5 位作者 常丽云 陈颖彬 王紫燕 夏颖 秦建华 赵月兰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期290-297,共8页

为了解牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染宿主后炎症因子的变化,以Madin-Darby牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cells,MDBK)和家兔为宿主,选用炎症反应关键酶COX-2和炎症因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α作为研... 为了解牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染宿主后炎症因子的变化,以Madin-Darby牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cells,MDBK)和家兔为宿主,选用炎症反应关键酶COX-2和炎症因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α作为研究指标。通过设计上述炎症因子的特异性引物,分别从MDBK、家兔脾脏组织和小肠上皮组织中分别扩增目的片段,建立实时荧光相对定量PCR方法检测感染前后COX-2和IL-8、MIP-3α、GRO-αmRNA的相对表达水平。结果表明,在BVDV感染MDBK细胞后,COX-2和IL-8、GRO-αmRNA表达量均显著高于未感染前(P<0.01);当BVDV感染家兔后小肠和脾细胞中COX-2和IL-8、GRO-α表达量均显著高于未感染前(P<0.05);但只有在脾细胞中,MIP-3αmRNA表达量显著高于未感染前(P<0.01)。说明BVDV感染宿主的过程中可引起COX-2和IL-8、GRO-α基因表达量的升高,推测MIP-3α在脾脏抗BVDV感染过程中发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 BVDV mdbk 家兔 炎症因子 相对定量PCR

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羊口疮病毒感染MDBK细胞的电子显微镜观察 被引量：4

8

作者 鲜思美 李鹏飞 +4 位作者 李婷 顾丽群 陈元翠 刘宗胜 张习本 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期151-153,254,共4页

为了研究羊口疮病毒(Orf V)粒子的形态,试验采用透射电镜对Orf V地方分离株感染的体外培养MDBK细胞进行了观察。结果表明:负染痂皮病料悬液的病毒粒子呈卵圆形线团样,表面呈绳索样缠绕结构,大小为150~200 nm×230~270 nm,病毒粒子... 为了研究羊口疮病毒(Orf V)粒子的形态,试验采用透射电镜对Orf V地方分离株感染的体外培养MDBK细胞进行了观察。结果表明:负染痂皮病料悬液的病毒粒子呈卵圆形线团样,表面呈绳索样缠绕结构,大小为150~200 nm×230~270 nm,病毒粒子外有双层被膜包裹;OrfV地方分离株感染MDBK细胞在48 h后可见细胞变圆、聚集、融合、拉网甚至脱落的细胞病变(CPE);超薄切片可见病毒粒子存在于细胞浆内,多呈椭圆形或卵圆形,获得囊膜成熟病毒粒子和未成熟病毒粒子的表面均呈现两种形态,即表面呈绳索样的病毒粒子和表面无绳索样的病毒粒子;细胞超微结构变化主要表现为细胞表面的微绒毛脱落,细胞浆空泡增多,内质网扩张呈囊状。说明OrfV能够在MDBK细胞内增殖。 展开更多

关键词 羊口疮病毒(OrfV) mdbk细胞 负染 超薄切片 电镜

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不同毒力牛传染性鼻气管炎病毒感染MDBK细胞的差异蛋白组学 被引量：1

9

作者 郭利 刘林娜 +4 位作者 廖鹏 杨艳玲 张淑琴 武华 程世鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1676-1679,共4页

毒力不同的中传染性鼻气管炎病毒(IBRV)株感染宿主细胞后,会产生不同的临床免疫反应,目前关于强弱IBRV毒株感染宿主细胞后的差异蛋白质组学研究尚未报道。本研究使用基于双向电泳与MALDI-TOF/MS的蛋白质组学技术,对比分析了MDBK细胞感染... 毒力不同的中传染性鼻气管炎病毒(IBRV)株感染宿主细胞后,会产生不同的临床免疫反应,目前关于强弱IBRV毒株感染宿主细胞后的差异蛋白质组学研究尚未报道。本研究使用基于双向电泳与MALDI-TOF/MS的蛋白质组学技术,对比分析了MDBK细胞感染IBRV强毒株LN01/08与弱毒株LNM前后蛋白质组变化,共鉴定了8个差异蛋白。结果显示,丙酮酸激酶(PKM2)、肌切蛋白(SCIN)、转化生长因子(TGFBR1)及热应激蛋白90(Hsp90)在IBRV LN01/08株与IBRV LNM株感染组中表达量发生显著差异,其中PKM2和TGFBR1在IBRV LN01/08株组中高表达,Hsp90在IBRV LNM株感染组和MDBK细胞对照组中高表达,在IBRV LN01/08感染组中无表达。 展开更多

关键词 中传染性鼻气管炎病毒 mdbk细胞 差异蛋白表达

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miR-193a在MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究 被引量：1

10

作者 史梦婷 付强 +5 位作者 孟露萍 史慧君 包海洋 张辉 任艳 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期123-128,共6页

本试验旨在研究miR-193a在致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(cp BVDV)感染MDBK细胞过程中诱导细胞凋亡的分子机制。试验利用TargetScan和Microcosm Targets等生物信息学在线软件预测凋亡相关的miR-193a靶基因Bax,并利用双荧光素酶报告基因... 本试验旨在研究miR-193a在致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(cp BVDV)感染MDBK细胞过程中诱导细胞凋亡的分子机制。试验利用TargetScan和Microcosm Targets等生物信息学在线软件预测凋亡相关的miR-193a靶基因Bax,并利用双荧光素酶报告基因系统验证miR-193a的靶基因;用过表达miR-193a的慢病毒pre-miR-193a-lv和抑制miR-193a表达的慢病毒pre-miR-193a-inhibitor-lv分别侵染MDBK细胞,48h后收集细胞,然后用实时荧光定量PCR、Western blotting和流式细胞仪检测凋亡通路中Bax的表达水平及MDBK细胞凋亡率。结果预测并验证了miR-193a的靶基因为Bax;双荧光素酶报告基因分析结果显示miR-193a能直接结合到Bax 3′UTR区域中的miRNA反应位点,并极显著下调Bax的表达水平(P<0.01);流式细胞仪检测凋亡率结果显示,感染pre-miR-193a-lv慢病毒的MDBK细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。结果表明miR-193a能直接靶向凋亡通路中Bax基因,从而促进凋亡的发生。 展开更多

关键词 miR-193a BAX 凋亡 mdbk细胞

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牛疱疹病毒Ⅰ型诱导MDBK细胞凋亡的初步研究 被引量：1

11

作者 张宽 许信刚 +3 位作者 童德文 丁丽 李兆才 李伟 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第12期21-25,30,共6页

【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞... 【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞活性检测、细胞核形态观察、DNA ladder检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3活性检测等方法,对BHV-Ⅰ感染的MDBK细胞进行凋亡指标检测。【结果】接毒后24h,MDBK细胞即出现明显的细胞病变。活性检测表明,感染BHV-Ⅰ的细胞活性降低,并且呈病毒感染量和感染时间的依赖性。感染细胞出现核固缩,并呈新月形变化。DNA电泳结果和流式细胞术检测结果均表明,感染BHV-Ⅰ的细胞DNA出现规律的片段化,细胞凋亡比例随感染时间延长而增加,细胞内Caspase-3活性逐渐升高。【结论】BHV-Ⅰ能够诱导MDBK细胞凋亡,并且在诱导细胞凋亡过程中有Caspase-3参与。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 mdbk细胞 细胞凋亡

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柔嫩艾美耳球虫裂殖子入侵对MDBK细胞凋亡因子表达的影响 被引量：1

12

作者 王黎霞 宋丽聪 +1 位作者 张建军 安健 《北京农学院学报》 2020年第2期25-28,共4页

【目的】为了积累寄生虫与宿主间的作用的研究基础,为球虫病防治新方法的研究打下理论基础。【方法】以MDBK细胞和柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为试验对象,以β-actin为内参,采用qRT-PCR技术检测主要的细胞凋亡相关因子Bcl-XL、Bid,... 【目的】为了积累寄生虫与宿主间的作用的研究基础,为球虫病防治新方法的研究打下理论基础。【方法】以MDBK细胞和柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为试验对象,以β-actin为内参,采用qRT-PCR技术检测主要的细胞凋亡相关因子Bcl-XL、Bid,Bcl-2、Bax表达,比较攻虫凋亡诱导组Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax的变化。【结果】研究结果显示,攻虫凋亡诱导组Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax的比值表达均相对上调,而不攻虫凋亡诱导组表达均相对下调,且均差异显著(P<0.05),【结论】说明球虫裂殖子入侵MDBK细胞后通过抑制宿主细胞Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax两对异源二聚体的解离抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 mdbk细胞 细胞凋亡 因子

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牛病毒性腹泻病毒在MDBK细胞上培养增殖影响因素的研究

13

作者 魏玲 梁洪 +2 位作者 王怀禹 吕远蓉 杨国淋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第17期66-70,145,共6页

为了确定牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)在牛肾细胞(Madin darby bovine kidey cell, MDBK细胞)上的培养增殖影响因素,试验通过优化接毒剂量、吸附时间、收毒时间、血清浓度、培养液pH值等参数,确定BVDV在MDBK细... 为了确定牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)在牛肾细胞(Madin darby bovine kidey cell, MDBK细胞)上的培养增殖影响因素,试验通过优化接毒剂量、吸附时间、收毒时间、血清浓度、培养液pH值等参数,确定BVDV在MDBK细胞上增殖的最佳培养条件,并利用该培养条件增殖培养BVDV及进行免疫原性试验,研究其对犊牛的免疫原性。结果表明:BVDV在MDBK细胞上培养的最佳接毒量为毒种稀释1×10^(3)倍,最佳吸附时间为1 h,最佳收毒时间为接毒后48小时,最佳血清浓度为2%,最佳培养液pH值为7.2,应用最佳培养条件培养的3批次培养物的病毒含量分别为1.0×10^(6.88)TCID_(50)/0.1 mL、1.0×10^(6.83)TCID_(50)/0.1 mL、1.0×10^(6.88)TCID_(50)/0.1 mL,利用该培养物制备的油乳剂灭活疫苗在免疫犊牛后第7天即可产生BVDV中和抗体,至免疫后第180天中和抗体效价仍维持在较高水平,具有良好的免疫原性。说明通过优化培养条件确定了BVDV在MDBK细胞上的增殖培养影响因素,利用该培养条件增殖培养的BVDV的病毒液具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 mdbk细胞 培养 增殖 影响因素 病毒含量 中和抗体 免疫原性

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一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究

14

作者 王磊 杨承槐 刘莹 《中国兽药杂志》 2021年第4期57-62,共6页

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10^(6)/mL以上... 研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10^(6)/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10^(7)/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。 展开更多

关键词 mdbk细胞 全悬浮培养 低血清 细胞驯化

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冷热应激对牛PBMC和MDBK细胞活力及HSP70表达的影响 被引量：7

15

作者 康玲 胡丽蓉 +4 位作者 李玮 鄢新义 亓建刚 徐青 王雅春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1359-1365,共7页

以奶牛原代培养细胞PBMC（peripheral blood mononuclear cells）和商业化细胞系MDBK（madin-darby bovine kidney）为细胞模型，采用MTS、实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）及Western blot等方法检测不同程度的冷热应激对... 以奶牛原代培养细胞PBMC（peripheral blood mononuclear cells）和商业化细胞系MDBK（madin-darby bovine kidney）为细胞模型，采用MTS、实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）及Western blot等方法检测不同程度的冷热应激对牛PBMC和MDBK细胞活力及HSP70表达水平的影响，分析不同温度的冷热应激条件下细胞活力和HSP70表达变化的规律，以及不同类型细胞应答冷热应激的差异。结果显示，冷应激和热应激均会使细胞活力降低，应激强度越大，细胞活力越低；冷热应激会调控细胞中HSP70的表达水平，重度冷应激（10℃）下调HSP70的表达，而热应激则上调HSP70的表达，但若超过细胞耐受极限度HSP70表达开始下降；HSP70表达水平应对冷热应激的变化与细胞的类型和冷热应激强度有关。结果表明，冷热应激会降低细胞活力，调控细胞HSP70的表达水平，HSP70的表达变化能够反映细胞冷热应激的强度，可作为评价奶牛冷热应激反应的潜在分子标记在奶牛个体中进行深入研究。 展开更多

关键词 冷热应激 HSP70 细胞活力 PBMC细胞 mdbk细胞 基因表达

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慢病毒介导的bta-miR-222稳定过表达MDBK细胞株的构建及鉴定 被引量：3

16

作者 钟纯燕 主性 +6 位作者 李基棕 毛立 李文良 郝飞 刘茂军 嵇辛勤 肖芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期50-57,共8页

拟获取稳定表达bta-miR-222的MDBK细胞株,为后续探索bta-miR-222在MDBK细胞中的作用奠定基础。本研究使用PCR技术,从MDBK细胞基因组与pEGFP-N1质粒中扩增pri-bta-miR-222和GFP片段,胶回收,先克隆于pMD18-T载体中,转化入大肠杆菌,酶切鉴... 拟获取稳定表达bta-miR-222的MDBK细胞株,为后续探索bta-miR-222在MDBK细胞中的作用奠定基础。本研究使用PCR技术,从MDBK细胞基因组与pEGFP-N1质粒中扩增pri-bta-miR-222和GFP片段,胶回收,先克隆于pMD18-T载体中,转化入大肠杆菌,酶切鉴定及测序正确,再克隆于pCDH-CMVMCS-EF1-Puro载体,构建含bta-miR-222基因的miRNA慢病毒重组质粒pCDH-miR-222-GFP。将pCDHmiR-222-GFP与两个包装质粒PSP、PMD共转染293T细胞,制备含bta-miR-222基因的重组慢病毒VPCDH+miR-222。用制备成功的慢病毒VPCDH+miR-222感染MDBK细胞,经Puromycin嘌呤霉素筛选,荧光显微镜观察感染效率。结果显示,pCDH-miR-222-GFP过表达质粒构建成功,序列比对符合率达100%。将pCDH-miR-222-GFP、PSP和PMD共转染后,通过荧光显微镜观察到293T细胞分布大量的荧光,说明成功构建了重组慢病毒VPCDH+miR-222,经Puromycin嘌呤霉素筛选10代后,VPCDH+miR-222在MDBK细胞中仍具有感染效率。本研究成功获取稳定表达bta-miR-222的MDBK细胞株,为进一步研究bta-miR-222在病毒感染MDBK细胞中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 bta-miR-222 mdbk细胞 慢病毒

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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析 被引量：1

17

作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期364-372,共9页

本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组... 本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊副流感病毒3型 mdbk细胞 高通量测序 转录组

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BHV-1感染MDBK细胞lncRNA表达谱系及lncRNA与mRNA的关联性分析 被引量：2

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作者 黄艳梅 白永飞 +2 位作者 黄麒霏 马金柱 宋佰芬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期930-938,共9页

为探究牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染MDBK细胞的长链非编码RNA(lncRNA)表达谱系变化及lncRNA与m RNA的关联性,本研究将BHV-1感染MDBK细胞,以未感染BHV-1的MDBK细胞作为对照,于感染后采用Illumina HiSeq^(TM)4000测序,测序数据基于stringtie... 为探究牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染MDBK细胞的长链非编码RNA(lncRNA)表达谱系变化及lncRNA与m RNA的关联性,本研究将BHV-1感染MDBK细胞,以未感染BHV-1的MDBK细胞作为对照,于感染后采用Illumina HiSeq^(TM)4000测序,测序数据基于stringtie进行转录本重构,得到7 935个lncRNA转录本,再用CPC和CNCI两个软件进行新转录本编码能力的预测,获得681个新产生的lncRNA转录本。利用DESeq2软件对差异表达的lncRNA进行分析,结果显示,实验组共获得839个差异表达的lncRNA转录本,其中表达上调转录本508个,表达下调转录本331个。利用RNA plex软件对反义lncRNA与mRNA进行关联性分析,得到lncRNAmRNA相互作用的靶基因对1 227个,其中差异表达的lncRNA-mRNA相互作用靶基因对42个;顺式作用lncRNA与m RNA关联分析,获得lncRNA-mRNA靶基因对3 793个,差异表达的lncRNA-mRNA靶基因对149个;反式作用lncRNA与mRNA关联分析,获得lncRNA-mRNA靶基因对268 409个。通过基因本体论(GO)注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析进一步对与lncRNA关联mRNA的功能和途径进行分析,结果显示,关联的mRNA在细胞进程、单组织代谢过程、代谢过程及生物学调节等过程显著富集。随机选取10个差异表达的lncRNA,利用qRT-PCR方法进行验证,结果显示,其表达变化趋势与高通量测序数据趋势一致。本研究为进一步研究lncRNA在病毒感染中的作用奠定了基础,同时为进一步阐述BHV-1的发病机制、致病机理提供参考。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 mdbk细胞 差异表达 LncRNA 转录组测序 关联性分析

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间接共培养下柔嫩艾美耳球虫对MDBK细胞凋亡抑制的研究 被引量：1

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作者 郑新枫 王黎霞 +3 位作者 赵晨璐 王静 张建军 安健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期42-43,47,共3页

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)在间接共培养条件下对于宿主细胞凋亡的抑制作用,采用显微镜、分光光度法研究柔嫩艾美耳球虫与马-达氏牛肾细胞(MDBK细胞)间接共培养时对其凋亡的影响。将柔嫩艾美耳球虫纯化的裂殖子与MDBK细胞... 为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)在间接共培养条件下对于宿主细胞凋亡的抑制作用,采用显微镜、分光光度法研究柔嫩艾美耳球虫与马-达氏牛肾细胞(MDBK细胞)间接共培养时对其凋亡的影响。将柔嫩艾美耳球虫纯化的裂殖子与MDBK细胞通过Transwell小室间接共培养;分别在共培养3,6,9,12 h时测量细胞培养体系中的凋亡因子Caspase2,Caspase3,Caspase6,Caspase8,Caspase9的活性。结果表明,测定的共培养组的5种凋亡因子的水平均低于对照组,说明在间接共培养开始到12 h时,MDBK细胞的凋亡受到了抑制,可以推断球虫裂殖子可能会分泌抑制凋亡的物质作用于宿主细胞,而究竟是何种物质或作用机制使得宿主细胞凋亡受到抑制仍有待进一步的研究。 展开更多

关键词 球虫 艾美耳属 裂殖子 凋亡抑制 mdbk细胞

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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)在MDBK细胞上的培养条件优化

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作者 徐静 向军 +3 位作者 曾红梅 李敏 孔雪英 邢刚 《四川畜牧兽医》 2023年第4期22-25,共4页

本试验旨在探索对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV HL-2株)敏感的细胞种类及其在相应细胞上的培养特性和培养条件。将IBRV HL-2病毒液接种不同传代细胞,结果表明MDBK细胞对IBRV HL-2株敏感,能产生明显的细胞病变。对各种条件进行优化,结果表... 本试验旨在探索对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV HL-2株)敏感的细胞种类及其在相应细胞上的培养特性和培养条件。将IBRV HL-2病毒液接种不同传代细胞,结果表明MDBK细胞对IBRV HL-2株敏感,能产生明显的细胞病变。对各种条件进行优化,结果表明接种时间、接毒量、维持液血清含量、培养基种类均对收获的病毒液病毒含量有影响。通过优化,得出最佳培养条件如下:在细胞传代后24 h接种,弃掉营养液,加入含2%血清的MEM作为维持液,接入0.01感染复数(moi)的病毒液,接种后44±2h收获,所获得的病毒液病毒含量最高。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) 培养条件 接毒量 病毒含量 mdbk细胞

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