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阿霉素诱导MCF10A上皮细胞衰老模型的构建
1
作者 王增盛 牛祖彪 +7 位作者 张波 郝佳慧 朱一超 杨瑞刚 任禾 刘辰瑜 孙强 任立成 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第1期147-155,共9页
本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究。探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多... 本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究。探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多维度验证了MCF 10A作为细胞衰老模型的可行性。阿霉素诱导MCF 10A细胞衰老的最佳条件是:用0.6μmol/L的阿霉素处理16 h在第8 d MCF 10A细胞达到最佳衰老状态。在最佳诱导条件下,加药组的衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性率达到97%;同时,检测mRNA、蛋白质和免疫荧光(immunofluorescence,IF)的表达,结果显示:加药组细胞相对于正常细胞的衰老相关分泌表型(senescence-associated aecretory phenotype,SASP)、p16、p21和p53蛋白质的表达量均显著升高,核纤层蛋白B1(lamin B1)显著下降(P<0.001)。加药组细胞与衰老细胞特有特征一致。本研究用阿霉素成功构建了MCF 10A上皮细胞衰老模型,为基于衰老上皮细胞的衰老细胞清除剂的筛选奠定了研究基础。 展开更多
关键词 上皮细胞衰老模型 阿霉素 人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A 衰老相关-β-半乳糖苷酶 衰老相关分泌表型
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miR-10b对MCF10A细胞表达N-糖链及O-糖链的影响 被引量：1
2
作者 国东 郭佳 +1 位作者 武艳丽 关锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第4期338-346,共9页
蛋白质糖基化是蛋白质翻译后修饰之一,对蛋白质功能有重要的调节作用,而异常糖基化在肿瘤的发生、发展以及癌细胞转移过程中起到关键作用.MiRNAs在癌症的发生发展过程中同样起到非常关键的作用,但其如何影响糖基化进而在肿瘤恶性转化过... 蛋白质糖基化是蛋白质翻译后修饰之一,对蛋白质功能有重要的调节作用,而异常糖基化在肿瘤的发生、发展以及癌细胞转移过程中起到关键作用.MiRNAs在癌症的发生发展过程中同样起到非常关键的作用,但其如何影响糖基化进而在肿瘤恶性转化过程中发挥生物学功能的研究甚少.本文将miR-10b在人正常乳腺上皮细胞MCF10A中过表达,利用糖类相关基因芯片系统筛选了发生显著变化的糖基转移酶;随后利用本实验室建立的N-糖链及O-糖链测定方法,分析糖链水平的表达差异;最后对关键糖基转移酶基因Fut8、MGAT3及OGT通过荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和凝集素免疫印迹进行了验证,为研究miR-10b在乳腺癌中的作用提供更多糖组学方面的理论基础. 展开更多
关键词 MIR-10B mcf10a N-糖链 O-糖链
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MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建
3
作者 任雪 程谟斌 +1 位作者 张业 沈珝琲 《医学研究杂志》 2014年第10期29-32,共4页
目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白... 目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。 展开更多
关键词 人乳腺表皮细胞 雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白 他莫西芬 细胞转化
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Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化 被引量：2
4
作者 杨佳佳 胡萍 +2 位作者 周明莉 黄杰涛 柳满然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期905-909,共5页
目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒... 目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞。通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达。免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达。Transwell^(?)法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell^(?)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01)。结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭。 展开更多
关键词 TWIST mcf10a正常乳腺上皮细胞 逆转录病毒
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表皮生长因子效应评价细胞模型的建立
5
作者 陈亮 穆蕊 +5 位作者 甄诚 高彦飞 李腾 于鸣 巩伟丽 李爱玲 《科学技术与工程》 2011年第17期3903-3905,3918,共4页
为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S... 为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。 展开更多
关键词 表皮生长因子 mcf10a 细胞周期
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上皮性钙通道TRPV6对乳腺分化发育的影响 被引量：1
6
作者 韩学莹 赵丹 +5 位作者 王建鹏 张玺 黄丽莉 李梦怡 董金堂 赵强 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期76-83,共8页
为了研究上皮性钙通道TRPV6(transient receptor potential vanilloid 6)对乳腺分化发育的影响,本实验首先收集了发育不同时期的小鼠乳腺样本,共11个时间点,包括青春前期、青春期、孕期、泌乳期以及退化期,通过免疫荧光染色的方法观察了... 为了研究上皮性钙通道TRPV6(transient receptor potential vanilloid 6)对乳腺分化发育的影响,本实验首先收集了发育不同时期的小鼠乳腺样本,共11个时间点,包括青春前期、青春期、孕期、泌乳期以及退化期,通过免疫荧光染色的方法观察了TRPV6在乳腺发育过程中的表达变化.其次,利用3维培养技术、Real-time PCR技术以及免疫荧光技术探究了TRPV6对正常乳腺上皮细胞MCF10A分化的影响.结果表明,在乳腺发育的不同阶段,TRPV6的表达水平具有明显差异,且在泌乳期达到最高;敲减TRPV6可以显著抑制MCF10A乳腺微球的形成,表现在成球数量的减少和微球平均直径的下降;在RNA和蛋白水平的检测结果显示TRPV6的敲减影响多个细胞分化相关分子的表达.上述结果提示TRPV6在乳腺发育过程中可能发挥重要作用. 展开更多
关键词 乳腺 细胞分化 TRPV6 mcf10a 3维培养
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乳腺癌发生模型MCF10各阶段细胞系中TIMP3基因启动子区甲基化分析 被引量：7
7
作者 杨举伦 David Klinkebiel +2 位作者 Michael J Boland Lin Tang Judith K Christman 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期73-77,共5页
目的探讨抑癌基因TIMP3失活与乳腺癌发生和进展的关系。方法用甲基化特异性PCR技术和亚硫酸盐测序技术检测乳腺癌发生模型MCF10的增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a和转移癌细... 目的探讨抑癌基因TIMP3失活与乳腺癌发生和进展的关系。方法用甲基化特异性PCR技术和亚硫酸盐测序技术检测乳腺癌发生模型MCF10的增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a和转移癌细胞系MCF10CA1d、MCF10CA1h中TIMP3启动子区甲基化状态。结果甲基化特异性PCR分析显示,在上述各细胞系中,TIMP3启动子区均呈高度甲基化状态。亚硫酸盐测序显示,在上述各细胞系中,测序区内的68个CG位点几乎全部发生了甲基化,且甲基化累及了绝大部分等位基因。结论TIMP3基因启动子区甲基化在乳腺癌的发生和进展中起重要作用,可能成为早期诊断乳腺癌和判断乳腺癌预后的分子生物学标记。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 MCF10模型 TIMP3基因 启动子 甲基化
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乳腺癌发生过程中NOEY2基因启动子区甲基化及mRNA表达 被引量：6
8
作者 杨举伦 David Klinkebiel +2 位作者 Michael J Boland Lin Tang Judith K Christman 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期543-547,共5页
目的探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DC IS.com、浸润癌... 目的探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DC IS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1 a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及正常乳腺组织中NOEY2基因启动子区CpG岛I甲基化状态,然后用RT-PCR和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系均发生该基因启动子区CpG岛I高度甲基化;与正常乳腺组织相比,上述细胞系mRNA表达显著减少。结论NOEY2基因启动子区高度甲基化及相应的mRNA表达减少是乳腺癌发生过程中的早期事件,与乳腺癌发生有关,可能成为早期诊断乳腺癌的潜在分子生物学标记。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 MCF10模型 NOEY2甲基化 启动子 NOEY2基因 MRNA表达
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Antimycin类天然产物抗三阴性乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231作用机制初步研究 被引量：2
9
作者 郭怡 姜成燕 +1 位作者 焦瑞华 蒋爱芹 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期334-343,共10页
研究Antimycin类天然产物对三阴性乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231特异性生长抑制和杀伤作用.三种结构类似的天然产物Antimycin⁃1,⁃2和⁃3对MDA⁃MB⁃231细胞生长都有很强的抑制作用,其IC50分别为1.34±0.07,160±20和180±50 nmol·... 研究Antimycin类天然产物对三阴性乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231特异性生长抑制和杀伤作用.三种结构类似的天然产物Antimycin⁃1,⁃2和⁃3对MDA⁃MB⁃231细胞生长都有很强的抑制作用,其IC50分别为1.34±0.07,160±20和180±50 nmol·L^(-1),Antimycin⁃1活性是Antimycin⁃2和Antimycin⁃3的一百多倍.10 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1就可有效抑制MDA⁃MB⁃231细胞增殖,药物处理细胞24和48 h后的抑制率分别达到约80%和90%.显微镜下可以观察到,10和100 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1都不同程度地杀伤MDA⁃MB⁃231细胞,1000 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1甚至使细胞几乎消溶,只留下突起的核和胞质残骸.而同样浓度药物造成的乳腺正常细胞MCF⁃10A和结肠癌细胞HCT116形态的改变不明显.1和5 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1对细胞集落抑制率分别达到52%和95%.20和50 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1也明显改变MDA⁃MB⁃231细胞核形态,核呈畸形,皱缩严重,核膜破损.5,10和100 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞12,24和48 h引发细胞凋亡和坏死数量增加,并呈现时间和剂量依赖性.5,10和20 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞6,12和24 h后,没有观察到对细胞周期时相的明显影响.20 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞12,16,20和24 h后,引起胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平随处理时间延长呈逐渐下降趋势.以上结果证明,纳摩尔级的Antimycin⁃1能有效抑制和杀伤三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞. 展开更多
关键词 ANTIMYCIN MDA⁃MB⁃231 MCF⁃10A IC50
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丹参酮IIA对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com抑制作用的实验研究 被引量：3
10
作者 陈彩萍 陆翔 +3 位作者 郭文利 韩超 黄建棋 陆建菊 《中国中医药科技》 CAS 2018年第2期212-215,共4页
目的:研究丹参酮IIA(TSN)对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的抑制作用及其与AMPK通路的相关性。方法:培养乳腺癌细胞MCF10DCIS.com,给与不同浓度丹参酮IIA(0.0001～1.0 mmol/L)进行干预,通过MTT实验测定TSN对细胞活力的影响,细胞克隆实验测定... 目的:研究丹参酮IIA(TSN)对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的抑制作用及其与AMPK通路的相关性。方法:培养乳腺癌细胞MCF10DCIS.com,给与不同浓度丹参酮IIA(0.0001～1.0 mmol/L)进行干预,通过MTT实验测定TSN对细胞活力的影响,细胞克隆实验测定TSN对细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法测定AMPK通路相关蛋白的表达。结果:0.1～1.0 mmol/L的TSN培养乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的细胞活力值分别为(61.1±9.4)%和(21.7±4.3)%,克隆实验细胞团块数的相对比值分别为(58.2±8.7)%和(16.4±5.7)%,与对照组相比均有统计学意义(均P<0.05)。0.01mmol/L丹参酮IIA处理后,Sestrin2与p-AMPK蛋白相对表达值分别为(30.4±4.7)%和(32.5±5.7)%,与对照组相比均有显著统计学意义(P<0.01)结论:丹参酮IIA对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的增殖具有抑制作用,其机制可能与AMPK通路的激活相关。 展开更多
关键词 丹参酮IIA AMPK通路 乳腺癌MCF10DCIS.corn细胞 体外实验
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