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大肠杆菌ispB基因的克隆及鉴定 被引量:3
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作者 周雪峰 吴海珍 +1 位作者 范怡 张惠展 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期25-28,共4页
ispB基因编码八聚异戊二烯焦磷酸合成酶 ,是决定大肠杆菌CoQ8生物合成的关键因子。克隆ispB基因是构建产辅酶Q10 基因工程菌的前提。本实验从野生型大肠杆菌MC4 10 0出发 ,以 pUC18为载体 ,构建了大肠杆菌SspI限制性基因文库。筛选得到... ispB基因编码八聚异戊二烯焦磷酸合成酶 ,是决定大肠杆菌CoQ8生物合成的关键因子。克隆ispB基因是构建产辅酶Q10 基因工程菌的前提。本实验从野生型大肠杆菌MC4 10 0出发 ,以 pUC18为载体 ,构建了大肠杆菌SspI限制性基因文库。筛选得到目的重组子 pXF98,其酶切鉴定图谱与实验期望值吻合。测序结果表明 。 展开更多
关键词 ispB基因 重组质粒 基因文库 mc4100 鸟枪法 大肠杆菌 基因克隆
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大肠杆菌guaC基因的克隆及高效表达
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作者 糜蓉娟 吴海珍 +2 位作者 叶江 张惠展 叶勤 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期252-254,共3页
以 E.coli MC41 0 0染色体 DNA为模板使用 PCR扩增技术克隆了鸟苷酸还原酶基因gua C,该基因全长 1 0 44bp,编码相对分子质量为 3 7ku的蛋白质。将该基因直接克隆于 p ET-1 6b质粒的 T7启动子下游 ,得到质粒 p EXP1。转化 E.coli BL2 1 (... 以 E.coli MC41 0 0染色体 DNA为模板使用 PCR扩增技术克隆了鸟苷酸还原酶基因gua C,该基因全长 1 0 44bp,编码相对分子质量为 3 7ku的蛋白质。将该基因直接克隆于 p ET-1 6b质粒的 T7启动子下游 ,得到质粒 p EXP1。转化 E.coli BL2 1 (DE3 ) ,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导 ,获得了高效的表达。含表达质粒的菌体胞内粗提液经酶活分析表明 ,鸟苷酸还原酶的活性为不含质粒的宿主菌的 80~ 展开更多
关键词 guaC E.COLI mc4100 鸟苷酸还原酶 基因表达
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大肠杆菌caiAB基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 段世伟 季岷岚 +1 位作者 周雪峰 张惠展 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第3期141-145,共5页
从E.coli MC4100菌株的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码巴豆甜菜碱还原酶和L-肉碱脱水酶的caiAB基因片段,并经序列分析验证。由重组质粒pZJD-1480亚克隆得到pT7-A以及pT7-B重组表达质粒,后者转入E.coliBL21(DE3)菌株中,经异丙基硫代... 从E.coli MC4100菌株的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码巴豆甜菜碱还原酶和L-肉碱脱水酶的caiAB基因片段,并经序列分析验证。由重组质粒pZJD-1480亚克隆得到pT7-A以及pT7-B重组表达质粒,后者转入E.coliBL21(DE3)菌株中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPT)诱导,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上分子质量为40ku附近可见明显的表达蛋白带。 展开更多
关键词 大肠杆菌 caiAB基因 基因表达 鸟枪法 肉碱
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大肠杆菌cai DE的基因克隆与表达 被引量:1
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作者 蒋建雄 段世伟 张惠展 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期586-590,共5页
从E .coliMC41 0 0菌体的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码肉碱消旋酶及相关因子的caiDE基因片段 ,并经序列分析验证。由重组质粒 pJX393亚克隆得到 pDSW 2重组表达质粒 ,后者转入E .coliBL2 1 (DE3)菌株中 ,经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG... 从E .coliMC41 0 0菌体的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码肉碱消旋酶及相关因子的caiDE基因片段 ,并经序列分析验证。由重组质粒 pJX393亚克隆得到 pDSW 2重组表达质粒 ,后者转入E .coliBL2 1 (DE3)菌株中 ,经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,在聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)上分子量为 30kD和 2 4kD附近可见明显的表达蛋白带。 展开更多
关键词 caiDE 基因表达 大肠杆菌 克隆
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