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骨疏康对MC3T3-E1细胞成骨分化及大鼠磨牙压低牙根吸收作用影响的研究
1
作者 万哲 杜军 肖朋 《新疆医科大学学报》 2025年第9期1292-1298,共7页
目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8... 目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8)法检测骨疏康含药血清对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)的增殖活性。将细胞分为对照组、骨疏康含药血清组(10%骨疏康含药血清培养24 h)和骨疏康含药血清+MSAB组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂,10%骨疏康含药血清和5μmol/L MSAB培养24 h),采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红S(Alizarin red S,ARS)染色观察细胞成骨分化能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt family member 3A,Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达。取12只大鼠建立磨牙压低模型,将建模成功大鼠随机分为模型组和骨疏康组(骨疏康,2.1 g/kg,每天1次,连续4 w),每组6只,另取6只未建模大鼠为正常组;采用Western blot法检测磨牙组织Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平。结果CCK8结果显示,与对照组相比,骨疏康含药血清组的细胞增殖活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,骨疏康含药血清组ALP活性、ALP和ARS染色强度升高,Runx2、BMP2、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与骨疏康含药血清组相比,骨疏康含药血清+MSAB组ALP活性、ALP染色强度降低,Runx2和BMP2的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。动物实验结果显示,与正常组相比,模型组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,骨疏康组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨疏康通过介导Wnt/β-catenin通路促进MC3T3-E1细胞及大鼠磨牙组织的成骨分化。 展开更多
关键词 骨疏康 成骨分化 mc3t3-e1细胞 信号通路
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红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验 被引量：4
2
作者 刘朝辉 韩晓谦 +2 位作者 段昕 郭鹏达 张云涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第2期231-237,共7页
背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因... 背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P<0.01),提高Runx-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01);而添加PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002则可逆转以上结果;③结果表明,红景天苷能促进MC3T3-E1细胞矿化,并能促进成骨相关基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 红景天苷 mc3t3-e1细胞 细胞分化 成骨 矿化 LY294002 PI3K/AKt信号通路
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黄芪甲苷可缓解MC3T3-E1细胞氧化应激损伤并促进成骨 被引量：5
3
作者 张加豪 李嘉程 +3 位作者 温明韬 郭艳波 骆帝 李刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第17期3529-3536,共8页
背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的... 背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的作用。方法:将MC3T3-E1细胞分4组培养:对照组加入完全培养基,模型组加入含过氧化氢的完全培养基干预24 h后更换为完全培养基,黄芪甲苷组加入含过氧化氢、黄芪甲苷的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷的完全培养基,抑制剂组加入含过氧化氢、黄芪甲苷、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷、ERK抑制剂的完全培养基。过氧化氢干预48 h后,通过丙二醛含量检测黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞氧化应激的缓解作用;过氧化氢干预48 h后进行成骨诱导培养,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色验证MC3T3-E1细胞成骨及矿化能力,通过RT-qPCR检测成骨相关基因的表达,Western blot检测成骨相关蛋白及ERK/腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路蛋白的表达。结果与结论:(1)模型组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均少于对照组(P<0.05),黄芪甲苷组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均多于模型组(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组细胞内丙二醛含量增加(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05),AMPK mRNA与p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷组细胞内丙二醛含量减少(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.05),ERK1/2、AMPK mRNA表达升高(P<0.05),p-AMPK、p-ERK1/2蛋白表达均升高(P<0.05);ERK抑制剂可部分抑制黄芪甲苷的上述作用。(3)结果表明,黄芪甲苷可通过激活ERK/AMPK信号通路促进氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 骨质疏松症 mc3t3-e1细胞 氧化应激 ERK/AMPK信号通路 成骨 工程化骨材料
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环状RNA mmu_circ_0000818在地塞米松导致的MC3T3-E1细胞凋亡中的作用及机制 被引量：1
4
作者 杨慧霞 丁宁 +5 位作者 马润秋 李桂忠 郝银菊 马胜超 姜怡邓 白志刚 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第4期478-489,共12页
目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dex... 目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果(1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个。差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著。(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6~7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性。(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818可改善DEX引起的MC3T3-E1细胞凋亡,过表达则促进其凋亡。结论mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡。 展开更多
关键词 环状RNA mmu_circ_0000818 地塞米松 mc3t3-e1细胞 RNA测序 凋亡
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川续断皂苷Ⅵ促进低氧环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化 被引量：2
5
作者 李蕴喆 牛泽蕃 +3 位作者 王紫瑈 艾崇毅 陈刚 王新兴 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第35期7481-7489,共9页
背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O... 背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O_(2))用完全培养基培养,低氧组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用完全培养基培养,川续断皂苷Ⅵ组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用含有川续断皂苷Ⅵ的完全培养基培养。24 h后,采用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖活性,TUNEL染色法和Western blot实验检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧水平和细胞周期分布。另外,各组细胞在低氧条件下分别用含1×10^(-5),1×10^(-6),1×10^(-7)mol/L川续断皂苷Ⅵ的成骨诱导液培养7 d,通过光学显微镜观察和碱性磷酸酶染色筛选川续断皂苷Ⅵ最适浓度,采用Western blot方法检测骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、PI3K/AKT信号轴相关蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,低氧条件下MC3T3-E1细胞增殖能力下降,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ可以显著提高低氧状态下细胞增殖能力,并且减少细胞凋亡;②与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组细胞内活性氧减少,进入S期细胞比例明显增多;③与低氧组相比,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ组细胞形态舒展,较多突起,碱性磷酸酶染色较深;④与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白表达增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低。结果表明,低氧环境下川续断皂苷Ⅵ可能通过调节PI3K/AKT通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化。 展开更多
关键词 mc3t3-e1细胞 低氧 川续断皂苷Ⅵ PI3K AKt 通路 细胞分化 成骨
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淫羊藿苷调控LAP自噬促进酒精抑制的MC3T3-E1细胞成骨分化 被引量：2
6
作者 曾麒 陈跃平 +2 位作者 宋世雷 赖渝 吴华华 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第3期590-599,共10页
研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实... 研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实验筛选合适的AL和ICA浓度后,实验分为7组:完全培养基(complete medium,CM)组,成骨诱导培养基(osteogenic induction medium,OIM)组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-8)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-7)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-6)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-5)mol·L^(-1)ICA组,培养7 d。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测ALP相对面积,Western blot、RT-qPCR检测成骨、自噬相关蛋白及mRNA表达情况,活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色检测ROS水平,细胞凋亡线粒体膜电位实验检测细胞凋亡情况。结果显示,ICA可上调AL干预后下调的ALP相对面积;AL下调成骨相关蛋白Wnt家族成员1(Wnt family member 1 gene,Wnt1)及成骨相关基因Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、核心结合因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、ALP的表达水平,抑制细胞成骨分化,ICA可上调AL抑制的成骨相关蛋白及mRNA的表达水平,促进细胞成骨分化;AL抑制典型自噬,ICA调控Rubicon抑制LC3相关吞噬作用(LC3-associated phagocytosis,LAP)促进典型自噬;ICA下调AL诱导后上升的ROS水平;ICA下调AL干预后导致的成骨细胞凋亡。综上,ICA可调控Rubicon抑制LAP促进典型自噬,清除ROS减少细胞凋亡,最终通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 酒精 成骨细胞 mc3t3-e1细胞 Wnt1/β-catenin通路 成骨分化 骨代谢失衡 自噬 LAP
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藏红花素水凝胶对软骨细胞与MC3T3-E1细胞的影响 被引量：1
7
作者 尹航 宋奎 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第34期7293-7300,共8页
背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓... 背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓度(0,15,20,25 mmol/L)的藏红花素溶液分别加入氧化透明质酸-氧化硫酸软骨素-Ⅱ型胶原混合溶液中,采用席夫碱交联方式制备藏红花素水凝胶,随后制备4种水凝胶浸提液。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与人软骨细胞共培养,检测细胞糖胺聚糖合成,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移,RT-qPCR检测细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与MC3T3-E1细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,RT-qPCR检测成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,成骨诱导分化后的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,15,20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液促进软骨细胞的增殖,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液抑制软骨细胞的增殖。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进软骨细胞的迁移,提升软骨细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达与糖胺聚糖合成,并且呈现剂量依赖性。②15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进MC3T3-E1细胞的增殖,提高成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,并且具有剂量依赖性。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液可提高成骨诱导分化后MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性与矿化结节形成,其中以20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液的提高效果最显著。③结果表明,藏红花素水凝胶可促进软骨细胞的增殖、迁移及软骨细胞外基质的合成,促进MC3T3-E1细胞的增殖与成骨分化,其中20 mmol/L藏红花素水凝胶的综合效果较好。 展开更多
关键词 藏红花素 水凝胶 软骨细胞 mc3t3-e1细胞 细胞增殖 细胞迁移 细胞分化 工程化软骨材料
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基于有氧糖酵解探究补骨生髓方含药血清通过介导HIF-1α促进MC3T3-E1细胞成骨分化的作用
8
作者 尹煜辉 李琰 +4 位作者 齐保玉 刘平 朱立国 刘宁 魏戌 《湖南中医药大学学报》 2025年第5期818-824,共7页
目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药... 目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药液灌胃,空白血清组给予20 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,连续灌胃9次后收集腹主动脉血液,获取BGSSD含药血清和空白血清。将MC3T3-E1细胞分为空白血清组、含药血清组和有氧糖酵解抑制剂组,并将HIF-1α慢病毒转染稳定的MC3T3-E1细胞作为SiRNA HIF-1α组。空白血清组加入含20%空白血清的α-MEM培养基,含药血清组和SiRNA HIF-1α组均加入含20%BGSSD含药血清的α-MEM培养基,有氧糖酵解抑制剂组加入含20%BGSSD含药血清和8 mmol/L抑制剂2-脱氧葡萄糖的α-MEM培养基。采用碱性磷酸酶(ALP)染色法观察4组培养7 d后的黑色沉淀物情况;ELISA检测培养48 h后细胞上清液中ALP和丙酮酸(PA)、乳酸(LA)的含量;qRT-PCR和Western blot检测培养48 h后细胞HIF-1α、Runt相关转录因子2(RUNX2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果 与空白血清组比较,含药血清组的黑色沉淀物明显增加、颜色加深,ALP、LA、PA含量均升高(P<0.05),PDK1、RUNX2、HIF-1α mRNA相对表达水平和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与含药血清组比较,SiRNA HIF-1α组和有氧糖酵解抑制剂组的黑色沉淀物减少、颜色变浅,ALP、LA及PA含量均降低(P<0.05),PDK1、RUNX2的mRNA相对表达水平和蛋白表达量均降低(P<0.05);SiRNA HIF-1α组HIF-1α的mRNA相对表达水平和蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 BGSSD可能通过HIF-1α介导有氧糖酵解促进MC3T3-E1细胞成骨分化,其作用机制可能与调控HIF-1α/PDK1通路相关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 补骨生髓方 有氧糖酵解 mc3t3-e1细胞 骨形成
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蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒的制备、结构表征及其对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响
9
作者 陈旭洁 梁慧嘉 +5 位作者 焦春伟 何春艳 陈少丹 陈秋颜 谢意珍 高雄 《食品工业科技》 北大核心 2025年第7期123-132,共10页
本研究制备了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒(selenium nanoparticles,SeNPs),并探索其在促进骨形成方面的潜力。通过透析、醇沉、除蛋白以及阴离子交换柱层析,从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体水提取物中分离纯化得到多糖组分PHPW,采用苯酚硫酸法... 本研究制备了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒(selenium nanoparticles,SeNPs),并探索其在促进骨形成方面的潜力。通过透析、醇沉、除蛋白以及阴离子交换柱层析,从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体水提取物中分离纯化得到多糖组分PHPW,采用苯酚硫酸法、高效凝胶渗透色谱法和高效阴离子交换色谱法分析PHPW的基本理化特性;以PHPW为模板,通过氧化还原法制备PHPW-SeNPs,采用纳米粒度仪、透射电子显微镜、X射线衍射仪、X射线光电子能谱仪、傅里叶变换红外光谱仪表征PHPW-SeNPs结构,并评价其稳定性;采用CCK-8法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒及实时定量PCR技术评价PHPW-SeNPs对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。结果表明,PHPW是一种以葡萄糖为主的中性多糖,其多糖含量和重均分子量分别为99.1%和29.4 kDa。利用200μg/mL PHPW制备获得的PHPW-SeNPs粒径最小且分散性好,呈现零价态、无定形、球状的结构,分析测定的元素中含有碳(63.1%)、氧(3.5%)和硒(33.4%),PHPW中的羟基可通过类似氢键作用稳定SeNPs。PHPW-SeNPs溶液在pH6~8、4℃避光条件下具有较好的稳定性。PHPW-SeNPs在1.25~20μmol/L浓度范围内,MC3T3-E1细胞增殖率呈剂量、时间依赖性提高,当浓度为20μmol/L时,MC3T3-E1细胞ALP活力增强至对照组的1.8倍,骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、RUNT相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、osteorix(OSX)及ALP mRNA表达量分别上调至对照组的2.9、4.7、3.2和3.8倍。综上所述,以多糖组分PHPW为模板可成功制备稳定性较好的PHPW-SeNPs,其能够显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,在预防骨质疏松方面具有良好的应用潜力,有望开发成促进骨健康的保健品。 展开更多
关键词 蝙蝠蛾拟青霉 菌丝体多糖 纳米硒 结构特性 mc3t3-e1细胞 成骨分化
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低氧预处理的骨髓间充质干细胞培养基上清诱导MC3T3-E1细胞的成骨分化
10
作者 刘雷 毛文 +2 位作者 祁福 李红 张明焕 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2025年第11期1145-1149,共5页
目的评估低氧预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)生物学活性和成骨分化的影响。方法将低氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为低氧组,常氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养... 目的评估低氧预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)生物学活性和成骨分化的影响。方法将低氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为低氧组,常氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为常氧组,正常培养的细胞为对照组。在培养的第1、3、5和7天,CCK8检测细胞增殖活性,生化试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)含量,qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、牛骨钙素(OCN)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达水平,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)及骨形态发生蛋白2型(BMP-2)的蛋白表达。结果处理后第1、3、5和7天,与对照组相比,低氧组细胞增殖能力增强(P<0.05),ALP含量、Runx2、OCN及OPN的mRNA表达、VEGF及BMP-2的蛋白表达均显著上调(均P<0.05),处理后第5和7天,Runx2、OCN及OPN的mRNA表达显著上调(均P<0.05),而常氧组差异无统计学意义(P>0.05)。结论低氧预处理的BMSCs对MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化具有促进作用。 展开更多
关键词 低氧 骨髓间充质干细胞 mc3t3-e1细胞 成骨分化 骨不连
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ω-3多不饱和脂肪酸通过激活Nrf2/NQO1通路减轻氧化应激并促进MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究
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作者 黄家辉 陈龙 +3 位作者 徐陈 于浩杰 周士帅 官建中 《中国修复重建外科杂志》 北大核心 2025年第11期1459-1467,共9页
目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(以下简称“ω-3”)对MC3T3-E1细胞抗氧化应激及促进成骨分化的作用机制,并揭示ω-3与MC3T3-E1细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoredu... 目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(以下简称“ω-3”)对MC3T3-E1细胞抗氧化应激及促进成骨分化的作用机制,并揭示ω-3与MC3T3-E1细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]抗氧化应激关键通路之间的关系。方法通过细胞计数试剂盒8法筛选H_(2)O_(2)最佳浓度(用于建立MC3T3-E1细胞体外氧化应激模型)和ω-3最佳干预浓度。将MC3T3-E1细胞分为空白对照组、氧化应激组(H_(2)O_(2))、低剂量ω-3组(H_(2)O_(2)+低剂量ω-3)和高剂量ω-3组(H_(2)O_(2)+高剂量ω-3)。各组细胞经成骨诱导分化7 d或14 d后进行以下检测:采用细胞荧光染色和流式细胞术测定细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量;生物透射电镜观察线粒体形态变化;Western blot检测Nrf2/HQO1通路关键蛋白Nrf2、NQO1、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)及线粒体形态相关蛋白线粒体融合蛋白1(Mitofusin 1,Mfn1)、Mfn2表达水平,以评估细胞抗氧化应激能力;细胞免疫荧光染色和Western blot检测成骨蛋白Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)表达水平;采用ALP染色和茜素红染色评估MC3T3-E1细胞成骨能力。结果与氧化应激组相比,低剂量和高剂量ω-3组ROS含量显著降低,Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);同时,MC3T3-E1细胞的线粒体形态得到改善,线粒体形态相关蛋白Mfn1和Mfn2表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);ALP染色和茜素红染色示,低剂量和高剂量ω-3组表现出更强成骨能力,且成骨相关蛋白RUNX2、OCN表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。并且上述结果在两个ω-3处理组表现出剂量依赖性(P<0.05)。结论ω-3能够增强氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的抗氧化能力并上调其成骨活性,其机制可能与Nrf2/NQO1信号通路有关。 展开更多
关键词 Ω-3多不饱和脂肪酸 核因子E2相关因子2 醌氧化还原酶1 氧化应激 mc3t3-e1细胞
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骨碎补总黄酮联合纳米骨材料促进MC3T3-E1细胞的增殖分化 被引量：29
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作者 李晋玉 俞兴 +7 位作者 姜俊杰 徐林 赵学千 孙旗 郑晨颖 白春晓 刘楚吟 贾育松 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第7期1030-1036,共7页
背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。方法:将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100mg/L和25... 背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。方法:将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100mg/L和250mg/L骨碎补总黄酮进行药物干预,以10μg/L转化生长因子β刺激为阳性对照组。分组如下:①正常组;②DKK1组:Wnt通路抑制剂DKK1(0.1mg/L)阻断Wnt/β-catenin信号通路;③DKK1+转化生长因子β组;④DKK1+100mg/L骨碎补总黄酮组;⑤DKK1+250mg/L骨碎补总黄酮组;⑥DKK1+纳米骨+转化生长因子β组;⑦DKK1+纳米骨+100mg/L骨碎补总黄酮组;⑧DKK1+纳米骨+250mg/L骨碎补总黄酮组。在干预24,48 h后收获细胞,免疫荧光双染法观察Wnt/β-catenin通路中Wnt与LRP结合情况,Real-time PCR和Western blot检测β-catenin、LRP5、Gsk-3β、Cyclin D1、RUNX2的表达。结果与结论:①激光共聚焦扫描显微镜下显示DKK1+转化生长因子β组、DKK1+250mg/L骨碎补总黄酮组、DKK1+纳米骨+转化生长因子β组、DKK1+纳米骨+250mg/L骨碎补总黄酮组棕黄色染色较明显,表明Wnt与LRP结合较其他组更好;②Real-time PCR和Western blot结果显示,骨碎补总黄酮可促进β-catenin、LRP5、RUNX2的表达,下调GSK-3β的表达,说明骨碎补总黄酮通过激活经典Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞增殖分化,且骨碎补总黄酮诱导的基因活化呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 纳米骨 WNt/Β-CAtENIN信号通路 成骨细胞 mc3t3-e1细胞
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不同质量比处理牙本质基质/α-半水硫酸钙复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响
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作者 施鹏伟 高永强 +1 位作者 王超 刘一鸣 《北京生物医学工程》 2025年第2期171-176,共6页
目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/... 目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/α-CSH复合材料浸提液,采用不同质量比TDM/α-CSH复合材料浸提液培养MC3T3-E1细胞。采用CCK-8检测培养0 d、1 d、3 d、5 d、7 d时各组细胞的增殖活力,同时采用RT-qPCR和Western blot实验检测各组细胞中成骨分化相关基因,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)的表达。结果与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组中细胞的增殖活力明显升高(P<0.05)。培养5 d和7 d时,30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力也明显升高(P<0.05)。与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组MC3T3-E1细胞中ALP、OPN和RUNX2的表达水平显著升高(P<0.05);30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平也明显升高(P<0.05)。结论TDM/α-CSH复合材料浸提液,尤其是50%TDM/α-CSH复合材料浸提液能够显著促进MC3T3-C1细胞的增殖及成骨向分化。 展开更多
关键词 处理牙本质基质 α-半水硫酸钙 mc3t3-e1 增殖 分化
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续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1细胞分化及增殖的影响 被引量：13
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作者 陈娟 陈赛楠 +4 位作者 叶云金 李生强 谢丽华 黄景文 葛继荣 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1545-1549,1584,共6页
目的 探讨续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1成骨细胞分化及增殖的影响。 方法 制备续苓健骨汤含药血清,实验分为空白对照组、含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组。采用CCK-8法和流式细胞术检测续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1细胞增殖和... 目的 探讨续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1成骨细胞分化及增殖的影响。 方法 制备续苓健骨汤含药血清,实验分为空白对照组、含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组。采用CCK-8法和流式细胞术检测续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;碱性磷酸酶(ALP)活性测定MC3T3-E1细胞的成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞的矿化能力;实时荧光定量PCR检测成骨分化基因Runx2、OC、Bmp2、Col1a1mRNA水平。 结果 与空白对照组比较,中、高剂量续苓健骨汤含药血清能促进 MC3T3-E1 细胞增殖、S期细胞比率和细胞增殖指数,并且呈现一定的剂量依赖性;同时中高剂量续苓健骨汤含药血清组能明显提高 MC3T3-E1 细胞ALP活性( P <0.01)和钙化能力( P <0.01),促进 Runx2、OC、Bmp2、Col1a1 mRNA的表达( P <0.05)。 结论 续苓健骨汤含药血清能促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖,并通过上调骨形成相关基因Runx2、OC、BMP2、Col1a1的表达水平,提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。 展开更多
关键词 中医中药 续苓健骨 含药血清 mc3t3-e1细胞 细胞增殖 成骨分化
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左归丸含药血清通过ERK/TGF-β/Smads信号级联调控MC3T3-E1细胞增殖与分化 被引量：12
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作者 蒿长英 任艳玲 +2 位作者 刘立萍 宋囡 王智民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1670-1675,共6页
目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)/转化生长因子β(TGF-β)/Sma和Mad相关蛋白(Smads)信号级联在左归丸含药血清干预成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞增殖与分化中的作用。方法:以倍美力为阳性对照药,对Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠灌服高、... 目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)/转化生长因子β(TGF-β)/Sma和Mad相关蛋白(Smads)信号级联在左归丸含药血清干预成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞增殖与分化中的作用。方法:以倍美力为阳性对照药,对Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,7 d后腹主动脉取血分离含药血清。采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的增殖作用,采用改良钙钴染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法检测钙化结节,采用Western blotting法检测核结合因子α1(Cbfα1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达,采用real-time RT-PCR法检测TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达。结果:左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中以低剂量且体积分数为15%作用48 h后对MC3T3-E1的促增殖作用最大;左归丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞ALP表达,增强细胞基质钙化,提高Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌,上调TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达;加入ERK1/2信号通路特异性阻滞剂PD98059后,MC3T3-E1细胞增殖降低,ALP表达下降,细胞基质钙化减弱,Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌降低,Smad4和Smad2 mRNA表达下调,TGF-β1mRNA表达进一步上调。结论:左归丸可能通过干预ERK/TGF-β/Smads信号级联而调控成骨细胞的增殖和分化,这可能是其防治骨质疏松症的机制之一。 展开更多
关键词 左归丸 细胞外信号调节激酶类 转化生长因子β Smad蛋白类 mc3t3-e1细胞
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葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响 被引量：7
16
作者 曾祥伟 冯倩 +2 位作者 张莹莹 赵凤鸣 詹秀琴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期977-982,共6页
目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E... 目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E1细胞周期及细胞内钙离子浓度的影响。RT-PCR检测葛根素对TRPM3基因m RNA表达的影响。结果 0.1、1、10μmol·L^(-1)葛根素能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,使G1期细胞比例减少,G_2+S期细胞比例增加,其中0.1μmol·L^(-1)浓度效果最为明显;与正常对照组相比较,0.1μmol·L^(-1)葛根素组细胞的ALP活性和矿化结节面积均明显提高;0.1μmol·L^(-1)葛根素组细胞的TRPM3 m RNA表达水平和细胞内钙离子浓度明显降低。结论葛根素可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,可降低TRPM3 mRNA表达水平和细胞内钙离子浓度。 展开更多
关键词 葛根素 mc3t3-e1细胞 增殖 分化 矿化 tRPM3
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xy9902对MC3T3-E1细胞的增殖和分化作用 被引量：8
17
作者 侯进 熊晓云 +3 位作者 弥曼 王捷频 刘莉 梅其炳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期529-532,共4页
目的研究化合物xy9902对成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响,并初步探讨其机制。方法采用MTT比色法测定化合物对成骨细胞MC3T3-E1的增殖作用;通过硝基苯磷酸盐法测定细胞内碱性磷酸酶(A lkaline phosphatase,ALP)活性的变化,观察化合... 目的研究化合物xy9902对成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响,并初步探讨其机制。方法采用MTT比色法测定化合物对成骨细胞MC3T3-E1的增殖作用;通过硝基苯磷酸盐法测定细胞内碱性磷酸酶(A lkaline phosphatase,ALP)活性的变化,观察化合物对细胞分化的影响;用放射性配体结合法考察化合物与雌激素受体(Estrogen ic recep-tor,ER)的亲和力。结果化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,这一作用可被tamoxifen阻断;xy9902与ER有亲和力,对ERα和ERβ的IC50分别为8.45×10-6mol.L-1和1.66×10-6mol.L-1。结论化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,其作用机制可能与ER激动有关。 展开更多
关键词 mc3t3-e1细胞 雌激素受体(ER) 增殖 分化
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骨碎补总黄酮联合纳米骨材料诱导MC3T3-E1细胞的成骨分化及其机制 被引量：7
18
作者 李晋玉 俞兴 +8 位作者 姜俊杰 徐林 赵学千 孙旗 郑晨颖 白春晓 刘楚吟 张喆 贾育松 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第18期2888-2893,共6页
背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探讨骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞接种于纳米骨材料表面,分... 背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探讨骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞接种于纳米骨材料表面,分别加入含0,100,250 mg/L骨碎补总黄酮的培养基培养。培养第1,3,5,7,9,11,14天,检测细胞碱性磷酸酶活性;培养第1,2,3,4周,ELISA法检测培养上清中骨钙蛋白水平;培养第7,14,21天,茜素红S染色观察细胞钙化结节形成情况;培养第14天,PCR检测成骨相关基因表达。结果与结论:①第1,3,14天,3组细胞碱性磷酸酶活性比较差异无显著性意义(P> 0.05);培养第5,7,9天,100,250 mg/L组碱性磷酸酶活性均高于0 mg/L组(P <0.05),100 mg/L组、250 mg/L组间比较差异无显著性意义(P> 0.05);②培养第1,2,3,4周,100,250 mg/L组骨钙蛋白质量浓度均高于0 mg/L组(P <0.05),100 mg/L组、250 mg/L组间比较差异无显著性意义(P> 0.05);③培养第7,14,21天,100,250 mg/L组可见明显的钙化结节;④培养第14天,100,250 mg/L组骨钙蛋白、Ⅰ型胶原和骨桥蛋白m RNA表达水平均高于0 mg/L组(P <0.05),100 mg/L组、250 mg/L组间骨钙蛋白、Ⅰ型胶原和骨桥蛋白m RNA表达比较差异无显著性意义(P> 0.05);⑤结果表明,骨碎补总黄酮联合纳米骨材料可诱导MC3T3-E1细胞分化为成骨细胞,其机制可能是通过提高碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白水平及Ⅰ型胶原、骨钙蛋白和骨桥蛋白m RNA表达来实现的。 展开更多
关键词 纳米骨材料 骨碎补总黄酮 mc3t3-e1细胞 成骨分化 骨桥蛋白 骨钙蛋白 国家自然科学基金
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H_2O_2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究 被引量：6
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作者 彭建强 黄年盛 +6 位作者 黄胜 李亮平 凌泽民 靳松 黄爱军 林昆 邹学农 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期276-284,共9页
目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测... 目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H_2O_2最合适实验浓度。取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H_2O_2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H_2O_2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H_2O_2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。然后再取MC3T3-E1细胞,分为H_2O_2组(A1组)、H_2O_2+成骨诱导组(B1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H_2O_2组(A2组)、H_2O_2+成骨诱导组(B2组)、H_2O_2+ siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H_2O_2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响。结果结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/L H_2O_2进行实验。第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P<0.05),D组低于C组(P<0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P<0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P<0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组。C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P<0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P<0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P<0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组。第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(P<0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组。结论 H_2O_2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关。 展开更多
关键词 H2O2 氧化应激 MIR-21 成骨分化 mc3t3-e1细胞
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补肾活血固齿方对大鼠MC3T3-E1细胞BMP2表达及超微结构的影响 被引量：5
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作者 李立芳 李敏 +2 位作者 刁志虹 高毅 王双双 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第7期1663-1665,I0011,共4页
目的:研究补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)BMP2表达及超微结构的影响,探讨该方剂治疗牙周炎的作用机理。方法:MC3T3-E1细胞分别于补肾活血固齿方含药血清、无药血清中培养24、48、72 h,ELISA法检测MC3T3-E1细胞BMP2... 目的:研究补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)BMP2表达及超微结构的影响,探讨该方剂治疗牙周炎的作用机理。方法:MC3T3-E1细胞分别于补肾活血固齿方含药血清、无药血清中培养24、48、72 h,ELISA法检测MC3T3-E1细胞BMP2的表达;培养14 d后,透射电镜观察MC3T3-E1细胞超微结构的变化。结果:含药血清组培养上清液的光密度值明显高于无药血清组,统计结果显示差异有显著性(P<0.05)。MC3T3-E1细胞经药物作用后呈现成骨细胞样表型,细胞表面突起变多,核卵圆形、较大,核膜凹陷,核仁明显;胞质丰富,粗面内质网扩张明显,网腔内充满低电子密度絮状物;高尔基复合体、线粒体发达,具有良好的的分泌功能,细胞代谢活跃。结论:补肾活血固齿方能促进MC3T3-E1细胞分泌BMP2,参与诱导成骨作用;补肾活血固齿方能诱导MC3T3-E1细胞呈成骨细胞样表型,促进成骨细胞的分化生长。 展开更多
关键词 补肾活血固齿方 mc3t3-e1细胞 BMP2 透射电镜 细胞超微结构
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