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骨疏康对MC3T3-E1细胞成骨分化及大鼠磨牙压低牙根吸收作用影响的研究
1
作者 万哲 杜军 肖朋 《新疆医科大学学报》 2025年第9期1292-1298,共7页
目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8... 目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8)法检测骨疏康含药血清对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)的增殖活性。将细胞分为对照组、骨疏康含药血清组(10%骨疏康含药血清培养24 h)和骨疏康含药血清+MSAB组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂,10%骨疏康含药血清和5μmol/L MSAB培养24 h),采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红S(Alizarin red S,ARS)染色观察细胞成骨分化能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt family member 3A,Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达。取12只大鼠建立磨牙压低模型,将建模成功大鼠随机分为模型组和骨疏康组(骨疏康,2.1 g/kg,每天1次,连续4 w),每组6只,另取6只未建模大鼠为正常组;采用Western blot法检测磨牙组织Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平。结果CCK8结果显示,与对照组相比,骨疏康含药血清组的细胞增殖活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,骨疏康含药血清组ALP活性、ALP和ARS染色强度升高,Runx2、BMP2、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与骨疏康含药血清组相比,骨疏康含药血清+MSAB组ALP活性、ALP染色强度降低,Runx2和BMP2的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。动物实验结果显示,与正常组相比,模型组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,骨疏康组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨疏康通过介导Wnt/β-catenin通路促进MC3T3-E1细胞及大鼠磨牙组织的成骨分化。 展开更多
关键词 骨疏康 成骨分化 mc3T3-E1细胞 信号通路
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红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验 被引量：4
2
作者 刘朝辉 韩晓谦 +2 位作者 段昕 郭鹏达 张云涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第2期231-237,共7页
背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因... 背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P<0.01),提高Runx-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01);而添加PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002则可逆转以上结果;③结果表明,红景天苷能促进MC3T3-E1细胞矿化,并能促进成骨相关基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 红景天苷 mc3T3-E1细胞 细胞分化 成骨 矿化 LY294002 PI3K/AKT信号通路
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黄芪甲苷可缓解MC3T3-E1细胞氧化应激损伤并促进成骨 被引量：4
3
作者 张加豪 李嘉程 +3 位作者 温明韬 郭艳波 骆帝 李刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第17期3529-3536,共8页
背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的... 背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的作用。方法:将MC3T3-E1细胞分4组培养:对照组加入完全培养基,模型组加入含过氧化氢的完全培养基干预24 h后更换为完全培养基,黄芪甲苷组加入含过氧化氢、黄芪甲苷的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷的完全培养基,抑制剂组加入含过氧化氢、黄芪甲苷、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷、ERK抑制剂的完全培养基。过氧化氢干预48 h后,通过丙二醛含量检测黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞氧化应激的缓解作用;过氧化氢干预48 h后进行成骨诱导培养,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色验证MC3T3-E1细胞成骨及矿化能力,通过RT-qPCR检测成骨相关基因的表达,Western blot检测成骨相关蛋白及ERK/腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路蛋白的表达。结果与结论:(1)模型组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均少于对照组(P<0.05),黄芪甲苷组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均多于模型组(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组细胞内丙二醛含量增加(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05),AMPK mRNA与p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷组细胞内丙二醛含量减少(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.05),ERK1/2、AMPK mRNA表达升高(P<0.05),p-AMPK、p-ERK1/2蛋白表达均升高(P<0.05);ERK抑制剂可部分抑制黄芪甲苷的上述作用。(3)结果表明,黄芪甲苷可通过激活ERK/AMPK信号通路促进氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 骨质疏松症 mc3T3-E1细胞 氧化应激 ERK/AMPK信号通路 成骨 工程化骨材料
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川续断皂苷Ⅵ促进低氧环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化 被引量：2
4
作者 李蕴喆 牛泽蕃 +3 位作者 王紫瑈 艾崇毅 陈刚 王新兴 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第35期7481-7489,共9页
背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O... 背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O_(2))用完全培养基培养,低氧组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用完全培养基培养,川续断皂苷Ⅵ组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用含有川续断皂苷Ⅵ的完全培养基培养。24 h后,采用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖活性,TUNEL染色法和Western blot实验检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧水平和细胞周期分布。另外,各组细胞在低氧条件下分别用含1×10^(-5),1×10^(-6),1×10^(-7)mol/L川续断皂苷Ⅵ的成骨诱导液培养7 d,通过光学显微镜观察和碱性磷酸酶染色筛选川续断皂苷Ⅵ最适浓度,采用Western blot方法检测骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、PI3K/AKT信号轴相关蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,低氧条件下MC3T3-E1细胞增殖能力下降,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ可以显著提高低氧状态下细胞增殖能力,并且减少细胞凋亡;②与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组细胞内活性氧减少,进入S期细胞比例明显增多;③与低氧组相比,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ组细胞形态舒展,较多突起,碱性磷酸酶染色较深;④与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白表达增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低。结果表明,低氧环境下川续断皂苷Ⅵ可能通过调节PI3K/AKT通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化。 展开更多
关键词 mc3T3-E1细胞 低氧 川续断皂苷Ⅵ PI3K AKT 通路 细胞分化 成骨
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淫羊藿苷调控LAP自噬促进酒精抑制的MC3T3-E1细胞成骨分化 被引量：2
5
作者 曾麒 陈跃平 +2 位作者 宋世雷 赖渝 吴华华 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第3期590-599,共10页
研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实... 研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实验筛选合适的AL和ICA浓度后,实验分为7组:完全培养基(complete medium,CM)组,成骨诱导培养基(osteogenic induction medium,OIM)组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-8)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-7)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-6)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-5)mol·L^(-1)ICA组,培养7 d。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测ALP相对面积,Western blot、RT-qPCR检测成骨、自噬相关蛋白及mRNA表达情况,活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色检测ROS水平,细胞凋亡线粒体膜电位实验检测细胞凋亡情况。结果显示,ICA可上调AL干预后下调的ALP相对面积;AL下调成骨相关蛋白Wnt家族成员1(Wnt family member 1 gene,Wnt1)及成骨相关基因Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、核心结合因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、ALP的表达水平,抑制细胞成骨分化,ICA可上调AL抑制的成骨相关蛋白及mRNA的表达水平,促进细胞成骨分化;AL抑制典型自噬,ICA调控Rubicon抑制LC3相关吞噬作用(LC3-associated phagocytosis,LAP)促进典型自噬;ICA下调AL诱导后上升的ROS水平;ICA下调AL干预后导致的成骨细胞凋亡。综上,ICA可调控Rubicon抑制LAP促进典型自噬,清除ROS减少细胞凋亡,最终通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 酒精 成骨细胞 mc3T3-E1细胞 Wnt1/β-catenin通路 成骨分化 骨代谢失衡 自噬 LAP
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环状RNA mmu_circ_0000818在地塞米松导致的MC3T3-E1细胞凋亡中的作用及机制
6
作者 杨慧霞 丁宁 +5 位作者 马润秋 李桂忠 郝银菊 马胜超 姜怡邓 白志刚 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第4期478-489,共12页
目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dex... 目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果(1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个。差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著。(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6~7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性。(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818可改善DEX引起的MC3T3-E1细胞凋亡,过表达则促进其凋亡。结论mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡。 展开更多
关键词 环状RNA mmu_circ_0000818 地塞米松 mc3T3-E1细胞 RNA测序 凋亡
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藏红花素水凝胶对软骨细胞与MC3T3-E1细胞的影响 被引量：1
7
作者 尹航 宋奎 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第34期7293-7300,共8页
背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓... 背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓度(0,15,20,25 mmol/L)的藏红花素溶液分别加入氧化透明质酸-氧化硫酸软骨素-Ⅱ型胶原混合溶液中,采用席夫碱交联方式制备藏红花素水凝胶,随后制备4种水凝胶浸提液。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与人软骨细胞共培养,检测细胞糖胺聚糖合成,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移,RT-qPCR检测细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与MC3T3-E1细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,RT-qPCR检测成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,成骨诱导分化后的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,15,20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液促进软骨细胞的增殖,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液抑制软骨细胞的增殖。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进软骨细胞的迁移,提升软骨细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达与糖胺聚糖合成,并且呈现剂量依赖性。②15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进MC3T3-E1细胞的增殖,提高成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,并且具有剂量依赖性。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液可提高成骨诱导分化后MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性与矿化结节形成,其中以20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液的提高效果最显著。③结果表明,藏红花素水凝胶可促进软骨细胞的增殖、迁移及软骨细胞外基质的合成,促进MC3T3-E1细胞的增殖与成骨分化,其中20 mmol/L藏红花素水凝胶的综合效果较好。 展开更多
关键词 藏红花素 水凝胶 软骨细胞 mc3T3-E1细胞 细胞增殖 细胞迁移 细胞分化 工程化软骨材料
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基于有氧糖酵解探究补骨生髓方含药血清通过介导HIF-1α促进MC3T3-E1细胞成骨分化的作用
8
作者 尹煜辉 李琰 +4 位作者 齐保玉 刘平 朱立国 刘宁 魏戌 《湖南中医药大学学报》 2025年第5期818-824,共7页
目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药... 目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药液灌胃,空白血清组给予20 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,连续灌胃9次后收集腹主动脉血液,获取BGSSD含药血清和空白血清。将MC3T3-E1细胞分为空白血清组、含药血清组和有氧糖酵解抑制剂组,并将HIF-1α慢病毒转染稳定的MC3T3-E1细胞作为SiRNA HIF-1α组。空白血清组加入含20%空白血清的α-MEM培养基,含药血清组和SiRNA HIF-1α组均加入含20%BGSSD含药血清的α-MEM培养基,有氧糖酵解抑制剂组加入含20%BGSSD含药血清和8 mmol/L抑制剂2-脱氧葡萄糖的α-MEM培养基。采用碱性磷酸酶(ALP)染色法观察4组培养7 d后的黑色沉淀物情况;ELISA检测培养48 h后细胞上清液中ALP和丙酮酸(PA)、乳酸(LA)的含量;qRT-PCR和Western blot检测培养48 h后细胞HIF-1α、Runt相关转录因子2(RUNX2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果 与空白血清组比较,含药血清组的黑色沉淀物明显增加、颜色加深,ALP、LA、PA含量均升高(P<0.05),PDK1、RUNX2、HIF-1α mRNA相对表达水平和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与含药血清组比较,SiRNA HIF-1α组和有氧糖酵解抑制剂组的黑色沉淀物减少、颜色变浅,ALP、LA及PA含量均降低(P<0.05),PDK1、RUNX2的mRNA相对表达水平和蛋白表达量均降低(P<0.05);SiRNA HIF-1α组HIF-1α的mRNA相对表达水平和蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 BGSSD可能通过HIF-1α介导有氧糖酵解促进MC3T3-E1细胞成骨分化,其作用机制可能与调控HIF-1α/PDK1通路相关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 补骨生髓方 有氧糖酵解 mc3T3-E1细胞 骨形成
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不同质量比处理牙本质基质/α-半水硫酸钙复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响
9
作者 施鹏伟 高永强 +1 位作者 王超 刘一鸣 《北京生物医学工程》 2025年第2期171-176,共6页
目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/... 目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/α-CSH复合材料浸提液,采用不同质量比TDM/α-CSH复合材料浸提液培养MC3T3-E1细胞。采用CCK-8检测培养0 d、1 d、3 d、5 d、7 d时各组细胞的增殖活力,同时采用RT-qPCR和Western blot实验检测各组细胞中成骨分化相关基因,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)的表达。结果与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组中细胞的增殖活力明显升高(P<0.05)。培养5 d和7 d时,30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力也明显升高(P<0.05)。与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组MC3T3-E1细胞中ALP、OPN和RUNX2的表达水平显著升高(P<0.05);30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平也明显升高(P<0.05)。结论TDM/α-CSH复合材料浸提液,尤其是50%TDM/α-CSH复合材料浸提液能够显著促进MC3T3-C1细胞的增殖及成骨向分化。 展开更多
关键词 处理牙本质基质 α-半水硫酸钙 mc3T3-E1 增殖 分化
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初级纤毛介导成骨前体细胞系MC3T3-E1传代衰老减低成骨分化能力
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作者 高丰 王纪亮 +3 位作者 王洪波 杨永胜 刘源 付苏 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第18期3741-3746,共6页
背景:在大段骨缺损修复中,由于种子细胞传代等多种因素可引起成骨类细胞衰老,造成组织工程骨植入体内后成骨分化活性降低。近年来,初级纤毛介导细胞衰老的机制已被广泛研究,但“传代衰老-成骨活性减低”的初级纤毛相关机制尚未完全明了... 背景:在大段骨缺损修复中,由于种子细胞传代等多种因素可引起成骨类细胞衰老,造成组织工程骨植入体内后成骨分化活性降低。近年来,初级纤毛介导细胞衰老的机制已被广泛研究,但“传代衰老-成骨活性减低”的初级纤毛相关机制尚未完全明了。目的:探讨初级纤毛调控成骨性MC3T3-E1细胞传代衰老的可能机制。方法:成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞传代至第10代(早期传代)及第40代(晚期传代),同时使用siRNA沉默IFT88阻碍初级纤毛生成,即将细胞分为第10代组、第40代组、第10代+siRNA IFT88-组、第40代+siRNA IFT88-组。各组细胞成骨诱导3 d,采用RT-PCR和Western blot检测衰老标志物CDKN2A(P16)的表达、成骨活性标志物骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶的表达、Hedgehog通路IHH的表达;茜素红染色和初级纤毛免疫荧光染色分析初级纤毛形态;对初级纤毛阳性率与IHH、骨形态发生蛋白2的表达进行Spearman相关性分析。结果与结论:①成骨诱导3 d,第40代组MC3T3-E1细胞的CDKN2A(P16)表达显著高于第10代组,而在siRNA IFT88-干预后差异消失;②第10代组的初级纤毛细胞阳性率高于第40代组,siRNA IFT88-则显著性抑制第10代与第40代细胞的初级纤毛表达;③第10代组MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶及骨形态发生蛋白2的转录活性和蛋白表达均高于第40代组,通过siRNA抑制初级纤毛表达后,上述差异减低或者消失;④初级纤毛细胞阳性率与IHH蛋白表达及骨形态发生蛋白2蛋白表达呈正相关。结果表明:初级纤毛介导了成骨性MC3T3-E1细胞的传代衰老,可调控成骨分化能力。 展开更多
关键词 mc3T3-E1细胞 初级纤毛 衰老 成骨分化 传代 骨形态发生蛋白2 HEDGEHOG通路 组织工程细胞
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基于MC3投票法和机器学习的信用风险评估
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作者 邝雄 张成祖 张婷婷 《海南大学学报（人文社会科学版）》 2025年第1期97-106,共10页
信用风险评估是金融风险管理的重要问题,为提高信用风险评估的有效性,基于马尔科夫链蒙特卡罗模型综合方法提出模型投票方法,这种方法可以不需要进行指标剔除,减少了特征选择过程中的信息丢失,同时可以更为谨慎地评估信用风险。结合MC3... 信用风险评估是金融风险管理的重要问题,为提高信用风险评估的有效性,基于马尔科夫链蒙特卡罗模型综合方法提出模型投票方法,这种方法可以不需要进行指标剔除,减少了特征选择过程中的信息丢失,同时可以更为谨慎地评估信用风险。结合MC3投票法和机器学习方法,构建了信用风险评估模型。在此基础上,借助国泰安数据库上市制造业企业的财务指标数据,对构建的信用风险评估模型与其他模型的预测性能进行了比较分析。检验结果表明:相对于一次剔除法和逐步剔除法,MC3投票法降低了银行由于信用风险评估模型的一类错误而造成的损失,从而提高了信用风险评估模型的性能。 展开更多
关键词 信用风险评估模型 机器学习 mc3投票法
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金纳米棒的温和光热效应对MC3T3-E1成骨性能的研究
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作者 闫佩博 宋文 +2 位作者 慕昭 刘金婵 马志伟 《实用口腔医学杂志》 北大核心 2025年第3期314-320,共7页
目的:探究金纳米棒(AuNRs)的温和光热效应对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化性能的影响。方法:采用牛血清白蛋白(BSA)涂层对AuNRs进行表面改性。采用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、近红外激光器等分别对AuNRs@CTAB和AuNRs@... 目的:探究金纳米棒(AuNRs)的温和光热效应对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化性能的影响。方法:采用牛血清白蛋白(BSA)涂层对AuNRs进行表面改性。采用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、近红外激光器等分别对AuNRs@CTAB和AuNRs@BSA进行表征分析并测定其光热效应和光热稳定性;活死染色和CCK-8实验分别检测了AuNRs@BSA的生物安全性;ALP染色、茜素红染色及半定量检测AuNRs@BSA的温和光热作用对MC3T3-E1成骨分化能力的影响。结果:成功制备了具有生物安全性且响应近红外光的AuNRs@BSA,体外实验结果表明,AuNRs@BSA的温和光热效应增强MC3T3-E1的ALP活性和矿化能力(P<0.0001)。结论:AuNRs@BSA的温和光热作用可以促进MC3T3-E1的成骨分化。 展开更多
关键词 金纳米棒 BSA 温和光热效应 mc3T3-E1 成骨性能
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低氧预处理的骨髓间充质干细胞培养基上清诱导MC3T3-E1细胞的成骨分化
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作者 刘雷 毛文 +2 位作者 祁福 李红 张明焕 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2025年第11期1145-1149,共5页
目的评估低氧预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)生物学活性和成骨分化的影响。方法将低氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为低氧组,常氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养... 目的评估低氧预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)生物学活性和成骨分化的影响。方法将低氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为低氧组,常氧诱导的BMSCs无血清培养基上清加入培养的MC3T3-E1细胞作为常氧组,正常培养的细胞为对照组。在培养的第1、3、5和7天,CCK8检测细胞增殖活性,生化试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)含量,qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、牛骨钙素(OCN)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达水平,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)及骨形态发生蛋白2型(BMP-2)的蛋白表达。结果处理后第1、3、5和7天,与对照组相比,低氧组细胞增殖能力增强(P<0.05),ALP含量、Runx2、OCN及OPN的mRNA表达、VEGF及BMP-2的蛋白表达均显著上调(均P<0.05),处理后第5和7天,Runx2、OCN及OPN的mRNA表达显著上调(均P<0.05),而常氧组差异无统计学意义(P>0.05)。结论低氧预处理的BMSCs对MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化具有促进作用。 展开更多
关键词 低氧 骨髓间充质干细胞 mc3T3-E1细胞 成骨分化 骨不连
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蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒的制备、结构表征及其对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响
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作者 陈旭洁 梁慧嘉 +5 位作者 焦春伟 何春艳 陈少丹 陈秋颜 谢意珍 高雄 《食品工业科技》 北大核心 2025年第7期123-132,共10页
本研究制备了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒(selenium nanoparticles,SeNPs),并探索其在促进骨形成方面的潜力。通过透析、醇沉、除蛋白以及阴离子交换柱层析,从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体水提取物中分离纯化得到多糖组分PHPW,采用苯酚硫酸法... 本研究制备了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖-纳米硒(selenium nanoparticles,SeNPs),并探索其在促进骨形成方面的潜力。通过透析、醇沉、除蛋白以及阴离子交换柱层析,从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体水提取物中分离纯化得到多糖组分PHPW,采用苯酚硫酸法、高效凝胶渗透色谱法和高效阴离子交换色谱法分析PHPW的基本理化特性;以PHPW为模板,通过氧化还原法制备PHPW-SeNPs,采用纳米粒度仪、透射电子显微镜、X射线衍射仪、X射线光电子能谱仪、傅里叶变换红外光谱仪表征PHPW-SeNPs结构,并评价其稳定性;采用CCK-8法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒及实时定量PCR技术评价PHPW-SeNPs对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。结果表明,PHPW是一种以葡萄糖为主的中性多糖,其多糖含量和重均分子量分别为99.1%和29.4 kDa。利用200μg/mL PHPW制备获得的PHPW-SeNPs粒径最小且分散性好,呈现零价态、无定形、球状的结构,分析测定的元素中含有碳(63.1%)、氧(3.5%)和硒(33.4%),PHPW中的羟基可通过类似氢键作用稳定SeNPs。PHPW-SeNPs溶液在pH6~8、4℃避光条件下具有较好的稳定性。PHPW-SeNPs在1.25~20μmol/L浓度范围内,MC3T3-E1细胞增殖率呈剂量、时间依赖性提高,当浓度为20μmol/L时,MC3T3-E1细胞ALP活力增强至对照组的1.8倍,骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、RUNT相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、osteorix(OSX)及ALP mRNA表达量分别上调至对照组的2.9、4.7、3.2和3.8倍。综上所述,以多糖组分PHPW为模板可成功制备稳定性较好的PHPW-SeNPs,其能够显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,在预防骨质疏松方面具有良好的应用潜力,有望开发成促进骨健康的保健品。 展开更多
关键词 蝙蝠蛾拟青霉 菌丝体多糖 纳米硒 结构特性 mc3T3-E1细胞 成骨分化
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ω-3多不饱和脂肪酸通过激活Nrf2/NQO1通路减轻氧化应激并促进MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究
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作者 黄家辉 陈龙 +3 位作者 徐陈 于浩杰 周士帅 官建中 《中国修复重建外科杂志》 北大核心 2025年第11期1459-1467,共9页
目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(以下简称“ω-3”)对MC3T3-E1细胞抗氧化应激及促进成骨分化的作用机制,并揭示ω-3与MC3T3-E1细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoredu... 目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(以下简称“ω-3”)对MC3T3-E1细胞抗氧化应激及促进成骨分化的作用机制,并揭示ω-3与MC3T3-E1细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]抗氧化应激关键通路之间的关系。方法通过细胞计数试剂盒8法筛选H_(2)O_(2)最佳浓度(用于建立MC3T3-E1细胞体外氧化应激模型)和ω-3最佳干预浓度。将MC3T3-E1细胞分为空白对照组、氧化应激组(H_(2)O_(2))、低剂量ω-3组(H_(2)O_(2)+低剂量ω-3)和高剂量ω-3组(H_(2)O_(2)+高剂量ω-3)。各组细胞经成骨诱导分化7 d或14 d后进行以下检测:采用细胞荧光染色和流式细胞术测定细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量;生物透射电镜观察线粒体形态变化;Western blot检测Nrf2/HQO1通路关键蛋白Nrf2、NQO1、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)及线粒体形态相关蛋白线粒体融合蛋白1(Mitofusin 1,Mfn1)、Mfn2表达水平,以评估细胞抗氧化应激能力;细胞免疫荧光染色和Western blot检测成骨蛋白Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)表达水平;采用ALP染色和茜素红染色评估MC3T3-E1细胞成骨能力。结果与氧化应激组相比,低剂量和高剂量ω-3组ROS含量显著降低,Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);同时,MC3T3-E1细胞的线粒体形态得到改善,线粒体形态相关蛋白Mfn1和Mfn2表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);ALP染色和茜素红染色示,低剂量和高剂量ω-3组表现出更强成骨能力,且成骨相关蛋白RUNX2、OCN表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。并且上述结果在两个ω-3处理组表现出剂量依赖性(P<0.05)。结论ω-3能够增强氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的抗氧化能力并上调其成骨活性,其机制可能与Nrf2/NQO1信号通路有关。 展开更多
关键词 Ω-3多不饱和脂肪酸 核因子E2相关因子2 醌氧化还原酶1 氧化应激 mc3T3-E1细胞
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中国西门塔尔牛MC3R和MC4R基因组织表达谱及其在脂肪组织中表达水平与背膘厚度的相关性研究 被引量：19
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作者 黄萌 许尚忠 +2 位作者 李俊雅 高雪 陈金宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期489-494,共6页
为探索调控肉牛脂肪沉积的关键基因表达规律,筛选影响肉牛肥育性状的候选基因,本研究采用137头18月龄肉用中国西门塔尔公牛,屠宰并采集组织样品,根据背膘厚度胴体测定值分成高、低2组,每组各选择15个个体,利用荧光实时定量技术对MC3R和M... 为探索调控肉牛脂肪沉积的关键基因表达规律,筛选影响肉牛肥育性状的候选基因,本研究采用137头18月龄肉用中国西门塔尔公牛,屠宰并采集组织样品,根据背膘厚度胴体测定值分成高、低2组,每组各选择15个个体,利用荧光实时定量技术对MC3R和MC4R基因在组织中的表达特征及其在不同个体脂肪组织中的表达水平进行分析。结果表明,MC3R和MC4R基因在睾丸、小肠、心脏、胰腺、淋巴、肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和脂肪组织中均有不同程度的表达,MC3R和MC4R基因在不同组之间的表达差异显著(P<0.05),且与背膘厚度呈显著相关(r=0.784,P<0.05;r=0.836,P<0.05)。结果说明MC3R和MC4R基因与肉牛背膘厚度有显著相关,是影响肉牛肥育性状的候选基因。 展开更多
关键词 肉牛 mc3R MC4R 表达谱 脂肪沉积
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骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究 被引量：50
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作者 唐琪 陈莉丽 严杰 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期164-168,共5页
目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活... 目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察上述药物提取液的促细胞分化作用 ;以Vonkossa钙化染色法了解上述药物提取液的促细胞钙化作用。结果 :0 .0 1,1mg·L-1骨碎补水提液能促进MC3T3 E1细胞数量增加 (P <0 .0 5 ) ;0 .0 1,1mg·L-1骨碎补水提液和醇提液能使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少 ;1,10 0mg·L-1骨碎补醇提液能使细胞ALP的活性升高 (P <0 .0 5 ) ;10 0mg·L-1骨碎补醇提液能明显促进细胞骨钙素合成和分泌 (P <0 .0 0 1) ;1mg·L-1骨碎补水提液及 0 .0 1mg·L-1骨碎补醇提液均可促进细胞钙化 (P <0 .0 5 )。结论 :骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞增殖、分化和钙化的物质。 展开更多
关键词 骨碎补 提取物 成骨细胞 mc3T3-E1 细胞增殖 分化 钙化
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鸡MC3R基因多态性及其与屠体和肉质性状的相关性 被引量：12
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作者 王彦 苏毅 +4 位作者 刘益平 蒋小松 李亮 杜华锐 朱庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1027-1031,共5页
以四川大恒家禽育种有限公司和四川省畜牧科学研究院培育的5个新品系纯系和3个杂交系鸡群为试验材料,对MC3R基因进行PCR扩增,采用PCR-SSCP技术结合测序分析了MC3R基因在上述鸡群中的多态性。结果表明:8个鸡群中存在A 1424 G的突变。经... 以四川大恒家禽育种有限公司和四川省畜牧科学研究院培育的5个新品系纯系和3个杂交系鸡群为试验材料,对MC3R基因进行PCR扩增,采用PCR-SSCP技术结合测序分析了MC3R基因在上述鸡群中的多态性。结果表明:8个鸡群中存在A 1424 G的突变。经过基因型与屠体性状的关联分析得知:各基因型除与半净膛率(SEP)和腿肌率(LMP)无显著影响(P>0.05)外,对其它屠体性状则有显著(P<0.05)和极显著影响(P<0.01);与肉质性状相关分析结果显示,1424位点仅对粗蛋白(CP)含量和肌内脂肪含量(IMF)影响显著(P<0.05)。 展开更多
关键词 鸡 mc3R基因 单核苷酸多态性 屠体及肉质性状
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莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞炎症的保护作用及机制研究 被引量：9
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作者 杨炳友 刘艳 +5 位作者 林晓影 韩伟 姜海冰 韩华 吕邵娃 匡海学 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第16期3776-3780,共5页
目的研究莫诺苷对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成骨细胞MC3T3-E1炎症的保护作用,探讨Caspase、MAPK和NF-κB通路调控机制。方法 TNF-α(50 ng/m L)诱导MC3T3-E1细胞,制备细胞炎症模型;MTT法检测莫诺苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并检测... 目的研究莫诺苷对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成骨细胞MC3T3-E1炎症的保护作用,探讨Caspase、MAPK和NF-κB通路调控机制。方法 TNF-α(50 ng/m L)诱导MC3T3-E1细胞,制备细胞炎症模型;MTT法检测莫诺苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并检测不同浓度的莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞活力的影响;ELISA法检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的水平;Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα、IκBα和NF-κB等相关蛋白的表达。结果莫诺苷能够促进正常MC3T3-E1细胞增殖,TNF-α诱导MC3T3-E1细胞增殖受到抑制,而莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞具有保护作用;莫诺苷可以抑制TNF-α诱导MC3T3-E1细胞IL-1β和IL-6的释放;降低Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα蛋白的表达,升高IκBα蛋白表达,对NF-κB p65无明显影响。结论莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1炎症细胞有保护作用,其机制为抑制炎性因子的释放、抑制MAPK和NF-κB通路的激活、抑制凋亡蛋白Caspase的表达,从而抑制MC3T3-E1细胞的凋亡。 展开更多
关键词 接骨木 莫诺苷 肿瘤坏死因子-α mc3T3-E1 炎症 CASPASE
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骨碎补总黄酮联合纳米骨材料促进MC3T3-E1细胞的增殖分化 被引量：29
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作者 李晋玉 俞兴 +7 位作者 姜俊杰 徐林 赵学千 孙旗 郑晨颖 白春晓 刘楚吟 贾育松 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第7期1030-1036,共7页
背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。方法:将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100mg/L和25... 背景:前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。目的:探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。方法:将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100mg/L和250mg/L骨碎补总黄酮进行药物干预,以10μg/L转化生长因子β刺激为阳性对照组。分组如下:①正常组;②DKK1组:Wnt通路抑制剂DKK1(0.1mg/L)阻断Wnt/β-catenin信号通路;③DKK1+转化生长因子β组;④DKK1+100mg/L骨碎补总黄酮组;⑤DKK1+250mg/L骨碎补总黄酮组;⑥DKK1+纳米骨+转化生长因子β组;⑦DKK1+纳米骨+100mg/L骨碎补总黄酮组;⑧DKK1+纳米骨+250mg/L骨碎补总黄酮组。在干预24,48 h后收获细胞,免疫荧光双染法观察Wnt/β-catenin通路中Wnt与LRP结合情况,Real-time PCR和Western blot检测β-catenin、LRP5、Gsk-3β、Cyclin D1、RUNX2的表达。结果与结论:①激光共聚焦扫描显微镜下显示DKK1+转化生长因子β组、DKK1+250mg/L骨碎补总黄酮组、DKK1+纳米骨+转化生长因子β组、DKK1+纳米骨+250mg/L骨碎补总黄酮组棕黄色染色较明显,表明Wnt与LRP结合较其他组更好;②Real-time PCR和Western blot结果显示,骨碎补总黄酮可促进β-catenin、LRP5、RUNX2的表达,下调GSK-3β的表达,说明骨碎补总黄酮通过激活经典Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞增殖分化,且骨碎补总黄酮诱导的基因活化呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 纳米骨 WNT/Β-CATENIN信号通路 成骨细胞 mc3T3-E1细胞
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