MC1R基因与黑色素细胞的功能、皮肤的色素沉着和皮肤癌风险相关。本研究MC1R基因在不同毛色绵羊皮肤组织中的差异表达及定位,以探索MC1R基因对皮肤色素生成方面的重要作用,确定其与毛色形成的相关性。采用荧光定量PCR方法和免疫印迹方...MC1R基因与黑色素细胞的功能、皮肤的色素沉着和皮肤癌风险相关。本研究MC1R基因在不同毛色绵羊皮肤组织中的差异表达及定位,以探索MC1R基因对皮肤色素生成方面的重要作用,确定其与毛色形成的相关性。采用荧光定量PCR方法和免疫印迹方法分别检测不同毛色绵羊皮肤中MC1R基因m RNA水平和蛋白水平的表达差异;运用免疫组织化学法对不同毛色绵羊皮肤组织中的MC1R基因进行定位。荧光定量PCR结果显示MC1R m RNA在所有绵羊皮肤组织中都表达,在全黑绵羊皮肤中的相对表达量为537.91±150.36**,在花黑和花白绵羊皮肤中的相对表达量分别为27.95±9.3**和4.19±0.57**,而在全白绵羊皮肤中的相对表达量为1.03±0.27;免疫印迹结果显示所有绵羊皮肤组织蛋白中均存在与MC1R反应的阳性条带,MC1R在全黑绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量为6.3±0.21**,在花黑和花白绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量分别为2.74±0.24**和1.55±0.1**,而在全白绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量为1±0.15;免疫组织化学结果显示MC1R蛋白主要表达部位为绵羊皮肤组织毛囊的基质、根鞘等区域。试验表明不同毛色绵羊皮肤组织均正常表达MC1R基因,但其表达水平存在差异,全黑绵羊皮肤中MC1R m RNA和蛋白的表达量显著高于其它三种毛色绵羊,综上可知MC1R基因影响绵羊黑白花毛色的形成,而且真黑素的合成依赖于MC1R的表达水平。展开更多
Variations of Melanocortin Receptor 1 （MC1R） were investigated using sequencing, PCR-RFLP and PCR-SSCP, in three pig breeds, Landrace, Yorkshire, and Duroc. Five polymorphic sites were found, in which 668G→C occurr...Variations of Melanocortin Receptor 1 （MC1R） were investigated using sequencing, PCR-RFLP and PCR-SSCP, in three pig breeds, Landrace, Yorkshire, and Duroc. Five polymorphic sites were found, in which 668G→C occurred within 5＇ UTR, nt894insCC in coding region resulting in a premature stop at codon 56, and 1318C→T, 1554G→A, l197G→A in coding region resulting in Ala164Val, Ala243Thr, and Asp124Asn respectively. All individuals in Landrace and Yorkshire present homozygous 668GG, 1197AA, 1318CC, and 1554GG, and have CC insertions at the 894 site, whereas the individuals in Duroc present a contrast homozygous 668CC, 1197GG, 1318TT, and 1554AA, and have no CC insertions at the corresponding site. No heterozygote has been found at these mutation sites. Presumably, 668G→C, 1318C→T, and 1554G→A may be associated with the recessive red color in the Duroc breed, and nt894insCC making 1197G→A nonsense may be associated with the white color in Landrace and Yorkshire breeds.展开更多
文摘黑素皮质素1受体(melanocortin 1 receptor,MC1R)是动物黑色素合成通路中的关键基因之一,对动物的体色和毛色有重要影响。瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)具有5种基本体色类型("全红"、"粉玉"、"大花"、"粉花"和"麻花"),其中后3种带有黑色斑点或斑块,是研究动物黑色素合成机制的良好材料之一。克隆了瓯江彩鲤的MC1R基因,并进行了"全红"、"大花"、"粉玉"、"粉花"4种体色间的表达差异分析。研究发现,瓯江彩鲤的MC1R基因的全长cDNA序列为1 914 bp,包括637 bp 5'-UTR(非转录区)、311 bp 3'-UTR及966 bp ORF(开放阅读框)。该基因由一个外显子编码(321个氨基酸),有7个跨膜结构域。瓯江彩鲤与鲫的编码区核苷酸同源性达98%,与斑马鱼达93%;不同体色间的编码区只存在一个核苷酸无义突变(C/G),因而氨基酸序列完全相同。qRT-PCR表明,MC1R基因在眼睛的表达量显著高于皮肤、肌肉、鳃、肾脏、鳔、心、肝等组织(P<0.05);但在4种体色间不存在显著的表达差异(P>0.05)。研究结果表明:瓯江彩鲤体色类型中的黑色斑块不是由MC1R基因直接决定,还有待对其它体色相关基因或调控因子的研究。
文摘MC1R基因与黑色素细胞的功能、皮肤的色素沉着和皮肤癌风险相关。本研究MC1R基因在不同毛色绵羊皮肤组织中的差异表达及定位,以探索MC1R基因对皮肤色素生成方面的重要作用,确定其与毛色形成的相关性。采用荧光定量PCR方法和免疫印迹方法分别检测不同毛色绵羊皮肤中MC1R基因m RNA水平和蛋白水平的表达差异;运用免疫组织化学法对不同毛色绵羊皮肤组织中的MC1R基因进行定位。荧光定量PCR结果显示MC1R m RNA在所有绵羊皮肤组织中都表达,在全黑绵羊皮肤中的相对表达量为537.91±150.36**,在花黑和花白绵羊皮肤中的相对表达量分别为27.95±9.3**和4.19±0.57**,而在全白绵羊皮肤中的相对表达量为1.03±0.27;免疫印迹结果显示所有绵羊皮肤组织蛋白中均存在与MC1R反应的阳性条带,MC1R在全黑绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量为6.3±0.21**,在花黑和花白绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量分别为2.74±0.24**和1.55±0.1**,而在全白绵羊皮肤组织中的相对蛋白含量为1±0.15;免疫组织化学结果显示MC1R蛋白主要表达部位为绵羊皮肤组织毛囊的基质、根鞘等区域。试验表明不同毛色绵羊皮肤组织均正常表达MC1R基因,但其表达水平存在差异,全黑绵羊皮肤中MC1R m RNA和蛋白的表达量显著高于其它三种毛色绵羊,综上可知MC1R基因影响绵羊黑白花毛色的形成,而且真黑素的合成依赖于MC1R的表达水平。
基金This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 30571326)President Foundation and De-velopment Foundation for Scientific Research of Agricultural University of Hebei.
文摘Variations of Melanocortin Receptor 1 （MC1R） were investigated using sequencing, PCR-RFLP and PCR-SSCP, in three pig breeds, Landrace, Yorkshire, and Duroc. Five polymorphic sites were found, in which 668G→C occurred within 5＇ UTR, nt894insCC in coding region resulting in a premature stop at codon 56, and 1318C→T, 1554G→A, l197G→A in coding region resulting in Ala164Val, Ala243Thr, and Asp124Asn respectively. All individuals in Landrace and Yorkshire present homozygous 668GG, 1197AA, 1318CC, and 1554GG, and have CC insertions at the 894 site, whereas the individuals in Duroc present a contrast homozygous 668CC, 1197GG, 1318TT, and 1554AA, and have no CC insertions at the corresponding site. No heterozygote has been found at these mutation sites. Presumably, 668G→C, 1318C→T, and 1554G→A may be associated with the recessive red color in the Duroc breed, and nt894insCC making 1197G→A nonsense may be associated with the white color in Landrace and Yorkshire breeds.
