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MC-ELISA表面涂抹法定量计数大肠菌群的应用研究 被引量：1
1
作者 朱玲 何小丽 +1 位作者 王耿夏 陈伟伟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2000年第1期1-2,共2页
本 文在微菌落──酶联免疫吸附表面涂抹法多年研究的基础上，用该法测定了３０份真实标本中的大肠菌群值。经双盲法操作后，与国际法比较，Ｘ~２＝１．５１，Ｐ＞０．０５，说明两法的检出结果无显著性差异。
关键词 大肠菌群 表面涂抹法 mc-elisa
暂未订购
MC-ELISA表面涂抹法定量计数大肠菌群
2
作者 朱玲 俞树高 杨波 《预防医学情报杂志》 CAS 1998年第4期235-236,共2页
在水质及食品加工中，大肠菌群的出现是清洁后和加工后（巴氏消毒）污染的一个有用的指示菌。本文试用ＭＣ—ＥＬＩＳＡ表面涂抹法同步定性定量监测水质、食品等标本中的大肠菌群。现报告如下。１材料与方法１．１材料１．１．１菌株致... 在水质及食品加工中，大肠菌群的出现是清洁后和加工后（巴氏消毒）污染的一个有用的指示菌。本文试用ＭＣ—ＥＬＩＳＡ表面涂抹法同步定性定量监测水质、食品等标本中的大肠菌群。现报告如下。１材料与方法１．１材料１．１．１菌株致病性大肠杆菌（ＡＴＣＣ，４４１５５... 展开更多
关键词 食品加工 大肠菌群 mc-elisa 表面涂抹法
暂未订购
MC─ELISA表面涂抹法定量计数蜡样芽胞杆菌的研究 被引量：1
3
作者 朱玲 林发榕 +1 位作者 苏东辉 何小丽 《中国卫生检验杂志》 CAS 1997年第1期3-10,共8页
本文建立的微菌落——酶联免疫吸附表面涂抹法，可同步定性定量检测食品中的蜡样芽胞杆菌。与常规标准检测法比较，其特异性强，敏感性高出常规标准检测法10倍，且24h内可出结果。微菌落计数值与国标法计数值之间存在良好的相关关系，r=... 本文建立的微菌落——酶联免疫吸附表面涂抹法，可同步定性定量检测食品中的蜡样芽胞杆菌。与常规标准检测法比较，其特异性强，敏感性高出常规标准检测法10倍，且24h内可出结果。微菌落计数值与国标法计数值之间存在良好的相关关系，r=0.891。将微菌落值代入蜡样芽胞杆菌微菌落计数公式，推导出的菌落预计值与国标法的实测值完全相符，t=0.85,P＞0．20。 展开更多
关键词 蜡样芽胞杆菌 计数 mc-elisa 表面涂抹法
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检测流感病毒H5亚型抗体竞争ELISA方法的建立及初步应用 被引量：3
4
作者 李雪平 邓国华 +4 位作者 高玉伟 唐艳玲 艾嘉亮 葛叶 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期716-720,共5页
本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27μg/mL(1∶800),酶标... 本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27μg/mL(1∶800),酶标抗体最佳稀释倍数为1∶800,待检血清最佳稀释倍数为1∶10。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究中所建立的竞争ELISA方法的敏感性高于经典的血凝抑制方法(HI)。特异性试验表明该ELISA方法仅能检测H5亚型流感病毒抗体,具有良好的特异性。对临床样品检测表明C-ELISA与HI方法的符合率达到93%以上。该方法可以对不同种属动物血清H5亚型流感病毒抗体进行快速定量的检测,为H5亚型流感病毒流行病学调查与抗体的检测提供了一种快速、方便、敏感的方法。 展开更多
关键词 禽流感 单抗 竞争ELISA
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抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：8
5
作者 魏书林 曹振 +2 位作者 沈建忠 史为民 王冰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第8期62-64,共3页
本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ... 本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l。 展开更多
关键词 抗氯霉素单克隆抗体 制备 鉴定 氯霉素 药物残留 检测ELISA试剂盒
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微囊藻毒素(MC-LR)ELISA检测方法的改进及误差分析 被引量：3
6
作者 蔡正森 孙蔚榕 +4 位作者 钮伟民 张敬平 陆茂林 蔡建荣 赵晓联 《安徽农学通报》 2007年第15期31-33,共3页
针对间接竞争ELISA检测微囊藻毒素(MC-LR)方法,利用微振荡免疫反应可缩短整个检测时间约60min。同时考察了水样中盐分、金属离子和pH值对测定结果的影响,并提出了可以利用稀释法减少甚至消除这些误差影响。
关键词 MC-LR ELISA 改进 误差
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长爪沙鼠肝脏基因组DNA甲基化水平检测 被引量：2
7
作者 王志远 刘月环 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第1期44-47,共4页
目的用间接ELISA法检测长爪沙鼠肝脏基因组DNA整体甲基化的水平。方法选取新生仔鼠6只(仔鼠组),3月龄鼠12只[其中青年对照组6只,高脂饮食诱发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)青年模型组6只],8月龄中老龄鼠6只(中老龄),各组均为雄性,按组采集... 目的用间接ELISA法检测长爪沙鼠肝脏基因组DNA整体甲基化的水平。方法选取新生仔鼠6只(仔鼠组),3月龄鼠12只[其中青年对照组6只,高脂饮食诱发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)青年模型组6只],8月龄中老龄鼠6只(中老龄),各组均为雄性,按组采集血清(新生鼠除外)用于总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)检测,同时采集肝脏标本二份,一份作常规HE染色的形态学观察,一份提基因组DNA,用ELISA法试剂盒检测肝脏基因组DNA整体甲基化的水平[即5-甲基胞嘧啶(5-mc)含量]。结果青年模型组鼠及中老龄鼠均出现高脂血症,血清TC及TG均不同程度显著上升,青年对照组鼠血脂正常。病理学检查显示,青年模型组与中老龄组鼠肝脏出现较为明显的脂肪变性,而青年对照组肝脏无异常,新生仔鼠肝血窦中可见大量成堆分布有单核细胞和红细胞。肝脏基因组DNA整体甲基化水平,青年模型组沙鼠>新生仔鼠>老龄鼠>5对照组鼠。结论长爪沙鼠NAFLD及年龄增加引起的脂肪性变程度与其基因组DNA甲基化水平相关,间接ELISA法检测肝脏基因组DNA整体甲基化水平简便、迅速,成本低,或可以作为评价其表观遗传学的一种方法。 展开更多
关键词 长爪沙鼠 基因组DNA整体甲基化水平 5-甲基胞嘧啶(5-mc) 间接ELISA法 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)
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重组腺相关病毒感染细胞后目的蛋白表达水平检测方法的建立及验证
8
作者 裴德宁 闫书美 +3 位作者 史新昌 胡倩 周勇 刘宾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第6期646-650,655,共6页
目的建立重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)感染细胞后目的蛋白表达水平的检测方法,并进行方法验证,以期用于rAAV9生产过程中不同阶段产物的质量监控。方法将rAAV9供试品用感染增强剂Envirus-AAV处理后,感染经... 目的建立重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)感染细胞后目的蛋白表达水平的检测方法,并进行方法验证,以期用于rAAV9生产过程中不同阶段产物的质量监控。方法将rAAV9供试品用感染增强剂Envirus-AAV处理后,感染经羟基脲(hydroxyurea,HU)作用的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87-MG,以rAAV9参考品为标准,采用ELISA法检测细胞中目的蛋白戊二酰辅酶A脱氢酶(glutaryl-CoA dehydrogenase,GCDH)的表达水平,并验证方法的专属性、准确性、精密性、线性范围、定量限及耐用性。采用建立的方法检测8批rAAV9供试品。结果供试品缓冲液的A_(450)-A_(630)为0.3,略低于蛋白定量四参数标准曲线最低稀释点(1 ng/mL);150%、100%、50%理论相对效价水平样品平均回收率均在100.0%~107.3%范围内;同1名实验员重复3次及不同实验员检测3个理论相对效价水平样品的目的蛋白表达水平RSD均<25%;rAAV9供试品在50%~150%理论相对效价水平范围内,与相应的目的蛋白表达水平呈良好的线性关系,直线回归方程为y=1.077 x-0.022,R~2为0.984;方法的定量限为0.59,即6.0×10^(12)vg/mL;U87-MG细胞用HU孵育不同时间(18、21、24 h)、细胞培养上清液于不同条件(室温放置0.5 h、-60℃以下放置12 h、-60℃以下放置24 h)保存后,目的蛋白表达水平RSD均<25%。1~8批rAAV9供试品目的蛋白表达水平分别为111%、121%、72%、65%、86%、75%、102%、91%。结论建立的rAAV感染细胞后目的蛋白表达水平检测方法具有良好的专属性、准确性、精密性及耐用性,可用于rAAV9生产过程中不同阶段产物的质量监控。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 人脑星形胶质母细胞瘤细胞 目的蛋白 羟基脲 感染增强剂 酶联免疫吸附试验
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抗微囊藻毒素单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定 被引量：1
9
作者 宋丽敏 张维 +2 位作者 陈明 林敏 潘家荣 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期327-330,共4页
利用RT-PCR方法从抗微囊藻毒素-LR(MC-LR)单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增出抗体的V_H和V_L基因,构建了抗MC-LR分子的单链抗体(scFv)基因。SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,该单链抗体基因在大肠杆菌Origami 2中特异性表达出分子量约... 利用RT-PCR方法从抗微囊藻毒素-LR(MC-LR)单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增出抗体的V_H和V_L基因,构建了抗MC-LR分子的单链抗体(scFv)基因。SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,该单链抗体基因在大肠杆菌Origami 2中特异性表达出分子量约为30kD的融合蛋白。通过Ni-NTA金属亲和层析法对可溶性表达产物进行纯化,获得的目的蛋白浓度为0.115mg/mL。ELISA反应结果表明该单链抗体能与MC-LR特异性结合。此研究为制备多价高亲和力抗MC-LR抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 微囊藻毒素(MC) 单链抗体 原核表达 ELISA
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呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体的制备及鉴定
10
作者 王伟萍 赵芸 +3 位作者 柳爱春 陈飞东 胡叶军 叶聪莹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期163-167,共5页
目的制备呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体,并进行鉴定。方法利用对羧基苯甲醛合成1-氨基乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(4-CPAHD),通过活性脂法将4-CPAHD与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原4-CPAHD-... 目的制备呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体,并进行鉴定。方法利用对羧基苯甲醛合成1-氨基乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(4-CPAHD),通过活性脂法将4-CPAHD与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原4-CPAHD-BSA和包被抗原4-CPAHD-OVA,采用紫外分光光度法检测偶联是否成功。将人工合成抗原4-CPAHD-BSA免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选能稳定产生抗体的细胞株;通过间接ELISA法检测该细胞株分泌的单克隆抗体的效价、邻硝基-PAHD(2-NPAHD)对单克隆抗体的半数抑制浓度(IC50),并分析抗体的特异性。结果偶联后4-CPAHD-BSA的最大吸收峰有较明显的偏移,表明4-CPAHD与BSA偶联成功,平均偶联比为17.4∶1。制备的单克隆抗体的效价为1∶64 000,2-NPAHD对单克隆抗体的IC50为1.45μg/L,单克隆抗体与同类抗生素及其代谢物无交叉反应。结论制备的AHD单克隆抗体各项指标均较好,为呋喃妥因代谢物免疫检测试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 呋喃妥因代谢物 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定
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