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兰州大尾羊MAPK13基因cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 金方园 徐红伟 +6 位作者 达小强 臧荣鑫 柏家林 曹忻 蔡勇 冯玉兰 杨具田 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期94-101,共8页
克隆兰州大尾羊促分裂素原活化蛋白激酶MAPK13基因,并分析其序列及其编码蛋白的生物学特性,为研究绵羊MAPK13基因的功能和生产应用提供参考。根据绵羊MAPK13基因CDS序列设计特异引物,利用RACE和RT-PCR技术克隆获得兰州大尾羊MAPK13基因... 克隆兰州大尾羊促分裂素原活化蛋白激酶MAPK13基因,并分析其序列及其编码蛋白的生物学特性,为研究绵羊MAPK13基因的功能和生产应用提供参考。根据绵羊MAPK13基因CDS序列设计特异引物,利用RACE和RT-PCR技术克隆获得兰州大尾羊MAPK13基因全长序列,并结合生物信息学方法分析其生物学特性。克隆获得兰州大尾羊MAPK13基因cDNA序列全长1 397 bp,其CDS区片段长1 102 bp,编码367个氨基酸。预测兰州大尾羊MAPK13蛋白分子量为42.29 kD,理论等电点为8.82,为非跨膜的疏水性蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,无信号肽,不属于分泌蛋白。预测其氨基酸序列有19个磷酸化位点,3个糖基化位点,3个磷酸化功能结构域,4个其他结构域,1个LCR片段,二级结构以α-螺旋为主。同源性分析显示兰州大尾羊MAPK13基因序列与已发布的绵羊MAPK13 mRNA序列(登录号:NM_001139455.1)相比,其第852位发生碱基转换(CA),导致编码蛋白第265位氨基酸发生碱基转换(ST),同时,第951位发生碱基转换(TG),但其所编码氨基酸不变。构建的基因进化树分析结果显示兰州大尾羊与牛亲缘关系最近。兰州大尾羊与其他物种MAPK13基因在结构上相似性较高,说明该基因具有高度的保守性,其序列包含的S_TKc结构域可将ATP的γ磷酰基转移到蛋白质丝氨酸/苏氨酸残基上,导致一系列肥胖相关基因的功能失调和表达变化,为进一步研究MAPK13基因与成脂分化过程的相关性提供了参考。 展开更多
关键词 兰州大尾羊 mapk13基因 CDNA 末端快速扩增 生物信息学
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MAPK13调控胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化进程的机制研究 被引量:2
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作者 王俊 李建刚 李亮 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2022年第6期349-356,共8页
目的本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用。方法通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋... 目的本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用。方法通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹及免疫组化染色验证MAPK13在肿瘤组织和细胞中的表达情况。进一步通过细胞转染构建MAPK13敲低(si-MAPK13)后,通过细胞活力实验检测胆管癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭性。最后,通过裸鼠成瘤实验检测MAPK13对体内成瘤及相关蛋白表达的影响。结果本研究通过微阵列分析发现MAPK13在肿瘤组织中的表达存在显著差异,进一步通过qRT-PCR、蛋白印迹和免疫组化染色分析发现,与癌旁组织比较,MAPK13在mRNA和蛋白质水平的表达情况在肿瘤组织及细胞中均显著升高且差异具有统计学意义(t=27.92,6.90;均P<0.01)。进一步细胞活力检测表明,抑制MAPK13的表达后细胞增殖数量明显减少(F=32.13,P<0.01)。Transwell实验则显示细胞迁移和侵袭显著降低(F=52.88,38.14;均P<0.05)。与对照组比较,si-MAPK13组中E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达较高,而N钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达较低,差异均具有统计学意义(F=77.00,78.73,25.9;均P<0.01)。最后裸鼠成瘤实验表明,当MAPK13的表达受到抑制后,肿瘤的体积和重量均显著低于对照组(F=8.99,73.81;均P<0.01)。结论本研究表明,MAPK13可能通过促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭以及EMT进程,进而调控胆管癌进程。 展开更多
关键词 胆管癌 丝裂原活化蛋白激酶13(mapk13) 细胞迁移 细胞侵袭 上皮间质转化(EMT)
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LncCCAT1竞争性结合miR-583p通过调节MAPK13的表达调控乳腺癌细胞干细胞样特性 被引量:1
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作者 庄欢 朱晓磊 +3 位作者 吴晓琴 张庆 方靖 吴池华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期762-768,共7页
目的探究LncCCAT1竞争性结合miR-583p,通过调节MAPK13的表达对MCF-7细胞干细胞样特性的影响。方法从MCF-7细胞中分离乳腺癌肿瘤干细胞,q-PCR检测贴壁细胞、悬浮球细胞和再贴壁细胞中CCAT1和miR-583p表达;单独或联合转染shRNA-CCAT1-2和m... 目的探究LncCCAT1竞争性结合miR-583p,通过调节MAPK13的表达对MCF-7细胞干细胞样特性的影响。方法从MCF-7细胞中分离乳腺癌肿瘤干细胞,q-PCR检测贴壁细胞、悬浮球细胞和再贴壁细胞中CCAT1和miR-583p表达;单独或联合转染shRNA-CCAT1-2和miR-583p inhibitor至MCF-7细胞,测miR-583p表达;荧光素酶报告实验验证miR-583p与CCAT1靶向关系;将细胞分为4组:对照组、shRNA-CCAT1-2组、miR-583p inhibitor组、shRNA-CCAT1-2+miR-583p inhibitor组。ALDEFLUOR分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性;Western blot检测Y框蛋白2(SOX2)、NANOG、乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达水平;成球实验检测细胞成球直径;构建慢病毒LV-MAPK13并感染MCF-7细胞过表达MAPK13,q-PCR检测MAPK13水平,将细胞分为4组:对照、shRNA-CCAT1-2、LV-MAPK13和shRNA-CCAT1-2+LV-MAPK13组,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白表达水平。结果与贴壁细胞相比较,悬浮球细胞CCAT1表达水平升高(P<0.05),miR-583p表达水平降低(P<0.05);miR-583p和CCAT1存在直接靶向作用关系;与对照组相比较,shRNA-CCAT1-2组ALDH活性降低,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),成球直径降低(P<0.05)。miR-583p inhibitor组ALDH活性升高,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平升高(P<0.05),成球直径升高(P<0.05)。与miR-583p inhibitor组相比较,shRNA-CCAT1-2+miR-583p inhibitor组ALDH活性降低,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),成球直径降低(P<0.05);miR-583p与MAPK13存在直接靶向作用关系。与贴壁细胞相比较,悬浮球细胞MAPK13水平升高(P<0.01)。与对照组相比较,LV-MAPK13组MAPK13水平升高(P<0.001);与对照组相比较,shRNA-CCAT1-2组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),LV-MAPK13组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平升高(P<0.05)。与LV-MAPK13组相比较,shRNA-CCAT1-2+LV-MAPK13组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05)。结论LncCCAT1竞争性结合miR-583p通过调节MAPK13的表达抑制MCF-7细胞干细胞样特性。 展开更多
关键词 乳腺癌 CCAT1 miR-583p mapk13 干细胞样特性
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