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牦牛MAP3K7基因克隆及其与皮下前体脂肪细胞分化关系分析
1
作者 蓝湘一 何洋洋 +5 位作者 张明 黄慈 王海波 王会 柴志欣 钟金城 《华北农学报》 北大核心 2025年第3期225-233,共9页
MAP3K7是MAP3K家族中的一员,在脂肪分化、炎症和肿瘤发生过程中发挥着重要作用,但其与牦牛脂肪分化的关系未见报道,并且其基因序列未知,制约了相关功能研究。为了获得牦牛MAP3K7基因编码区(CDS)保守区域序列,明确其表达特征,了解其在牦... MAP3K7是MAP3K家族中的一员,在脂肪分化、炎症和肿瘤发生过程中发挥着重要作用,但其与牦牛脂肪分化的关系未见报道,并且其基因序列未知,制约了相关功能研究。为了获得牦牛MAP3K7基因编码区(CDS)保守区域序列,明确其表达特征,了解其在牦牛不同组织中的表达水平及其与牦牛皮下前体脂肪细胞分化的相关性,利用RT-PCR技术,克隆牦牛MAP3K7基因并利用生物信息学方法分析生物学特性;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测MAP3K7在牦牛心、肝、脾等10个组织中的表达情况,与不同分化阶段牦牛皮下脂肪细胞中MAP3K7基因和脂分化相关基因的表达情况,同时结合油红O染色,明确MAP3K7基因对牦牛皮下前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:克隆所得牦牛MAP3K7基因CDS区长度为1740 bp,编码579个氨基酸,与野牦牛MAP3K7预测序列CDS区比对发现第967位A>G,导致第323位氨基酸Thr>Ala的突变。理化性质分析发现,该蛋白为整体带负电的亲水酸性蛋白,具有112个氨基酸磷酸化位点,其氨基酸组成中,占比最高的是丝氨酸;二级结构预测显示,其无规卷曲含量最高,可能与TAB3等蛋白质间存在相互作用关系。核苷酸同源性比对与进化树结果表明,牦牛MAP3K7在反刍动物间具有较高的保守性,与野牦牛同源性最高且进化关系最近。组织定量检测发现,MAP3K7在牦牛皮下脂肪和内脏脂肪中的表达量相对较低,在牦牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中,MAP3K7表达量随着成熟脂肪细胞的增多先上调,至分化到一定程度后下调。综上,MAP3K7基因在牦牛皮下前体脂肪细胞分化前期高表达以促进分化,但当分化到一定程度时,表达下调抑制进一步分化。 展开更多
关键词 牦牛 map3k7 基因表达 皮下脂肪 脂肪分化
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番鸭VIPR1和miR-317以及MAP3K7和miR-244靶向关系的研究
2
作者 李丽 辛清武 +4 位作者 章琳俐 缪中纬 朱志明 梁阿政 郑嫩珠 《中国家禽》 北大核心 2024年第6期15-19,共5页
试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3... 试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3K7-Wt分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR-317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC组与miR-317组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制miR-317对VIPR1的结合作用,VIPR1与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC组与miR-244组的相对荧光值差异不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与VIPR1存在确切靶向结合位点,即VIPR1是miRNA miR-317的靶基因,而miR-244与MAP3K7不存在靶向关系。 展开更多
关键词 番鸭 就巢 miR-317 miR-244 map3k7 VIPR1
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人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定 被引量：1
3
作者 冯艳玲 刘彩红 朱亚勤 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期688-690,共3页
目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序... 目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白。结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 人map3k7基因 基因克隆 融合蛋白 原核表达
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MAP3K7CL基因在鹅肥肝形成中的表达及功能研究
4
作者 范翔 李振慧 +4 位作者 孙青云 刘龙 赵敏孟 耿拓宇 龚道清 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2022年第1期49-55,共7页
免疫标记基因(如TNF-α)和内质网应激标记基因(如GRP78)在鹅肥肝形成中的表达受到抑制,而MAP3 K7CL基因与鹅肝细胞中的GRP78表达呈负相关,且参与免疫和信号传导,提示该基因可能参与鹅肥肝的形成。为探究MAP3 K7CL基因在鹅肥肝形成中的... 免疫标记基因(如TNF-α)和内质网应激标记基因(如GRP78)在鹅肥肝形成中的表达受到抑制,而MAP3 K7CL基因与鹅肝细胞中的GRP78表达呈负相关,且参与免疫和信号传导,提示该基因可能参与鹅肥肝的形成。为探究MAP3 K7CL基因在鹅肥肝形成中的表达规律及功能,选取24只70日龄朗德公鹅,随机分为对照组和填饲组(各12只),填饲组包括填饲12和24d 2个阶段。采用qPCR技术测定MAP3 K7CL基因在不同填饲阶段朗德鹅肝脏组织中的表达水平,探究葡萄糖、胰岛素、油酸、棕榈酸等不同因子对鹅原代肝细胞中MAP3 K7CL表达的影响以及MAP3 K7CL过表达对其下游基因的影响。结果表明:与对照组相比,填饲极显著诱导肝脏中MAP3 K7CL基因表达;在鹅原代肝细胞中,葡萄糖、胰岛素和棕榈酸显著抑制MAP3 K7CL基因的表达,而油酸显著诱导MAP3 K7CL基因表达;MAP3 K7CL基因过表达后显著上调其下游的MAF1基因,显著下调EP300基因表达并有上调NDUFS3基因表达的趋势,且这些基因表达的变化模式与鹅肥肝中的情况一致。综合而言,鹅肥肝中油酸升高可能是诱导MAP3 K7CL基因表达的重要因素;而MAP3 K7CL基因可能通过影响EP300、MAF1和NDUFS3等基因的表达参与鹅肥肝的形成,与氧化还原反应、糖类脂肪蛋白质代谢以及免疫和防御反应等生物学过程有关。 展开更多
关键词 朗德鹅 MAP3 K7CL 脂肪肝 油酸
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内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控 被引量：6
5
作者 刘同君 赵盼 +4 位作者 赵敏孟 刘龙 崔恒宓 龚道清 耿拓宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期727-737,共11页
旨在揭示内质网应激(ERS)标记基因Grp78是否参与鹅肥肝中炎症/免疫相关基因的表达调控。本试验选择健康的、体重相近的70日龄朗德鹅30只(未分公母),随机分为对照组(n=15)和填饲组(n=15)。利用荧光定量PCR测定不同填饲阶段(填饲7、14、19... 旨在揭示内质网应激(ERS)标记基因Grp78是否参与鹅肥肝中炎症/免疫相关基因的表达调控。本试验选择健康的、体重相近的70日龄朗德鹅30只(未分公母),随机分为对照组(n=15)和填饲组(n=15)。利用荧光定量PCR测定不同填饲阶段(填饲7、14、19 d)不同组织中Grp78的相对表达量(n=4),以明晰Grp78与鹅肥肝形成的关联;在鹅原代肝细胞中过表达Grp78,并通过RNA-seq分析Grp78所影响的信号通路和基因(n=3);利用荧光定量PCR检测鹅肥肝中与炎症/免疫相关的基因表达量(n=4),以明晰这些基因与Grp78的关联。结果表明,肝和腹脂中Grp78的表达量受填饲影响(肝中下降,而腹脂中上升)。Grp78基因的过表达试验表明,ERS除了可影响已知的代谢病和细胞凋亡通路外,还影响信号转导、免疫等通路。在免疫/炎症方面,"Toll-like receptor signaling pathway"、"TNFαsignaling pathway"、"NF-kappa B signaling pathway"等通路最为突出。此外,免疫/炎症相关基因Tnfsf10、Map3k7cl在鹅原代细胞中的表达受Grp78过表达影响,在鹅肥肝中受填饲影响。总之,本研究揭示了Grp78/ERS新的生物学功能,即对细胞的免疫/炎症状态进行调控,并借此参与鹅肥肝的形成。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 内质网应激 免疫 鹅 Tnfsf10 map3k7cl
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