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副结核分枝杆菌MAP0862-1595融合蛋白的表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 李晓宇 马聿田 +5 位作者 李阳 梁雯 阿丽雅 吉林台 马慧君 希尼尼根 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第6期1-9,共9页
为了建立基于重组蛋白MAP0862-1595的山羊副结核病诊断方法,本研究筛选副结核分枝杆菌的2个基因MAP0862与MAP1595,通过重叠延伸PCR技术将获得MAP0862-1595融合基因与重组质粒载体pEASY-T1及表达重组质粒载体pET30a连接,通过Western-blo... 为了建立基于重组蛋白MAP0862-1595的山羊副结核病诊断方法,本研究筛选副结核分枝杆菌的2个基因MAP0862与MAP1595,通过重叠延伸PCR技术将获得MAP0862-1595融合基因与重组质粒载体pEASY-T1及表达重组质粒载体pET30a连接,通过Western-blot方法验证MAP0862-1595重组蛋白的反应原性,通过以纯化后的重组蛋白MAP0862-1595作为包被抗原和反应条件优化构建间接ELISA法。结果显示:重叠延伸PCR扩增出MAP0862和MAP1595融合基因片段,长度为1601 bp;成功构建克隆重组质粒pEASY-MAP0862-1595和表达重组质粒pET30a-MAP0862-1595;MAP0862-1595重组蛋白大小约为70 kDa,主要以包涵体形式存在;Western-blot验证该蛋白能与副结核分枝杆菌阳性血清特异性结合反应。将纯化后MAP0862-1595蛋白以1μg/孔包被,一抗血清以1∶400稀释,以5%脱脂乳进行封闭,二抗以1∶50000稀释,成功构建ELISA检测法。ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为副结核病的检测及试剂盒的开发提供了技术支持。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 MAP0862 map1595 串联表达
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牛副结核分枝杆菌(MAP)MAP3290-1595串联蛋白的原核表达及反应原性检测报告 被引量：1
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作者 张哲 周子恒 +5 位作者 蔡卓轩 张彦红 杨艳 钱天皓 李岩 盛金良 《当代畜牧》 2020年第2期25-29,共5页
原核表达纯化牛副结核分枝杆菌MAP3290-1595蛋白,为检测牛副结核分枝杆菌提供了新的材料。笔者通过基因串联融合MAP3290和MAP1595基因,获得MAP3290-1595基因,并使用DNAMAN软件对MAP3290-1595基因序列进行分析;构建重组质粒pET30aMAP3290... 原核表达纯化牛副结核分枝杆菌MAP3290-1595蛋白,为检测牛副结核分枝杆菌提供了新的材料。笔者通过基因串联融合MAP3290和MAP1595基因,获得MAP3290-1595基因,并使用DNAMAN软件对MAP3290-1595基因序列进行分析;构建重组质粒pET30aMAP3290-1595,将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG诱导目的蛋白表达;使用亲和层析法对目的蛋白进行亲和纯化,从而获得MAP3290-1595蛋白;利用Western Blot方法对该蛋白进行质检。成功表达纯化出MAP3290-1595蛋白。该蛋白大小为43 k Da,浓度为0.430 mg/mL,纯度大于90%。本试验成功获得MAP3290-1595蛋白,利用Western Blot和间接ELISA法检测该蛋白的反应原性,与牛副结核阴性血清反应良好,得出该蛋白具有良好的反应原性,为建立牛副结核分支杆菌检测方法提供材料。 展开更多
关键词 牛副结核分枝杆菌 MAP3290-1595蛋白 原核表达
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