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白念珠菌DNA损伤修复因子MAG1功能鉴定及其调控毒力作用
1
作者 李锦源 杨莎玲 冯金荣 《中国热带医学》 北大核心 2025年第4期398-403,共6页
目的探索白念珠菌(Candida albicans)MAG1基因在DNA损伤应答反应和毒力调控中的作用,以期为真菌病的防治和药物研发提供新的作用靶点。方法运用瞬时CRISPR/Cas9系统构建白念珠菌MAG1缺失株;同时,利用CIP10-ADH1p高表达质粒构建MAG1高表... 目的探索白念珠菌(Candida albicans)MAG1基因在DNA损伤应答反应和毒力调控中的作用,以期为真菌病的防治和药物研发提供新的作用靶点。方法运用瞬时CRISPR/Cas9系统构建白念珠菌MAG1缺失株;同时,利用CIP10-ADH1p高表达质粒构建MAG1高表达菌株。通过平板表型实验检测MAG1缺失株、回复株和高表达菌株在不同试剂胁迫下的表型;利用液体和固体菌丝生成实验探索MAG1缺失对白念珠菌菌丝生成的影响;利用大蜡螟(Galleriamellonella)幼虫建立感染模型检测MAG1缺失对白念珠菌毒力的影响。结果成功构建MAG1缺失株和高表达菌株,发现MAG1缺失株对0.015%甲基磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)高度敏感,而在缺失株中重新导入MAG1基因可以完全弥补其对不同浓度MMS的敏感性表型。此外,MAG1高表达菌株对0.015%MMS表现出抗性,而对40 mmol/L羟基脲(hydroxyurea,HU)呈现轻微的敏感性表型。在液体或固体20%胎牛血清和Spider培养基中,MAG1缺失株的菌丝长度和结构以及菌落形态与野生型菌株相比均无明显差别。在大蜡螟感染模型中,感染野生型菌株的大蜡螟幼虫平均存活期为1 d,而感染MAG1缺失株的大蜡螟幼虫存活期显著延长,平均存活期为3 d,与野生型组相比存活期差异有统计学意义(P<0.05)。结论MAG1基因缺失导致白念珠菌对DNA损伤胁迫试剂MMS敏感,且MAG1基因缺失不影响菌丝生成,但导致白念珠菌致病能力显著下降。因此,白念珠菌MAG1在DNA损伤应答中发挥重要作用,从而为深入了解白念珠菌致病机制与真菌病防治提供了新方向。 展开更多
关键词 白念珠菌 mag1蛋白 DNA损伤 菌丝 毒力
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犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达 被引量：2
2
作者 焦石 贾立军 +4 位作者 张立霞 钱年超 刘明明 黄国明 张守发 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期386-388,408,共4页
根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼... 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 mag1 IFN-Γ 原核共表达
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牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
3
作者 焦石 贾立军 +3 位作者 薛书江 刘明明 黄国明 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期31-34,共4页
为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的免疫学特性,根据MAG1基因序列,设计并合成了1对用于扩增MAG1基因的引物。将PCR扩增产物连接到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果显示,MAG1在大肠杆菌中获得了较高水平的表... 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的免疫学特性,根据MAG1基因序列,设计并合成了1对用于扩增MAG1基因的引物。将PCR扩增产物连接到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果显示,MAG1在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达蛋白的分子质量为65ku。Western-blot结果显示,表达的MAG1蛋白可被牛源犬新孢子虫阳性血清特异性识别,表明该MAG1蛋白具有较好的反应原性。本研究为新孢子虫病疫苗及诊断试剂盒的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 mag1基因 原核表达
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牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及在Vero细胞中表达
4
作者 焦石 贾立军 +2 位作者 刘明明 黄国明 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期870-872,共3页
为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性,本实验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,构建真核表达重组质粒pVAX-MAG1,将鉴定正确的pVAX-MAG1重组质粒转染Vero细胞,应用间接荧光检测方法(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Ver... 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性,本实验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,构建真核表达重组质粒pVAX-MAG1,将鉴定正确的pVAX-MAG1重组质粒转染Vero细胞,应用间接荧光检测方法(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达。结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫MAG1基因长度为1 047 bp,与GenBank中登录的MAG1(EF580924.1)核苷酸序列同源性为99%,IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为39 ku,具有较好的反应原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗与诊断试剂盒的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 mag1基因 真核表达
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犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
5
作者 焦石 贾立军 +4 位作者 张立霞 钱年超 刘明明 黄国明 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期662-666,共5页
为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western b... 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 mag1-IFN-γ 真核共表达
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犬新孢子虫不同靶基因PCR检测方法的比较 被引量：3
6
作者 郭焕平 贾立军 +1 位作者 焦石 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期954-957,共4页
为筛选出检测犬新孢子虫更为特异、敏感的PCR方法,分别以MAG1、SAG1和Nc5为靶基因进行PCR检测,并从敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,以Nc5为靶基因的PCR方法敏感性最高,最小检测DNA量为17.8fg/μL;以MAG1为... 为筛选出检测犬新孢子虫更为特异、敏感的PCR方法,分别以MAG1、SAG1和Nc5为靶基因进行PCR检测,并从敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,以Nc5为靶基因的PCR方法敏感性最高,最小检测DNA量为17.8fg/μL;以MAG1为靶基因的PCR方法敏感性最低,最小检测DNA量为17.8pg/μL;而以SAG1为靶基因的PCR方法的最低检测量为178fg/μL;3种靶基因引物均扩增不出刚地弓形虫、牛瑟氏泰勒虫、猪附红细胞体等基因片段,具有较好的特异性;对28份已攻犬新孢子虫标准株的BALB/c小鼠组织样本的检测结果表明,以Nc5基因设计的引物检出率最高,为75.0%(21/28),明显高于SAG1基因的67.9%(19/28)和MAG1基因的53.6%(15/28)。本试验为新孢子虫病的诊断及流行病学调查提供了更为敏感、特异的检测技术。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 mag1基因 SAG1基因 Nc5基因 PCR方法
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MAG2复合体MAG2和MIP3二亚基缺失对植物生长发育的影响 被引量：1
7
作者 张海龙 赵潇男 +3 位作者 申哲 杨孝丽 张忠阳 李立新 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期674-679,共6页
真核细胞中,各细胞器之间的物质交流主要是通过膜泡运输完成的。膜泡运输依赖多种跨膜蛋白和可溶性蛋白的协同作用来完成。我们前期研究发现的拟南芥MAG2是在高尔基体与内质网之间的膜泡运输过程中起作用的拴留因子,MAG2与MIP1、MIP2和M... 真核细胞中,各细胞器之间的物质交流主要是通过膜泡运输完成的。膜泡运输依赖多种跨膜蛋白和可溶性蛋白的协同作用来完成。我们前期研究发现的拟南芥MAG2是在高尔基体与内质网之间的膜泡运输过程中起作用的拴留因子,MAG2与MIP1、MIP2和MIP3形成拴留复合体,对种子储藏蛋白从内质网的运离起重要的调控作用。为了深入了解MAG2参与的膜泡运输途径的分子机制,我们制作了mag2-1xmip3-1双重突变体。通过一系列观察分析发现,当MAG2和MIP3同时缺失,不仅种子储藏蛋白质的运输受到严重阻碍,植物的生长发育也受到严重影响,对环境条件的变化更加敏感。研究结果表明,MAG2复合体不仅调控蛋白质的运输,还对植物的生长发育有重要调控作用。 展开更多
关键词 MAG2 mag2-1xmip3-1 膜泡运输 植物生长发育 胁迫应答
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大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后MBP、MAGLingo-1的表达及丁苯酞对其的影响 被引量：5
8
作者 白小梅 李正仪 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2019年第10期868-872,共5页
目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织中髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和Nogo受体作用蛋白-1(Lingo-1)表达情况及丁苯酞(NBP)对其的影响。方法 72只大鼠随机分为对照组、模型组和药物组。通过阻塞大鼠左侧大脑中动脉... 目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织中髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和Nogo受体作用蛋白-1(Lingo-1)表达情况及丁苯酞(NBP)对其的影响。方法 72只大鼠随机分为对照组、模型组和药物组。通过阻塞大鼠左侧大脑中动脉造成脑缺血2 h后再灌注1 d、3 d、5 d、7 d,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。药物组大鼠腹腔注射丁苯酞20 mg/(kg·d),2次/d;对照组注射生理盐水。用免疫组化法检测大鼠缺血侧脑皮质MBP、MAG和Lingo-1的表达并测定相应灰度值。结果模型组、药物组较对照组MBP表达减少,MAG及Lingo-1表达增多;药物组较模型组MBP表达增多,MAG表达减少,差异均有统计学意义(P <0. 05);药物组和模型组Lingo-1表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论脑缺血再灌注诱发脑皮质髓鞘损伤,丁苯酞对受损髓鞘有一定保护作用。 展开更多
关键词 缺血再灌注 髓鞘 MBP/MAG/Lingo-1 丁苯酞
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