GPR120介导NF-κB和MAPK调控LTA诱导的Mac-T细胞的保护作用

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作者 王斯琦 周佩瑶 +9 位作者 牟泉宙 宛麟 李鑫丽 李杨 何兴丽 王昭元 王梓 高梓强 赵志辉 沈冰蕾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2165-2171,共7页

采用脂磷壁酸(lipophosphatidic acid,LTA)刺激Mac-T细胞,通过Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平,以及上游的关键作用因子TLR4... 采用脂磷壁酸(lipophosphatidic acid,LTA)刺激Mac-T细胞,通过Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平,以及上游的关键作用因子TLR4和MyD88蛋白表达水平;EDU法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示,激活G蛋白偶联受体120(G protein-coupled receptors 120,GPR120)能显著降低Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平;抑制GPR120能够上调Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平;激活GPR120可以极显著的缓解由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.01);抑制GPR120会显著加剧由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.05);LTA刺激会导致Mac-T细胞增殖水平呈减弱趋势,凋亡率显著增高,而激活GPR120基因可极显著增加细胞活性(P<0.01),促进细胞增殖,显著减少细胞凋亡(P<0.05)从而缓解了由LTA对Mac-T细胞的损伤;LTA刺激可使细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),激活GPR120基因则可极显著(P<0.01)的逆转LTA所诱导的Mac-T细胞的凋亡率的提高;而抑制GPR120基因后可增强LTA对细胞凋亡的促进作用(P<0.05),表明激活GPR120基因可以减弱由LTA诱导的炎性Mac-T细胞导致的凋亡率增加。结果表明,GPR120可通过介导TLR4和MyD88表达抑制NF-κB/MAPK炎症通路活化调控炎症并能够促进细胞增殖。 展开更多

关键词 GPR120 mac-t细胞 NF-ΚB MAPK

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激活和抑制GPR120基因对奶牛MAC-T细胞乳脂代谢及炎性反应的影响

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作者 宛麟 周佩瑶 +9 位作者 牟泉宙 李鑫丽 王斯琦 李杨 何兴丽 王昭元 王梓 高梓强 赵志辉 沈冰蕾 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2655-2660,共6页

GPR120作为受体蛋白可被长链脂肪酸(如ω-3脂肪酸,α-亚麻酸,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸)激活,在胃肠道肽的释放、炎症、脂肪生成、葡萄糖耐量,胰岛素敏感性等过程中发挥重要调控作用。为了研究GPR120基因对奶牛MAC-T细胞乳脂代谢及... GPR120作为受体蛋白可被长链脂肪酸(如ω-3脂肪酸,α-亚麻酸,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸)激活,在胃肠道肽的释放、炎症、脂肪生成、葡萄糖耐量,胰岛素敏感性等过程中发挥重要调控作用。为了研究GPR120基因对奶牛MAC-T细胞乳脂代谢及抗炎的协同调控作用,使用GPR120激活剂TUG-891与抑制剂AH7614对奶牛MACT细胞进行处理以及对LTA诱导的炎性奶牛MAC-T细胞进行处理检测乳脂合成关键基因及炎性因子的表达。结果显示,GPR120基因激活剂能显著提高乳脂合成关键基因胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)和脂肪酸合成酶(FASN)的相对表达量,在炎性奶牛MAC-T细胞模型下能降低炎性因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达量,初步揭示GPR120协同调控奶牛乳脂与乳房炎症,为后续分子机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 GPR120基因 mac-t细胞 乳脂合成 炎性因子

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芹菜素通过NF-κB和MAPK通路抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺的炎性反应 被引量：7

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作者 陈喜宏 余世田 +4 位作者 马骁 路桂聪 王瑞宏 玉永雄 蒋曹德 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2042-2050,共9页

为揭示芹菜素对奶牛乳腺炎的抑制作用及其机制,本研究采用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞,MTT方法检测芹菜素对奶牛乳腺上皮细胞MAC-T的毒性;real-time PCR和Western blot方法检测炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(... 为揭示芹菜素对奶牛乳腺炎的抑制作用及其机制,本研究采用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞,MTT方法检测芹菜素对奶牛乳腺上皮细胞MAC-T的毒性;real-time PCR和Western blot方法检测炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及氧化应激因子诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧酶2(COX-2)的表达水平;Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平;免疫荧光检测NF-κB的核转移情况。结果表明:芹菜素(1,7,15 mg/L)显著降低了MAC-T细胞和小鼠乳腺中LPS诱导的COX-2、iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白质的表达水平(P<0.01)。而且,芹菜素显著降低了MAC-T细胞以及小鼠乳腺中LPS诱导的NF-κB(p65和IκBα)(P<0.05)和MAPK(p38、JNK1/2和ERK1/2)(P<0.01)的磷酸化水平,抑制了NF-κB p65的核转移。这些结果说明芹菜素通过抑制NF-κB和MAPK信号通路活性抑制乳腺细胞的炎性反应,但是芹菜素在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究。 展开更多

关键词 芹菜素 抗炎作用 MAPK NF-ΚB mac-t细胞 小鼠乳腺

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PRNP过表达MAC-T细胞的构建及其对细胞黏附侵袭的影响

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作者 张钊 颜丽娇 +7 位作者 杨宇泽 苟惠天 万学瑞 马小军 丁巨财 彭婕 王川 张小丽 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第4期37-45,共9页

【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRS... 【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRSA感染MAC-T细胞和PRNP过表达MAC-T细胞系,比较PRNP过表达MAC-T细胞和野生型MAC-T细胞在黏附侵袭生理特性的差异。【结果】成功构建pLVML-PRNP慢病毒表达载体和稳定的PRNP+-MAC-T细胞系;黏附侵袭结果表明MRSA对过表达PRNP的MAC-T细胞黏附侵袭能力显著低于对照组,值得注意的是,MRSA在感染PRNP+-MAC-T细胞后的6 h内,未发生明显的侵袭现象,直至感染6 h后其侵袭率才明显上升,8 h达到峰值,但是仍显著低于MRSA对MAC-T细胞的侵袭率。【结论】PRNP过表达能够降低MRSA对细胞的黏附侵袭能力。 展开更多

关键词 慢病毒载体 PRNP mac-t细胞 MRSA

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姜黄素影响铁死亡途径缓解LPS诱导牛乳腺上皮细胞炎性反应的分析

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作者 杨文哲 王锦浩 +7 位作者 赵子琛 赵彤 潘飞龙 陈芳芳 邵雯琪 刘克祥 赵树臣 赵立佳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4730-4740,共11页

本研究旨在从铁死亡途径探究姜黄素(curcumin,Cur)对脂多糖(LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的影响。将处于对数生长期的MAC-T细胞按照试验要求随机分组并进行相应的处理,每组3个重复。采用MTT法测定不同浓度的LPS/Cur对MAC-T... 本研究旨在从铁死亡途径探究姜黄素(curcumin,Cur)对脂多糖(LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的影响。将处于对数生长期的MAC-T细胞按照试验要求随机分组并进行相应的处理,每组3个重复。采用MTT法测定不同浓度的LPS/Cur对MAC-T细胞存活率的影响;RT-PCR法检测炎症相关基因(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、CXCL2、CCL2)与铁死亡相关基因(PTGS2、SLC7A11、GPX4、FTH1、ACSL4)的转录水平;BODIPY 581/591 C11染色检测细胞脂质过氧化水平;试剂盒检测细胞中MDA含量、LPO浓度、GSH含量、GSH/GSSG比值;Ferro-Orange染色和Fe2+检测试剂盒测定细胞中Fe2+含量;ELISA试剂盒检测细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β浓度;Western blot检测GPX4、ACSL4、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白的相对表达水平。结果显示,与CON组相比,10μg·mL^(-1)LPS或20μmol·L^(-1)Cur处理对MAC-T细胞存活率无显著影响。LPS处理后细胞中促炎相关基因(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、CXCL2、CCL2)、促铁死亡相关基因(PTGS2、ACSL4)以及相关蛋白(ACSL4)的表达水平极显著升高(P<0.01);抗铁死亡相关基因(SLC7A11、GPX4、FTH1)和蛋白(GPX4)的表达水平极显著下降(P<0.01);MDA含量和LPO浓度均极显著升高(P<0.01);GSH含量和GSH/GSSG比值均极显著下降(P<0.01);Fe2+含量极显著升高(P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度和蛋白的表达水平均极显著升高(P<0.01)。与LPS单独处理组相比,LPS与Cur-H共处理组促炎相关基因、促铁死亡相关基因以及相关蛋白的表达水平极显著下降(P<0.01);抗铁死亡相关基因和蛋白的表达水平极显著升高(P<0.01);脂质过氧化水平、MDA含量和LPO浓度均极显著下降(P<0.01);GSH含量和GSH/GSSG比值均极显著升高(P<0.01);Fe^(2+)含量极显著下降(P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度和蛋白的表达水平均极显著下降(P<0.01)。此外,铁死亡激活剂Erastin显著抑制了Cur对LPS诱导炎症的缓解作用。综上所述,Cur可通过抑制铁死亡缓解LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应。 展开更多

关键词 铁死亡 姜黄素 脂多糖 牛乳腺上皮细胞(mac-t)

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金黄色葡萄球菌噬菌体脂质体的制备及胞内抗菌活性

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作者 杨书博 苑庆欣 +4 位作者 陈麒百 王培 高东阳 李鹤 宋军 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4638-4645,共8页

本试验旨在探讨脂质体作为载体,包封递送噬菌体入胞及噬菌体脂质体对牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌的抗菌作用。本试验采用薄膜水合法制备脂质体,用于包封噬菌体SDQ制备噬菌体脂质体,并测定其酸碱稳定性和热稳定性。使用激光粒度仪测... 本试验旨在探讨脂质体作为载体,包封递送噬菌体入胞及噬菌体脂质体对牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌的抗菌作用。本试验采用薄膜水合法制备脂质体,用于包封噬菌体SDQ制备噬菌体脂质体,并测定其酸碱稳定性和热稳定性。使用激光粒度仪测定噬菌体脂质体粒径大小、多分散系数和Zeta电位,结合透射电镜观察噬菌体脂质体结构特征。采用CCK-8法测定噬菌体脂质体对MAC-T细胞活力的影响。通过平板计数法测定噬菌体脂质体入胞效率和胞内杀菌活性。最终,选择大豆卵磷脂、胆固醇、吐温80、十八胺以8∶2∶1∶0.5比例制备脂质体,包封噬菌体SDQ后制备噬菌体脂质体(Lip-p-7)。Lip-p-7包封率大于50%,在温度(4~60℃)和pH值(2~11)范围内活性稳定。Lip-p-7平均粒径为1262.5 nm,Zeta电位从中性转向带负电荷,表明脂质体成功包封噬菌体SDQ;多分散系数(polydispersity index,PDI)小于0.7,表明其均匀分散。制备后的Lip-p-7储存于4℃条件下,可在90 d内保持完整活性,具有良好的稳定性。脂质体可有效提升噬菌体SDQ入胞数量,降低MAC-T细胞内金黄色葡萄球菌数量。综上,本试验为脂质体作为载体递送噬菌体入胞,为治疗胞内细菌感染提供参考。 展开更多

关键词 脂质体 噬菌体 金黄色葡萄球菌 牛乳腺上皮细胞 胞内抗菌活性

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复合式机器人接触式测量站位规划方法

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作者 郭建平 李泷杲 +2 位作者 黄翔 侯国义 吴浩 《航空制造技术》 CSCD 北大核心 2024年第7期131-138,共8页

在航空各部件的大空间测量中,针对人工测量工作强度大、检测精度不稳定、检测效率低等问题,提出基于全向移动复合式机器人的接触式测量机器人站位规划方法。首先进行机器人D-H参数建立以及关节转角求解,构建测量可达性约束模型,分析工... 在航空各部件的大空间测量中,针对人工测量工作强度大、检测精度不稳定、检测效率低等问题,提出基于全向移动复合式机器人的接触式测量机器人站位规划方法。首先进行机器人D-H参数建立以及关节转角求解,构建测量可达性约束模型,分析工具末端对机器人工作空间以及T-Mac与激光跟踪仪之间激光可达性的影响;然后针对最大工作限位和关节转角限位约束对大部件轴向以及径向进行机器人站位规划算法流程开发,保证测量特征点处于机器人工作限位内;最后基于AnyCAD几何引擎在三维虚拟环境中进行CAD模型测量特征点提取、站位规划、测量仿真。通过实例仿真试验对规划结果进行验证及评价,证明了站位规划算法可保证全部测量点的机器人可达性与激光可达性。 展开更多

关键词 复合式机器人 激光跟踪仪 T-MAC 站位规划 接触式测量 AnyCAD

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褪黑素对热应激奶牛乳腺上皮细胞及育成牛血清HSP70含量的影响 被引量：3

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作者 史素荣 宋志恒 +3 位作者 周亚星 张桂枝 刘太宇 刘亚红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第15期68-73,共6页

为了研究褪黑素(MLT)对热应激奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)及中国荷斯坦育成牛血清中热休克蛋白70(HSP70)含量的影响,试验将体外培养的MAC-T分为对照组、热应激组、热应激+150μmol/L MLT组,以42℃作为热应激模型温度,37℃作为对照组培养温... 为了研究褪黑素(MLT)对热应激奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)及中国荷斯坦育成牛血清中热休克蛋白70(HSP70)含量的影响,试验将体外培养的MAC-T分为对照组、热应激组、热应激+150μmol/L MLT组,以42℃作为热应激模型温度,37℃作为对照组培养温度,采用细胞增殖法检测细胞活力、实时荧光定量PCR检测细胞凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3),炎性因子IL-6、IL-8和HSP70 mRNA相对表达量;以处于热应激状态的中国荷斯坦育成牛为试验动物,随机分为对照组、试验A组、试验B组,分别皮下注射0,4.6,46 mg/d MLT,采用ELISA试剂盒测定奶牛血清中HSP70含量。结果表明:热应激处理4 h的MAC-T细胞活力与对照组相比显著降低(P<0.05),添加150μmol/L MLT可以显著升高MAC-T细胞活力(P<0.05);与对照组比较,热应激可以极显著上调MAC-T细胞凋亡因子Caspase-3和HSP70 mRNA的相对表达量(P<0.01),显著上调炎性因子IL-6、IL-8的相对表达量(P<0.05);与热应激组比较,添加150μmol/L MLT可以极显著上调HSP70 mRNA的相对表达量(P<0.01),极显著下调细胞凋亡因子Caspase-3(P<0.01)及显著下调炎性因子IL-6、IL-8(P<0.05)的相对表达量;皮下注射46 mg/d MLT可显著提升热应激育成牛第6天血清HSP70的含量(P<0.05)。说明MLT可以提高热应激MAC-T的应激耐受性,减少炎性损伤和细胞凋亡;皮下注射46 mg/d MLT可以提高育成牛的热应激耐受性,有利于高温环境中维持自身内环境的稳定。 展开更多

关键词 褪黑素 热应激 mac-t细胞 荷斯坦育成牛 热休克蛋白70

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安石榴苷缓解金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺炎的研究 被引量：2

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作者 杨晴 蔡文锦 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期127-133,共7页

为了研究安石榴苷(punicalagin,PC)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导的乳腺炎的干预作用及其改善乳腺炎的作用机制,试验用S.aureus建立小鼠乳腺炎模型和MAC-T细胞炎症模型,利用RT-qPCR技术检测小鼠乳腺组织TNF-α... 为了研究安石榴苷(punicalagin,PC)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导的乳腺炎的干预作用及其改善乳腺炎的作用机制,试验用S.aureus建立小鼠乳腺炎模型和MAC-T细胞炎症模型,利用RT-qPCR技术检测小鼠乳腺组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10等,MAC-T细胞中炎性介质和炎性因子,紧密连接基因(occludin和ZO-1)和炎性通路关键信号分子(TLR2和NF-κB p65)mRNA表达水平,利用Western-blot技术检测MAC-T细胞中MyD88蛋白表达水平。结果表明:PC能显著抑制小鼠乳腺内S.aureus的生长和定植(P<0.05),显著降低小鼠乳腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA表达水平(P<0.05),显著升高了IL-10mRNA的表达水平(P<0.05);80μmol/mL PC还可显著抑制MAC-T细胞中炎性介质含量和炎性因子、TLR2、NF-κB p65基因mRNA的表达及MyD88蛋白的表达(分别降低了44.13%、45.89%和56.62%,P<0.05),并显著上调IL-10mRNA的表达水平以及occludin和ZO-1的转录量(P<0.05)。说明PC对S.aureus诱导的乳腺炎有显著的预防效果,主要机制是通过TLR2/MyD88/NF-κB途径抑制炎性级联放大反应,同时上调紧密连接蛋白表达,纠正S.aureus诱导的乳腺上皮MAC-T细胞屏障功能紊乱。 展开更多

关键词 安石榴苷 金黄色葡萄球菌 乳腺炎 mac-t细胞 炎性通路 紧密连接基因

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槲皮素通过Nrf2信号通路缓解LPS诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激 被引量：9

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作者 任晓丽 皇甫和平 +4 位作者 米俊宪 宋予震 靳双星 王俊东 石冬梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2590-2596,共7页

旨在探究槲皮素(quercetin,QU)通过Nrf2信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激的作用及其机制。以牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞为研究对象,用2.5、5.0和10.0μmol/L QU预处理MAC-T细胞12 h后加入1 mg/L ... 旨在探究槲皮素(quercetin,QU)通过Nrf2信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激的作用及其机制。以牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞为研究对象,用2.5、5.0和10.0μmol/L QU预处理MAC-T细胞12 h后加入1 mg/L LPS处理12 h后;利用试剂盒分别检测LDH活性、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性。Western blot和RT-qPCR方法分别检测核转录因子Nrf2相关因子(nuclear factor E2-related factor,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶NADH1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)基因和蛋白表达变化。结果显示,与对照组相比,1 mg/L LPS组中ROS和MDA的含量显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和CAT活性显著降低(P<0.05),Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);与LPS组相比,QU预处理能显著降低ROS和MDA的含量(P<0.05),而SOD和GSH-px活性显著升高,且呈剂量依赖性;此外,QU+LPS组能显著上调MAC-T细胞内Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白相对表达水平(P<0.05)。结果表明,QU通过激活Nrf2信号通路缓解LPS诱导的牛乳腺上皮细胞的氧化应激。 展开更多

关键词 槲皮素 LPS mac-t细胞 氧化应激 Nrf2信号通路

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不同功能性油脂对乳腺上皮细胞乳脂合成基因表达的影响 被引量：5

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作者 徐子娴 张涛 +4 位作者 雷志良 迟玉杨 张晶 周长海 金永成 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期949-954,共6页

通过将不同种类功能性油脂(亚麻籽油、油茶籽油以及菜籽油)添加到乳腺上皮细胞中,研究其对奶牛乳腺上皮细胞中SREBP基因相关信号通路表达的影响。试验选用奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)进行体外培养,然后在分化培养基中分别添加相同浓度的不... 通过将不同种类功能性油脂(亚麻籽油、油茶籽油以及菜籽油)添加到乳腺上皮细胞中,研究其对奶牛乳腺上皮细胞中SREBP基因相关信号通路表达的影响。试验选用奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)进行体外培养,然后在分化培养基中分别添加相同浓度的不同功能性油脂,利用实时荧光定量PCR方法检测其对甘油三酯合成基因(LPL、AGPAT3)、活化和转运基因(FASN、ACACA、SCD)表达的影响;检测其对脂肪酸网络调控基因(SREBP1C、PPARγ)表达的影响。结果表明,油茶籽油能促进ACACA、SREBP1C、FASN、AGPAT3以及SCD基因的表达,抑制PPARγ基因的表达;亚麻籽油和菜籽油对乳脂合成的相关基因基本没有促进作用,但是3种不同种类的功能性油脂均可以抑制PPARγ基因的表达。 展开更多

关键词 乳腺上皮细胞(mac-t) 功能性油脂 乳脂合成 实时荧光定量PCR

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利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过NF-κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应 被引量：4

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作者 陈喜宏 路桂聪 +4 位作者 王浩磊 苟少校 玉永雄 林涛 蒋曹德 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3931-3940,共10页

旨在探究异绿原酸C(ICAC)对乳腺炎及NF-κB炎性通路的抑制作用。本研究以脂多糖(LPS)分别刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型,采用MTT方法筛选ICAC处理MAC-T细胞的适宜浓度,ELISA检测炎性因子(IL-1β、IL-6... 旨在探究异绿原酸C(ICAC)对乳腺炎及NF-κB炎性通路的抑制作用。本研究以脂多糖(LPS)分别刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型,采用MTT方法筛选ICAC处理MAC-T细胞的适宜浓度,ELISA检测炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和炎性介导因子(COX-2和iNOS)的表达水平,Western blot方法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκB和p65)的表达水平和磷酸化水平。结果发现:1)ICAC在20~100 mg·L^(-1)的浓度下对MAC-T细胞没有显著的生长抑制作用(P>0.05);2)1 mg·L^(-1)的LPS处理引起MAC-T细胞中IL-1β、IL-6的蛋白质表达量极显著高于对照组(P<0.01),ICAC处理(20、50、80 mg·L^(-1))极显著下调了MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和iNOS的表达量(P<0.01);3)小鼠腹腔注射的ICAC(60、80、100 mg·kg^(-1))均降低了LPS诱导的CD3的表达,小鼠乳腺组织T淋巴细胞浸润减少;4)ICAC显著降低了LPS诱导的MAC-T细胞和小鼠乳腺组织中p65和IκB的磷酸化水平(P<0.05),抑制了p65的核转移。上述结果说明,异绿原酸C通过NF-κB炎性通路抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺组织的炎性反应,但是异绿原酸C在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究。 展开更多

关键词 异绿原酸C 抗炎作用 NF-ΚB mac-t 小鼠乳腺

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圣草酚促进miR-128缓解金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤 被引量：3

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作者 陈鹏举 史迎迎 +1 位作者 赵庆枫 张光辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2045-2051,共7页

奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业的常发病之一,可由多种因素引起,其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)是常见的致病菌。圣草酚是一种多酚黄酮类化合物,参与炎症等多种疾病的发生发展。MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码RNA,参与多种疾病的发生发展。本... 奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业的常发病之一,可由多种因素引起,其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)是常见的致病菌。圣草酚是一种多酚黄酮类化合物,参与炎症等多种疾病的发生发展。MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码RNA,参与多种疾病的发生发展。本试验探讨圣草酚与miR-128在金葡菌诱导的MAC-T细胞炎症中的作用机理,首先通过RT-qPCR分析显示,金葡菌抑制miR-128的表达,圣草酚促进miR-128的表达;miR-128显著降低金葡菌诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,圣草酚增强其对炎性因子的抑制作用;最后通过双荧光素酶试验证实髓样分化因子(MyD88)是miR-128的靶基因。由于miR-128是通过作用于靶基因进而发挥作用,通过敲低MyD88,结果显示其显著降低TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平,且圣草酚进一步增强对炎性因子在蛋白水平的抑制作用。结果表明,圣草酚通过增强miR-128缓解金葡菌所引起的MAC-T细胞的炎性损伤。 展开更多

关键词 圣草酚 miR-128 mac-t细胞 金黄色葡萄球菌 炎症

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AFB1抑制NrF2信号通路诱导牛乳腺上皮细胞抗氧化应激 被引量：1

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作者 任晓丽 皇甫和平 +3 位作者 杨东辉 宋予震 王俊东 石冬梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2287-2292,共6页

利用不同浓度的黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)作用于牛乳腺上皮细胞(MAC-T)培养24 h后,通过相关检测试剂盒检测细胞内氧化损伤标志物活性氧(reacive oxygen species,ROS)、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧... 利用不同浓度的黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)作用于牛乳腺上皮细胞(MAC-T)培养24 h后,通过相关检测试剂盒检测细胞内氧化损伤标志物活性氧(reacive oxygen species,ROS)、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidation capability,T-AOC)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)方法检测核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,NrF2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO-1)的mRNA相对表达水平;利用蛋白免疫印迹(Western blot)试验检测NrF-2、HO-1和NQO-1的蛋白相对表达水平。结果显示,与0μmol/L相比,10,20μmol/L AFB1处理组显著升高MAC-T细胞内ROS和MDA的含量,降低SOD、T-AOC和GSH-Px的活性。RT-qPCR结果显示,与0μmol/L组相比,不同浓度AFB1组显著下调MAC-T细胞中NrF2、HO-1、NQO-1的mRNA表达水平。Western blot结果显示,10μmol/L AFB1组MAC-T细胞中NrF2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平显著低于0μmol/L组。结果表明,AFB1通过抑制NrF2信号通路诱导牛乳腺上皮(MAC-T)细胞发生氧化应激性损伤。 展开更多

关键词 AFB1 mac-t 抗氧化功能 NrF-2信号通路

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植物雌激素大豆黄酮对牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响 被引量：5

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作者 谢娜娜 闫书平 +2 位作者 张崇昊 曹西月 张源淑 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期2645-2653,共9页

本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓... 本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度;然后采用不同浓度DZ(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)处理MAC-T细胞12、24、36和48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用时间;再用生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,对各处理细胞进行细胞计数,采用Western blot分析细胞内细胞周期相关蛋白、ERβ蛋白相对表达量,并用流式细胞技术分析细胞周期变化。结果表明:1)与对照组相比,2.5和5.0μmol/L DZ处理细胞均能提高MAC-T细胞活力,其中5.0μmol/L DZ处理显著提高细胞活力(P<0.05);而在浓度高于10.0μmol/L后,细胞活力均有下降,因此确定了DZ作用的低、中和高浓度分别为2.5、5.0和10.0μmol/L;而与对照组相比,处理12 h后,5.0μmol/L DZ处理使得细胞活力显著提高(P<0.05),其他2个浓度处理对细胞活力无显著影响(P>0.05),因此确认DZ作用时间为12 h。2)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理使得细胞数量显著增加(P<0.05);2.5μmol/L DZ处理使得细胞数量有所增加,但差异不显著(P>0.05);E2处理使得细胞数量略低于各DZ处理,但差异不显著(P>0.05)。3)Western blot结果显示,与对照组相比,3个浓度DZ处理均可上调增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白D3(CyclinD3)和ERβ的蛋白相对表达量,其中5.0μmol/L DZ处理显著上调PCNA、CyclinD1和ERβ的蛋白相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时极显著提高了S期细胞占比(P<0.01);E2处理与5.0μmol/L DZ处理趋势相同,均极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时提高了S期细胞占比(P>0.05)。结果提示,植物雌激素DZ具有类雌激素样作用,可通过上调ERβ蛋白表达,提高G2-M细胞占比,阻滞细胞周期在S期,从而促进乳腺细胞的增殖。 展开更多

关键词 mac-t细胞 植物雌激素 大豆黄酮 细胞增殖 细胞周期

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丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制 被引量：4

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作者 李林 曹萌 +3 位作者 宫彬彬 赵梅 王婕 张晓辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3221-3230,共10页

通过向脂多糖(LPS)诱导牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)脂代谢紊乱模型中添加不同浓度(2、8、16μmol·L^(-1))的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mLLPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面... 通过向脂多糖(LPS)诱导牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)脂代谢紊乱模型中添加不同浓度(2、8、16μmol·L^(-1))的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mLLPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油(TG)含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组:对照组、LPS处理组、2μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组、8μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组和16μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示:LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降(P<0.05),TG含量极显著下降(P<0.01);不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降(P<0.01)、P-AMPK表达水平显著上升(P<0.05)、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升(P<0.05)、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升(P<0.05);与LPS处理组相比,(2、8、16μmol·L^(-1))丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。 展开更多

关键词 脂多糖 丁酸钠 牛乳腺上皮细胞系(mac-t) 脂代谢紊乱

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血管紧张素转化酶2对Ang Ⅱ诱导的牛乳腺上皮细胞炎症损伤的缓解作用 被引量：1

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作者 朱斌 刘小倩 +2 位作者 刘颖 纪晓霞 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1458-1465,共8页

以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,... 以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,并进行相关性分析;添加ACE 2活性蛋白对AngⅡ诱导损伤的保护作用。结果显示:1)AngⅡ处理MAC-T,细胞上清中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加,抗炎因子IL-10含量显著降低(P<0.05);2)不同浓度AngⅡ处理细胞后,ACE 2蛋白表达均有降低,10-6 mol·L^-1 AngⅡ处理后显著降低(P<0.05);ACE蛋白表达结果相反;ACE 2与AngⅡ浓度之间存在显著负相关;3)添加外源性ACE 2活性蛋白,细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8浓度均有一定程度的下降,IL-10浓度升高。本研究表明ACE 2/ACE轴的失衡是AngⅡ诱导细胞炎性损伤的主要原因。高水平AngⅡ可激活炎症因子促进炎症反应,是促进炎症反应的主要介质,ACE 2可以通过降解AngⅡ,抑制其对炎症反应的上调效应。 展开更多

关键词 血管紧张素转化酶2(ACE 2) 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 牛乳腺上皮细胞(mac-t) 炎性反应

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牛PSMA5基因RNA干扰载体的构建与筛选及在奶牛乳腺上皮细胞中的表达 被引量：4

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作者 迟玉杨 张晶 +6 位作者 徐子娴 高安崇 王秀娜 周长海 牛淑玲 金永成 沈景林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期112-117,131,共7页

设计4条待选的shRNA序列以及1条阴性对照序列,构建RNA干扰载体,然后转染到奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中,最后利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测蛋白酶体α5亚基(PSMA5)在奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中mRNA和蛋白水平的表达... 设计4条待选的shRNA序列以及1条阴性对照序列,构建RNA干扰载体,然后转染到奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中,最后利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测蛋白酶体α5亚基(PSMA5)在奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中mRNA和蛋白水平的表达。结果显示:转染shRNA-1组,shRNA-3组和shRNA-4组的PSMA5基因相对表达量显著低于阴性对照组(P<0.05),且shRNA-4组的PSMA5基因相对表达量最低。结果表明:本试验成功构建并筛选出了PSMA5基因RNA干扰载体,并在奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中成功表达。 展开更多

关键词 PSMA5 共轭亚油酸 MACT RNA干扰载体

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调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定 被引量：8

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作者 郑峻松 吴军 +5 位作者 罗高兴 易绍萱 解志杰 彭双发 朱瑾 陈希炜 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第8期659-660,共2页

目的　建立CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞 (RegulatoryTCells ,Treg)的磁珠 (MACS)分选方法 ,并对分选结果进行纯度鉴定。方法　采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞 ,以抗 CD8 FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8+ T细... 目的　建立CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞 (RegulatoryTCells ,Treg)的磁珠 (MACS)分选方法 ,并对分选结果进行纯度鉴定。方法　采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞 ,以抗 CD8 FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8+ T细胞 ,再以抗 CD2 5 FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD2 5 + T淋巴细胞 ;以FACS流式细胞法检测分选的CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞纯度。结果　MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞 ,分选平均纯度达到73 % ,分选细胞活力为 95 %。结论　MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞 。 展开更多

关键词 调节性T细胞 MACS磁珠分选 移植排斥反应 FACS流式细胞法 纯度鉴定 动物实验

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人外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞分选及扩增方法的建立 被引量：11

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作者 祝丽琼 陈慧 +4 位作者 袁昱 刘梅兰 魏菁 苏芳 张建平 《热带医学杂志》 CAS 2017年第8期996-999,F0003,共5页

目的建立人外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4^+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4^+CD25^+Treg细胞,... 目的建立人外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4^+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4^+CD25^+Treg细胞,用CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4^+CD25^+Treg细胞进行体外扩增培养,在扩增培养的第0、7、14、21天分别进行细胞计数及检测细胞的活性,取扩增培养第0天及第14天细胞行流式细胞术检测扩增前后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3的表达情况。结果正常人外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平占CD4^+T细胞(7.94±1.86)%,MACS能够成功分选出CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞,分选平均纯度达(95.86±0.65)%,细胞活性>95%;以CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4^+CD25^+Treg细胞进行外扩增培养后,细胞有明显扩增。经2周扩增后,细胞扩增倍数达到原细胞数量的(21.33±1.53)倍,扩增后细胞Foxp3的表达由(95.86±0.65)%下降至(93.71±1.30)%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞,体外成功扩增CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞,扩增前后Treg细胞的纯度及表型无明显变化。 展开更多

关键词 调节性T细胞 FOXP3 免疫磁珠分选 体外扩增

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