H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

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作者 张民秀 谢芝勋 +5 位作者 李孟 罗思思 谢志勤 谢丽基 李丹 阮志华 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期45-51,共7页

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;... 为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e蛋白 蛋白表达 单克隆抗体

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基于“5M2E+PDCA+任务成熟度法”的民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理模型研究与应用

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作者 曹启武 《民用飞机设计与研究》 2024年第2期144-152,共9页

当前国内外民用航空型号研制快速发展,而飞机客户服务产品(如手册、地面支援设备、飞行模拟机等)是作为飞机维护、修理和运营的重要指南。因此,构建高效、实用的飞机客户服务产品验证进度管控方法在民用飞机研制阶段具有重要意义。以PDC... 当前国内外民用航空型号研制快速发展,而飞机客户服务产品(如手册、地面支援设备、飞行模拟机等)是作为飞机维护、修理和运营的重要指南。因此,构建高效、实用的飞机客户服务产品验证进度管控方法在民用飞机研制阶段具有重要意义。以PDCA循环理论为基础,对民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理方法开展研究,从人、机、料、法、环、测、其他(5M2E)7个角度构建飞机客户服务产品验证进度管理模型,并引入任务成熟度星级管理法进行过程管控,以飞行模拟机试飞数据采集为案例进行实证分析与应用。结果表明:将5M2E方法、PDCA循环和任务成熟度管理理论相结合,可以使飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证全过程的进度管控目标更明确、资源分配更合理和管理流程更优化,为后续其它型号的飞机客户服务产品提升验证效率和验证效果提供方法指导。 展开更多

关键词 飞行试验 客户服务产品验证 PDCA 5m2e 进度管理

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甲型流感H1N1(2009)流感病毒M2e单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：8

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作者 孙新城 王云龙 +2 位作者 李玉林 景建洲 董彩文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期508-511,524,共5页

目的制备甲型流感H1N1(2009)流感病毒M2e单克隆抗体,并建立检测M2e的双抗体夹心ELISA方法。方法采用碳化二亚胺法将人工合成的M2e多肽分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)进行偶联后作为免疫原,利用杂交瘤细胞技术制备抗A型流感M2e... 目的制备甲型流感H1N1(2009)流感病毒M2e单克隆抗体,并建立检测M2e的双抗体夹心ELISA方法。方法采用碳化二亚胺法将人工合成的M2e多肽分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)进行偶联后作为免疫原,利用杂交瘤细胞技术制备抗A型流感M2e单克隆抗体并进行抗体的鉴定,建立检测M2E的双抗体夹心ELISA方法。结果制备了3株甲型流感H1N1(2009)流感病毒M2e单克隆抗体,经鉴定单克隆抗体均为IGg1a亚型。利用制备的M2e单克隆抗体建立和优化甲型流感M2e检测双抗体夹心ELISA方法,特异性符合临床要求,灵敏度为19ng/ml。结论制备了甲型流感H1N1(2009)M2e单克隆抗体,建立的M2e检测双抗体夹心ELISA方法具有较高的灵敏度和特异性,为研究M2e单克隆抗体作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 甲型流感 m2e 单克隆抗体 检测方法

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禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达 被引量：3

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作者 尚书文 侯继波 +5 位作者 徐公豹 牛明福 王秀清 何家惠 陈溥言 姜平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期17-22,共6页

【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤... 【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体。将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母X-33中,再经甲醇诱导后,通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定融合蛋白。之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性。【结果】成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc,并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与M2e阳性血清反应。动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体,具有良好的免疫原性。【结论】融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e基因 鸡IGG Fc基因 巴斯德毕赤酵母

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A型禽流感病毒M2e重组T7噬菌体疫苗构建及免疫原性研究 被引量：2

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作者 徐海 王义伟 +2 位作者 唐应华 郑其升 侯继波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期376-381,共6页

构建展示A型禽流感病毒M2e多肽的重组T7噬菌体,检测其对SPF鸡的免疫保护效果。比对GenBank近期发表的A型禽流感病毒M2e基因序列进行人工合成并重复至两拷贝,将其克隆到T7Select 415-1b噬菌体多克隆位点,构建重组噬菌体T7-M2e。经PCR鉴... 构建展示A型禽流感病毒M2e多肽的重组T7噬菌体,检测其对SPF鸡的免疫保护效果。比对GenBank近期发表的A型禽流感病毒M2e基因序列进行人工合成并重复至两拷贝,将其克隆到T7Select 415-1b噬菌体多克隆位点,构建重组噬菌体T7-M2e。经PCR鉴定并序列测定筛选阳性重组噬菌体,SDS-PAGE和Westernblot检测重组噬菌体表面M2e多肽。重组噬菌体以1×1010pfu/只剂量免疫SPF鸡,免疫后不同时间段采血通过ELSIA检测血清中抗M2e抗体,免疫荧光检测血清抗体与H9亚型禽流感病毒的结合能力,并以200个EID50/只剂量进行攻毒保护效率检测。成功构建重组噬菌体T7-M2e,插入两拷贝M2e基因获得表面展示,并与M2e抗体有免疫反应活性。噬菌体疫苗免疫后均产生抗M2e抗体,其抗血清能跟病毒粒子特异性结合,攻毒保护率达4/5(80%)。获得了展示禽流感病毒M2e多肽的重组噬菌体,噬菌体疫苗免疫鸡产生较高血清抗体并提供攻毒保护,为新型通用禽流感疫苗研制提供新思路。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e T7噬菌体 噬菌体疫苗

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禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立 被引量：3

6

作者 郑其升 徐公豹 +2 位作者 邓碧华 何家惠 侯继波 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第3期77-81,共5页

本研究人工合成禽流感病毒H5N1亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周。所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5... 本研究人工合成禽流感病毒H5N1亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周。所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1∶400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础。根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1∶100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1∶13 500和1∶20 500。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e 多肽 间接ELISA

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重组蛋白ASP-1对高致病性禽流感M2e疫苗分子的佐剂活性 被引量：1

7

作者 俞建萍 赵光宇 +7 位作者 肖文珺 郭彦 孙世惠 寇志华 于虹 温晶 何后军 周育森 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期190-195,共6页

目的探讨重组蛋白ASP-1对高致病性禽流感M2e疫苗分子的免疫佐剂作用。方法在大肠杆菌原核表达系统中获得融合了pET32(+)表达载体蛋白trxA和M2e三联体的重组蛋白TrxA-M2e3作为高致病性禽流感M2e疫苗分子;在大肠杆菌中截短表达盘尾丝虫活... 目的探讨重组蛋白ASP-1对高致病性禽流感M2e疫苗分子的免疫佐剂作用。方法在大肠杆菌原核表达系统中获得融合了pET32(+)表达载体蛋白trxA和M2e三联体的重组蛋白TrxA-M2e3作为高致病性禽流感M2e疫苗分子;在大肠杆菌中截短表达盘尾丝虫活化相关蛋白ASP,获得截短片段ASP-1作为佐剂蛋白。将纯化后的重组蛋白TrxA-M2e3和ASP-1混合或者单独使用,免疫BALB/c小鼠后检测血清中M2e抗体水平。使用不同进化分支H5N1病毒对免疫小鼠进行致死性攻击,检测交叉免疫保护效果。结果获得了纯化的重组蛋白TrxA-M2e3和ASP-1;与TrxA-M2e3单独免疫组相比,应用佐剂蛋白ASP-1可显著提高免疫小鼠血清中M2e特异性IgG抗体滴度(P<0.05)。在不同进化分支H5N1病毒的致死性攻击后,应用ASP-1与TrxA-M2e3联合免疫小鼠的肺组织病毒复制得到有效抑制,免疫小鼠全部存活。而其它免疫组小鼠全部死亡。结论 M2e是发展新型禽流感疫苗应对病毒变异的理想靶抗原分子,而重组蛋白ASP-1可以为一种新型佐剂在M2e疫苗分子诱导交叉免疫保护中发挥关键作用。 展开更多

关键词 高致病性禽流感 m2e ASP-1 疫苗 佐剂

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M2e合成肽流感通用疫苗的研究 被引量：2

8

作者 杨馥如 于海 +2 位作者 马继红 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第1期1-7,共7页

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标。因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成... M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标。因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成肽疫苗免疫小鼠,评价其免疫原性及异源攻毒保护效力。ELISA实验结果表明,该疫苗能刺激机体产生高水平的抗M2e特异性IgG抗体;细胞因子IL-4的检测进一步说明了其能诱导产生高的体液免疫应答水平,ELISPOT实验从IL-4和IFN-γ两个方面分别说明了该疫苗不仅可以诱导高的体液免疫应答,而且能刺激机体产生高水平的细胞免疫应答。对免疫小鼠攻H9N2,通过肺病毒分离滴定和肺组织病理切片等方法检测攻毒保护效果,结果均表明,M2e分支肽疫苗能对异源病毒的攻击产生较好的保护效力。上述结果为流感通用疫苗的研究提供了一种参考思路。 展开更多

关键词 m2e 通用疫苗 免疫交叉保护

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甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 被引量：1

9

作者 牟旭鹏 韦安慧 +2 位作者 申茉函 孔宁 颜炜群 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期617-619,共3页

目的将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株。方法通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI和KpnI酶切消化后连接,... 目的将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株。方法通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI和KpnI酶切消化后连接,构建真核表达载体pPICZα-HSA/M2e,线性化后电转化毕赤酵母X-33。用PCR法筛选Zeocin抗性阳性的克隆,SDS-PAGE和Western印迹法筛选高表达HSA/M2e菌株。结果经RT-PCR法克隆的HSA基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致,构建的pPICZα-HSA/M2e真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆。SDS-PAGE和Western印迹分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HSA/M2e,分子量约为68kD。结论成功构建了分泌表达重组HSA/M2e融合蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 m2e 血清白蛋白 毕赤酵母

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甲型流感病毒M2e与CtB基因融合表达及其免疫特性初步研究 被引量：1

10

作者 杨晓芳 江滟 +4 位作者 李婉宜 邝玉 蒋忠华 王丰平 李明远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-266,共4页

目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)... 目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)中,再转化E.coli JM109。将酶切鉴定、PCR扩增及序列鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1a(+)-M2e/CtB。用KEGEN TRANSⅢ阳离子聚合物将重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB转染NIH3T3细胞,经免疫荧光、RT-PCR产物序列分析、Western blot检测其稳定表达产物。结果:重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB含完整的M2e和CtB基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。重组质粒转染NIH3T3细胞后获得了有效表达,并且稳筛株细胞裂解物和上清均能用抗霍乱毒素抗体和抗流感病毒抗体检测到Mr约18000的蛋白条带。结论:成功构建了真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,初步证明其在体外表达的重组蛋白可分泌至胞外,且有M2e和CTB的双特异反应原性和免疫原性,为流感病毒核酸疫苗的进一步研究奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 m2e 黏膜免疫佐剂 霍乱毒素B亚单位 融合蛋白

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A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)基因的原核表达和免疫原性分析 被引量：1

11

作者 张新涛 刘明 +4 位作者 杜金玲 刘春国 李洪涛 孙恩成 石薇琳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期357-362,共6页

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化... 为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,表达出一分子质量为60 ku的可溶性融合蛋白(MBP-3M2e),与预期值相符,该蛋白表达量约占菌体表达量的59.8%。间接免疫荧光和间接ELISA检测结果显示,用纯化后的融合蛋白免疫的SPF鸡血清可与流感病毒的M2蛋白发生反应,且其抗体效价较高,表明纯化后的重组融合蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 A型禽流感病毒 m2e基因 原核表达 免疫原性

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A型流感病毒M2e单克隆抗体的研制及鉴定 被引量：1

12

作者 王云龙 路晓娅 +4 位作者 李智涛 王国强 徐桂超 王真 李玉林 《实用预防医学》 CAS 2009年第3期660-662,共3页

目的制备A型流感M2e(2-24)单克隆抗体,并进行初步研究。方法以M2e-OVA免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,经有限稀释法克隆化及筛选,获得抗M2e(2-24)的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其进行纯化,分析和鉴定。结果获得3... 目的制备A型流感M2e(2-24)单克隆抗体,并进行初步研究。方法以M2e-OVA免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,经有限稀释法克隆化及筛选,获得抗M2e(2-24)的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其进行纯化,分析和鉴定。结果获得3株稳定分泌M2e单克隆抗体的杂交瘤细胞株L1,L2,L3,其免疫球蛋白亚类均为IgG1,腹水效价为105以上。结论成功制备了抗M2e(2-24)的特异性单克隆抗体,为研制具有交叉保护作用的流感疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 A型流感病毒 m2e 单克隆抗体

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M2ES急性毒性、体外溶血和全身主动过敏试验研究 被引量：1

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作者 耿兴超 周代福 +6 位作者 占顺利 高磊 王超 彭茜 李明 杨艳伟 李波 《中国药事》 CAS 2016年第7期685-690,共6页

目的:根据新药申报要求,研究聚乙二醇修饰重组人血管内皮抑制素(M2ES)的急性毒性、制剂安全性和过敏性,为临床人用剂量设计和毒副反应监测等提供参考依据。方法:给BALB/c小鼠单次静脉注射375 mg·kg^(^(-1))的M2ES注射液,观察给药... 目的:根据新药申报要求,研究聚乙二醇修饰重组人血管内皮抑制素(M2ES)的急性毒性、制剂安全性和过敏性,为临床人用剂量设计和毒副反应监测等提供参考依据。方法:给BALB/c小鼠单次静脉注射375 mg·kg^(^(-1))的M2ES注射液,观察给药前后小鼠临床症状、体重变化和大体病理学变化。采用体外试管法,观察不同浓度M2ES对绵羊红血球细胞溶血的影响。分别于1 d、3 d和5 d给Hartley豚鼠静脉注射2.4 mg·m L^(-1)和12 mg·m L^(-1)的M2ES致敏,末次给药后14 d激发,观察M2ES引起的过敏反应症状并进行评分。结果:小鼠给药前后临床症状观察、体重变化和主要组织脏器的大体病理学检查均未见明显异常变化。M2ES在0.20、0.16和0.12 mg·m L^(-1)浓度下能够引起体外红细胞出现不同程度的溶血。M2ES高、低剂量组的全部豚鼠均未出现明显的过敏反应。结论:在本试验条件下,BALB/c小鼠单次静脉注射M2ES的未见毒性反应剂量为375 mg·kg^(-1)。M2ES在0.08 mg·m L^(-1)及以下浓度不引起体外红细胞溶血,在2.4和12.0 mg·m L^(-1)浓度时不能引起豚鼠产生全身性过敏反应。 展开更多

关键词 m2eS BALB/C小鼠 急性毒性 体外溶血 豚鼠 全身主动过敏反应

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4种禽流感病毒M2e多肽的串联表达和小鼠口服免疫效果

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作者 罗斌 钱凯 +4 位作者 徐万祥 唐海平 季朝能 谢毅 顾少华 《微生物与感染》 2018年第4期220-226,共7页

为研制广谱性禽流感口服疫苗,将4种禽流感病毒特异的基质蛋白2胞外区(matrix protein 2ectodomain,M2e)多肽与黏膜免疫佐剂CTA1-DD串联,原核表达并纯化CTA1DD-AVI4M2e融合蛋白。以200μg融合蛋白CTA1DD-AVI4M2e口服免疫BALB/c小鼠,结果... 为研制广谱性禽流感口服疫苗,将4种禽流感病毒特异的基质蛋白2胞外区(matrix protein 2ectodomain,M2e)多肽与黏膜免疫佐剂CTA1-DD串联,原核表达并纯化CTA1DD-AVI4M2e融合蛋白。以200μg融合蛋白CTA1DD-AVI4M2e口服免疫BALB/c小鼠,结果显示实验组肠液IgA抗体效价和血清IgG抗体效价比对照组显著升高,血清中特异性IgG抗体效价达约360倍。分割的3段肠样中:第1段浸出液IgA抗体效价约为360倍,第2段约为120倍,第3段约为9 720倍。结果表明,本研究制备的CTA1DDAVI4M2e具有显著口服免疫效果,为后续研究提供了基础。 展开更多

关键词 CTA1DDGAVI4m2e 口服疫苗 基质蛋白2胞外区(m2e) IGA抗体 IGG抗体

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基于“4M2E+熵权法”的化工企业碳审计评价指标体系构建 被引量：2

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作者 郑国芳 徐荣华 朱晓蓉 《国际商务财会》 2023年第2期57-66,75,共11页

化工行业是国民经济的重要支柱,而其碳排放存在着“排放总量有限但强度突出”的特点。因此,构建合理、有效的化工企业生产碳审计评价指标体系在化工行业实现“双碳”目标之路上具有重大意义。文章以审计相关理论为基础,对化工企业碳排... 化工行业是国民经济的重要支柱,而其碳排放存在着“排放总量有限但强度突出”的特点。因此,构建合理、有效的化工企业生产碳审计评价指标体系在化工行业实现“双碳”目标之路上具有重大意义。文章以审计相关理论为基础,对化工企业碳排放进行追本溯源,从人员、机器、原料、方法、环境、经济(4M2E)6个角度构建碳审计评价指标体系,并利用熵权法赋权重,以JH集团为案例进行实证分析与应用,同时基于分析结果提出“节能减碳”建议,助力企业实现绿色、低碳、可持续发展。 展开更多

关键词 碳审计 4m2e 熵权法 评价指标体系 化工企业

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展示M2e表位的颗粒疫苗制备及其免疫原性分析

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作者 张国广 李东霄 +2 位作者 张辉煌 董美 陈亮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期772-777,共6页

疫苗接种是控制禽流感发生的主要措施之一,利用病毒保守的M2蛋白开发具有交叉免疫保护力的基因工程亚单位疫苗。将M2蛋白的膜外区(M2e表位)与HBcAg采用重叠延伸PCR技术构建融合基因M2eHBc+,然后将融合基因进行原核表达并检测了表达产物... 疫苗接种是控制禽流感发生的主要措施之一,利用病毒保守的M2蛋白开发具有交叉免疫保护力的基因工程亚单位疫苗。将M2蛋白的膜外区(M2e表位)与HBcAg采用重叠延伸PCR技术构建融合基因M2eHBc+,然后将融合基因进行原核表达并检测了表达产物的动物免疫效果。结果表明,融合基因M2eHBc+能在原核系统中高效表达,表达蛋白能够被M2抗体识别,具有良好的抗原性,纯化出的重组蛋白可以自主包装成病毒样颗粒结构,能诱导小鼠产生M2e特异性抗体。M2e表位在重组蛋白颗粒中得到有效展示,为开发具有交叉保护力的禽流感亚单位疫苗打下了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e表位 乙肝核心抗原基因 免疫原性

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LTB融合禽流感病毒M2e基因在毕氏酵母中的表达

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作者 张国广 张辉煌 +1 位作者 董美 陈亮 《云南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第3期193-197,共5页

禽流感病毒一直是家禽和家畜健康养殖的巨大威胁,之前的研究表明,原核系统中表达的LTB和M2eHBc+融合基因的产物能有效诱导免疫动物对禽流感病毒M2e多肽产生特异性的粘膜免疫应答.酵母作为生物反应器应用于生物制品生产具有独特的优点.... 禽流感病毒一直是家禽和家畜健康养殖的巨大威胁,之前的研究表明,原核系统中表达的LTB和M2eHBc+融合基因的产物能有效诱导免疫动物对禽流感病毒M2e多肽产生特异性的粘膜免疫应答.酵母作为生物反应器应用于生物制品生产具有独特的优点.本研究构建了pPIC9K-LBM2eHBc+酵母表达载体并对酵母GS115进行了遗传转化,甲醇诱导表达结果表明LBM2eHBc+融合基因在酵母细胞中得到表达,表达出的融合蛋白能够被M2抗体识别. 展开更多

关键词 禽流感病毒 LTB m2e表位 毕氏酵母 表达

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小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究

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作者 冯伟 李婉宜 +7 位作者 李明远 张强 巩天祥 刘冯欢 罗俊 邝玉 王保宁 蒋忠华 《西部医学》 2010年第3期400-402,405,共4页

目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA... 目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e。鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌。免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达。结果融合基因mBD6-M2e真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖。免疫小鼠细胞因子表达改变。结论融合基因mBD6-M2e真核表达载体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。 展开更多

关键词 β-防御素6 甲型流感病毒 mBD6-m2e融合基因 淋巴细胞增殖实验

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流感病毒M2e与白喉毒素无毒突变体CRM197融合蛋白的抗原性和免疫原性分析 被引量：5

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作者 李琼 王凯航 +6 位作者 周立志 陈婷婷 张晓 陈毅歆 顾颖 夏宁邵 李少伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期483-493,共11页

流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性。流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一。白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可... 流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性。流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一。白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可增强小分子抗原的免疫原性,商业化的肺炎球菌疫苗采用CRM197结合形式提高多糖分子的免疫原性。本实验通过重组蛋白融合的方式,将M2e与CRM197(aa 1~535)、CRM197-N190(aa 1~190)、CRM197-N389(aa 1~389)的C端或N端进行融合表达,并考察融合蛋白的反应活性以及免疫原性。融合蛋白中的M2e和CRM197均具有反应活性;超速离心分析和四聚体特异构象单抗反应均表明融合蛋白(CRM197-N190)-M2e及M2e-(CRM197-N190)主要以类似M2e天然构象的四聚体形式存在;融合蛋白可与多株流感M2e特异性单抗以及CRM197特异性单抗反应,M2e融合至CRM197N末端形成的重组蛋白的反应活性高于C端融合蛋白;相比融合GST,与CRM197-N190的融合显著增强了M2e蛋白的免疫原性,为流感通用疫苗研究提供了新思路。 展开更多

关键词 流感病毒 m2e蛋白 CRM197 抗原性 免疫原性

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禽流感病毒M2e多拷贝重组蛋白的原核表达及其免疫原性分析

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作者 何雯雯 付钰广 +3 位作者 吉艳红 刘宗梁 魏建忠 朱启运 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期941-945,共5页

为了获得流感病毒M2e多拷贝重组蛋白并分析其免疫原性,通过比对GenBank中H5和H9亚型流感病毒的M2基因,选择其N端由23个氨基酸组成的胞外域（M2e）序列进行合成,并将4个M2e序列与3个位于HA246~260T/B细胞表位交叉串联,在其末端添加酵母... 为了获得流感病毒M2e多拷贝重组蛋白并分析其免疫原性,通过比对GenBank中H5和H9亚型流感病毒的M2基因,选择其N端由23个氨基酸组成的胞外域（M2e）序列进行合成,并将4个M2e序列与3个位于HA246~260T/B细胞表位交叉串联,在其末端添加酵母转录因子,然后克隆到pGEX-6P-1载体中,表达重组蛋白。SDS-PAGE和蛋白免疫印迹试验分析表明,重组蛋白成功表达,而后纯化获得高纯度产物。经纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合后肌肉注射BALB/c小鼠,二免2周后采集小鼠血清并用ELISA检测M2e抗体水平;同时分离脾细胞并用ELISPOT检测特异性T细胞的数量。ELISA结果表明重组蛋白能诱导免疫组小鼠产生高水平的M2e特异性抗体;ELISPOT分析显示,在M2e肽段的刺激下,免疫组小鼠每1×106个脾淋巴细胞中的斑点形成数达150个。结果表明,成功表达的重组蛋白具有良好免疫原性,为广谱型流感病毒亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 m2e 重组蛋白 免疫原性

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